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1、1 第七章体液蛋白质检验 人类白蛋白分子 2 本章内容概要 第二节体液蛋白质测定 第一节概述 3 1 掌握血浆蛋白质的组成 功能及分类 个别血浆蛋白质 前白蛋白 白蛋白 的来源和生理功能 血清总蛋白和白蛋白的测定方法和原理 2 熟悉急性时相反应蛋白的概念和种类 血清球蛋白和纤维蛋白原的测定方法 3 了解其他蛋白质的来源和生理功能 尿液蛋白和脑脊液蛋白的检测 本章教学要求 第一节概述 4 一 血浆蛋白质的分类和功能 组成 种类 1000种500种200种含量 gmgg来源 肝脏是蛋白质主要的加工厂 一 血浆蛋白质的组成 功能及分类 6 营养作用 修补组织蛋白 维持血浆胶体渗透压 主要是白蛋白 作
2、为PH缓冲系统的一部分 酸性或碱性蛋白质 运输作用 作为激素 维生素 脂类 代谢产物 离子 药物等的载体 体液免疫防御系统 作为免疫球蛋白与补体等免疫分子 催化作用 酶的本质 代谢调控作用 作为底物 酶或中间产物抑制或激活组织蛋白酶 参与凝血与纤维蛋白溶解 除 因子外均可 血浆蛋白质的功能 血浆蛋白质的分类 7 7 分离方法 盐析法 白蛋白 球蛋白 pH7 0半饱和的硫酸铵溶液 电泳法 醋酸纤维素薄膜电泳 6种 琼脂糖凝胶电泳 13种 聚丙烯酰胺凝胶电泳 30种 SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳 300种 分辨率增高 纤维蛋白原 醋酸纤维素薄膜 醋纤膜电泳或琼脂糖电泳 5个成分清蛋白 1球蛋白
3、 2球蛋白 球蛋白 球蛋白分辨率高时 可有7个成分有 1和 2 2中也可有两条聚丙烯酰胺凝胶电泳 可以分出30多种蛋白质 醋纤膜电泳或琼脂糖电泳 5个成分 清蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白 2 电泳分类法 是临床实验室常用的血浆蛋白质电泳方法 分辨率高时 可有7个成分有 1和 2 2中也可有两条聚丙烯酰胺凝胶电泳 可以分出30多种蛋白质 9 3 功能分类法 1 运输载体类血浆脂蛋白 包括CM VLDL LDL HDL等前清蛋白与清蛋白甲状腺素结合球蛋白皮质素结合球蛋白类固醇激素结合球蛋白视黄醛结合蛋白转铁蛋白触珠蛋白血色素结合蛋白铜蓝蛋白 2 蛋白酶抑制物 包括 1 抗胰蛋白酶 1
4、抗糜蛋白酶 2 巨球蛋白等6种以上 3 血清酶类 血浆固有酶如LCAT等组织细胞少量释放的细胞内酶细胞破裂而进入血循环的细胞内酶 4 蛋白类激素 胰岛素 胰高血糖素 生长激素等 5 凝血蛋白类 6 免疫球蛋白类 7 补体蛋白类 2 蛋白酶抑制物 包括 1 抗胰蛋白酶 1 抗糜蛋白酶 2 巨球蛋白等6种以上 3 血清酶类 血浆固有酶如LCAT等组织细胞少量释放的细胞内酶细胞破裂而进入血循环的细胞内酶 4 蛋白类激素 胰岛素 胰高血糖素 生长激素等 5 凝血蛋白类 6 免疫球蛋白类 7 补体蛋白类 还有许多种类的蛋白质未被认识 还有许多种类的蛋白质未被认识 2 功能分类法 1 作为运载蛋白2 组织
5、蛋白酶抑制物3 在血浆中起催化作用的酶4 参与代谢调控作用的蛋白质和肽类激素5 参与凝血与纤维蛋白溶解6 组成体液免疫防御系统 Ig与补体 所有血浆蛋白质能维持血浆胶体渗透压组成血液pH缓冲系统 二 血浆蛋白质的功能 生物化学 急性时相反应 acutephasereaction APR 血浆蛋白质对急性炎症和组织损伤的非特异性反应 此时许多蛋白质 如 1 抗胰蛋白酶 1 酸性糖蛋白 结合珠蛋白 铜蓝蛋白 C4 C3 纤维蛋白原和C 反应蛋白等浓度显著升高或升高 而少数蛋白质如前清蛋白 清蛋白 转铁蛋白则出现相应下降 急性时相反应蛋白 acutephasereactiveprotein APP
