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1、食品安全国家标准食品营养强化剂 多聚果糖1 范围本标准适用于以菊苣为原料，采用酸/碱处理，过滤去除蛋白质、矿物质及短链果聚糖，蒸发干燥或喷雾干燥等工艺得到的食品营养强化剂多聚果糖。2 分子式和结构式多聚果糖是果糖单元通过-2,1-键联接而成并以葡萄糖单元终止的单元总数为5至60的碳水化合物。2.1 分子式（C6-H12-O6）-（C6-H10-O5）n-2 -（C6-H10-O5）（n=5-60）2.2 结构式3 技术要求3.1 感官要求：应符合表1 的规定。表1 感官要求项 目要 求检验方法色泽白色或微黄色取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下观察状态无定型粉末气味具有特有的滋、气
2、味，无异味杂质无肉眼可见杂质3.2 理化指标：应符合表2的规定。表2 理化指标项 目指 标检验方法pH（10%溶液）4.57.0GB/T 20885水分 / w/%5GB 5009.3（第一法）灰分（以干基计），w/%0.2GB 5009.4多聚果糖（DP5），w/% 94.5附录A平均聚合度（DP） 23 附录A葡萄糖果糖蔗糖， w/% 0.5附录A铅（以Pb计），mg/kg 0.15GB 5009.12总砷（以As计），mg/kg 0.5GB 5009.113.3 微生物指标：应符合表3的规定。表3 微生物指标项 目指 标检验方法霉菌，CFU/g 20GB 4789.15酵母菌，CFU/g
3、 20GB 4789.15大肠菌群，CFU/g10GB 4789.3金黄色葡萄球菌 / 25g不得检出GB 4789.10沙门氏菌 / 25g不得检出GB 4789.4附 录 A多聚果糖（DP5）、平均聚合度（DP）、葡萄糖果糖蔗糖检验方法A.1 一般规定除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682中规定的二级水。所用溶液除另有说明外，均为水溶液。A.2 试剂和材料A.2.1 0.2 mol/L醋酸。A.2.2 0.2 mol/L醋酸钠。A.2.3 pH 4.5醋酸缓冲液：取0.2 mol/L醋酸28.0 mL，0.2 mol/L醋酸钠22.0 mL混合，用水稀至100
4、mL。A.2.4 0.05 mol/L HCl溶液。A.2.5 0.05 mol/L KOH溶液。A.2.6 淀粉葡萄糖苷酶，用于将淀粉酶解为葡萄糖，其中葡萄糖、果糖和蔗糖含量应小于0.02 %，不用时4 冰箱保存。A.2.7 果糖酶，用于将多聚果糖酶解为葡萄糖和果糖，其中葡萄糖、果糖和蔗糖含量应小于0.005 %，不用时4 冰箱保存。A.2.8 乙腈。A.2.9 葡萄糖：d（+）无水葡萄糖。A.2.10 果糖：右旋果糖。A.2.11 蔗糖。A.2.12 糖标准储备液：分别称取经96 2 干燥4 h后的糖标准品2.00 g（葡萄糖、果糖和蔗糖）放入50 mL容量瓶中，加水搅拌使之完全溶解，定容
5、至刻度，得40.0 mg/mL糖标准储备液。A.2.13 工作标准液：将糖标准储备液分别用水稀释至10.0 mg/mL、7.00 mg/mL、4.00 mg/mL、2.00 mg/mL和1.00 mg/mL的溶液。A.3 仪器和设备A.3.1 分析天平，感量1 mg和0.01 g。A.3.2 pH计，精确度0.05。A.3.3 恒温水浴锅。A.3.4 高效液相色谱仪（具有示差折光检测器）。A.3.5 0.22 m微孔滤膜。A.3.6 干燥炉。A.3.7 25 mL、50 mL容量瓶。A.3.8 移液器（1 mL、5 mL、10 mL）。A.4 分析步骤A.4.1 样品称取称取经96 2 干燥4
6、 h的约1 g样品（精确至1 mg，质量M），放入100 mL烧杯中，加入50 mL沸水，适度搅拌，用0.05 mol/L KOH（A.2.5）或0.05 mol/L HCl（A.2.4）调节pH至6.58.0。在样品溶解完全后，移入100 mL容量瓶，于 85 2 保温10 min。然后冷至室温，摇匀并用水定容，此后注意保持样品温度在室温以上。取少量溶液经0.22 m滤膜过滤后进行分析（检测A0）。A.4.2 酶水解1取60.0 mL A.4.1的样品液，加入等量的醋酸缓冲液（A.2.3）均匀混合，用0.05 mol/L HCl（A.2.4）调至pH=4.50.05。加入足够量的淀粉葡萄糖苷
7、酶（A.2.6，如果不知道样品中淀粉和麦芽糊精的大致含量，可认为样品中未知部份是100 的淀粉，以此计算酶的用量），将样品液水浴升温至60 2 ，保持恒温30 min，适度搅拌但不应起沫。溶液中也不应有空气泡。冷至室温后转至100 mL容量瓶，用水定容，取少量溶液经0.22 m滤膜过滤后分析（检测A1）。A.4.3 酶水解2取60.0 mL A.4.2的样品液，加入足够量的果糖酶（A.2.7，如果不知多聚果糖含量，可认为样品未知部份为100多聚果糖，如使用megazyme 2000 U/mL的混合果糖酶，加入100L）。将样品液水浴升温至60 2 ，保持恒温30 min，适度搅拌，防止产生泡沫