6、对急性炎症和组织损伤起非特异反应从而出现浓度变化的血浆蛋白质 增加的蛋白质称为正向APP 下降的蛋白质称为负向APP 12 1 急性时相反应 三 影响血浆蛋白质浓度的因素 机体哪些情况会出现急性时相反应 急性细菌性感染如急性肺炎 链球菌感染性肾炎 急性非特异性炎症如风湿性关节炎 类风湿性关节炎 风湿性心脏病等 急性心肌梗死 恶性肿瘤 手术 创伤 13 APR的机制 炎症损伤部位释放的细胞因子 包括白介素 肿瘤坏死因子 和 干扰素以及血小板活化因子等 引发肝细胞中上述蛋白质合成量的改变 正向APP是机体防御机制的一个部分 如 增加的蛋白酶抑制剂控制组织中的酶活性触珠蛋白保护从破坏红细胞中释放的H
7、bC反应蛋白等可活化补体负向APP多作为营养蛋白 此时合成减少 可为合成正向APPs提供更多的氨基酸原料 14 APR的时相 C 反应蛋白 首先升高 1 酸性糖蛋白 12小时内也升高 1 抗胰蛋白酶 触珠蛋白 C4和纤维蛋白原然后升高C3和铜蓝蛋白 最后是升高通常在2 5天内这些APPs达到最高值 15 测定APP的临床意义 帮助监测炎症的发生 变化和观察治疗反应 尤其是那些升高最早和最多的蛋白质 16 30 二 血清蛋白质电泳组分的临床分析 血浆蛋白质和血清蛋白质有何不同 血浆 为生理状况血清 为常用检测标本 血浆蛋白质和血清蛋白质有何不同 血浆 为生理状况血清 为常用检测标本 31 一 血
8、清蛋白质电泳的正常组分及其含量 清蛋白 57 68 1球蛋白 1 0 5 7 2球蛋白 4 9 11 2 球蛋白 7 13 球蛋白 9 8 18 2 醋纤膜电泳正常百分含量清蛋白 57 68 1球蛋白 1 0 5 7 2球蛋白 4 9 11 2 球蛋白 7 13 球蛋白 9 8 18 2 醋纤膜或琼脂糖电泳正常区带 区带图谱 扫描图谱 kk 1 肾病综合征 2 肝硬化 正常图谱 典型的 桥 不典型 桥 IgG型 IgA型 3 多发性骨髓瘤 2 典型的异常电泳图谱及其扫描曲线 四 球蛋白增多与M蛋白 Ig多克隆性增多 区带呈弥散性升高见于反复或慢性感染 自身免疫性疾病 肝细胞疾病或寄生虫感染 I
9、g单克隆性增多 M蛋白 区带局部有深染窄带浆细胞病 尤其恶性浆细胞病时 异常浆细胞单克隆增殖 产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段 病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白 Ig多克隆性增多 区带呈弥散性升高见于反复或慢性感染 自身免疫性疾病 肝细胞疾病或寄生虫感染 Ig单克隆性增多 M蛋白 区带局部有深染窄带浆细胞病 尤其恶性浆细胞病时 异常浆细胞单克隆增殖 产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段 病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白 22 23 二 血浆蛋白质 一 前白蛋白 PA 二 白蛋白 ALB 三 1 酸性糖蛋白 AAG 四 甲胎蛋白 AFP 五 结合珠蛋白 Hp 六 2 巨球蛋白 AMG
10、 七 铜蓝蛋白 CER CP 八 转铁蛋白 TRF 九 2 微球蛋白 BMG 十 C 反应蛋白质 CRP 24 结构 MW 54000 四个相同亚基构成的四聚体 理化性质 p 4 7 肝细胞合成 半寿期12小时 测定方法 免疫比浊法 免疫扩散技术 25 功能 营养指标 载体功能 甲状腺素 维生素 临床意义 1 作为营养不良的早期指标 2 作为肝功能不全的指标 比Alb更灵敏 3 负性急性时相反应蛋白 急性炎症 恶性肿瘤 肝硬化及肾炎等情况下 PA迅速降低 参考值 0 18 0 45g L 26 急性时相反应蛋白 27 28 29 结构 585个aa残基构成的单链多肽 MW 66458 含17个
11、二硫键 理化性质 pI 4 5 8 肝细胞合成但不储存 半衰期为15 19天 占总蛋白的40 60 p 7 4时带负电 测定方法 色素结合法 溴甲酚绿 BCG 溴甲酚紫 BCP 盐析等 二 白蛋白 ALB 急性时相反应蛋白 30 功能 营养作用 载体功能 高亲和力 维持血浆渗透压和正常p 值 临床意义 合成受食物影响 敏感性较低 降低 在营养不良 肝功不全 急慢性肝疾病时 增高 少见 假性升高 参考值 35 50g 31 功能 蛋白酶抑制物 具有90 的抑制蛋白酶活力 如糜蛋白酶 弹性蛋白酶 但此抑制作用有明显的p 依赖性 临床意义 降低 血浆AAT仅见于胎儿呼吸迫综合症 升高 炎症 术后 某
12、些激素治疗后 参考值 0 83 1 99g L 32 结构 181个aa残基构成的单链多肽 MW 4万 含45 的糖 其中唾液酸占11 12 理化性质 pI值2 7 3 5 肝合成 脓毒症时粒细胞和单核细胞及某些肿瘤组织也可合成 位于 1 球蛋白区带 测定方法 免疫化学法 扩散 浊度 化学法 间接法 ELISA法等 三 1 酸性糖蛋白 AAG 急性时相反应蛋白 33 功能 与免疫防御功能有关 机制不详 抑制血小板凝集影响胶原纤维形成 参与脂类运输 临床意义 升高 急性炎症 组织损伤 风湿 肿瘤 AMI 溃结时 降低 营养不良降低 严重肝损伤和雌激素作用 参考值 25 2 0g L 34 结构
13、590个aa残基构成的单链多肽 MW 6 5万 万 含4 的糖 理化性质 pI值 7 8 在白蛋白和 1 球蛋白之间 胎儿肝 卵黄囊合成 成人量微 升高由于肿瘤细胞合成 测定方法 免疫化学法 扩散 火箭电泳 ELISA等 四 甲胎蛋白 AFP 35 功能 胎儿血浆主要蛋白质 调节肝细胞生长和脑细胞发育 抑制细胞和体液的免疫反应 维持正常妊娠 防止母婴排斥 临床意义 胎儿产前监测 羊水或母血 增高 原发性肝癌患者诊断和鉴别 80 原发增高 其他癌症也可见增高 参考值 20 100 g L 成人 5 g L 新生儿 36 结构 两对肽链形成四聚体 有变异体 理化性质 肝合成 pI值为4 1 电泳位
14、a2 球蛋白区带测定方法 电泳法 免疫化学法 扩散 浊度 化学法等 五 结合珠蛋白 Hp 急性时相反应蛋白 37 功能 与红细胞中释出自由Hb结合 防止Hb从尿中丢失保存铁 急性溶血后一周再生恢复 高效的过氧化物酶 需铁细菌的天然抑菌剂 临床意义 升高 急性时相反应 降低 血管内溶血时 雌激素作用 参考值 0 5 2 2g L 38 结构 MW 62 80万 分子量最大 由四个相同的亚基组成 含糖量约 理化性质 肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成 半寿期5天 测定方法 免疫化学等 六 2 巨球蛋白 AMG 不属于急性时相反应蛋白 39 功能 与多种分子和离子结合 影响蛋白水解酶活性 主要的蛋白酶抑
15、制剂具有选择性保护某些酶的作用 临床意义 婴幼儿及儿童比成人高 升高 雌激素 低蛋白血症尤其是肾病综合征时 可显著升高以维持血浆胶体渗透压 降低 胰腺炎及前列腺癌时 参考值 1 31 2 93g L 40 结构 MW 12 16万 1046个aa残基构成的单链多肽 含糖约 每分子铜蓝蛋白可结合 个铜原子 理化性质 肝合成 巨噬细胞和淋巴细胞合成少量 pI值为4 4 具遗传基因多态性 测定方法 免疫化学 扩散或比浊 等 七 铜蓝蛋白 CER CP 急性时相反应蛋白 41 功能 具氧化酶活性且起抗氧化剂作用 铜的无毒代谢库临床意义 增加 感染 创伤 肿瘤 降低 营养不良 严重肝病及肾综 协助诊断W
16、ilson病 肝豆状核变性 参考值 0 21 0 53g L 42 结构 MW 7 7万 单链糖蛋白 含糖约 理化性质 肝细胞合成 pI值为5 5 5 9 半寿期7天 可逆结合多价离子如Fe Cu Zn Co等 一分子TRF可结合两个三价铁 测定方法 免疫扩散法 放免法和免疫比浊法等 八 转铁蛋白 TRF Tf 急性时相反应蛋白 43 功能 运输铁 临床意义 血TRF浓度受铁供应调节 缺铁TRF升高 铁治疗后恢复 可用于贫血的诊断 缺铁性低色素性贫血TRF升高 再障时TRF正常或者降低 和对治疗的监测 降低 急性时相反应 慢性肝病 营养不良及蛋白丢失时 升高 妊娠或雌激素会使其降低 缺铁性低色素贫血 参考值 2 5 4 3g L 成人 1 30 2 75g L 新生儿 44 结构 MW 11800 100个aa残基构成的单链多肽 分子中含一对二硫键 不含糖 理化性质 pI值为5 7 淋巴细胞合成 存在细胞表面 特别是淋巴和肿瘤细胞 释放入血循环 半衰期107分钟 几乎由肾小管回收 测定方法 放射免疫化学等 九 2 微球蛋白 BMG 2020 5 20 45 可编辑 46 功能 分子量小