8、，防止空气进入。冷至室温后转至100 mL容量瓶，用水定容，经0.22 m滤膜过滤后分析（检测A2）。A.5 色谱检测参考色谱条件：氨基色谱柱，流动相为乙腈：水=75%：25%。流速1.0 mL/min，进样量20 L；柱温30 。标准曲线的绘制：分别吸取20 L标准工作液（A.2.13）注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的峰高或峰面积，以浓度为横坐标、峰高或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。样品中糖的测定：吸取20 L样液（检测A0，A1和A2）注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的峰高或峰面积，由标准曲线上查得样液中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量。试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖的
9、响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应改变取样量后重新检测。A.6 计算A.6.1 果糖、葡萄糖和蔗糖含量的计算表A-1 不同检测所对应的糖含量糖检测A0检测A1检测A2葡萄糖GfG1Gt果糖FfFt蔗糖S表中：Gf初始提取液中葡萄糖百分含量（质量分数），%；G1第一次酶解后葡萄糖百分含量（质量分数），%；Gt第二次酶解后葡萄糖百分含量（质量分数），%；Ff初始提取液中果糖百分含量（质量分数），%；Ft第二次酶解后果糖百分含量（质量分数），%；S初始提取液中蔗糖百分含量（质量分数），%；初始提取液中葡萄糖Gf含量按公式（A.1）计算。（A.1）式中：CGf检测A0溶液中葡萄糖含量，单位
10、为毫克每毫升（mg/mL）；M样品称取量，单位为克（g）；初始提取液中果糖Ff含量按公式（A.2）计算。（A.2）式中：CFf检测A0溶液中果糖含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；M样品称取量，单位为克（g）；初始提取液中蔗糖含量S按公式（A.3）计算。（A.3）式中：Cs检测A0溶液中蔗糖含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；M样品称取量，单位为克（g）；第一次酶解后葡萄糖含量G1按公式（A.5）计算。（A.5）式中：CG1检测A1溶液中葡萄糖含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；M样品称取量，单位为克（g）；第二次酶解后葡萄糖含量Gt按公式（A.6）计算。（A.6）式中：CGt检测A2溶
11、液中葡萄糖含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；M样品称取量，单位为克（g）；第二次酶解后果糖含量Ft按公式（A.7）计算。（A.7）式中：CFt检测A2溶液中果糖含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；M样品称取量，单位为克（g）；样品中葡萄糖、果糖、蔗糖含量总和按公式（A.8）计算。（A.8）式中：T葡萄糖、果糖、蔗糖含量总和，百分含量（质量分数），%。A.6.2 低聚果糖（DP3- DP4）含量的计算按附录BA.6.3 平均聚合度（DP）的计算由多聚果糖释放出的葡萄糖和果糖含量分别按公式（A.9）和（A.10）计算。Gi=Gt-Gs-G1（A.9）Fi=Ft-Fs-Ff（A.10）式中：G
12、i由多聚果糖释放出的葡萄糖，百分含量（质量分数），%；Gs由蔗糖释放的葡萄糖（=S/1.9），百分含量（质量分数），%；G1第一次酶解后的葡萄糖，百分含量（质量分数），%；Gt第二次酶解后葡萄糖，百分含量（质量分数），%；Ft第二次酶解后果糖，百分含量（质量分数），%；Ff初始提取液中的果糖，百分含量（质量分数），%；Fi由多聚果糖释放出的果糖，百分含量（质量分数），%；Fs由蔗糖释放出的果糖（=S/1.9），百分含量（质量分数），%。平均聚合度按公式（A.11）计算。（A.11）式中：DP平均聚合度；Fi由多聚果糖释放出的果糖，百分含量（质量分数），%；Gi由多聚果糖释放出的葡萄糖，百分含量
13、（质量分数），%。A.6.4 多聚果糖（DP5）含量的计算多聚果糖（DP5）含量按公式（A.12）和（A.13）计算。（A.12）（A.13）式中：I多聚果糖（DP5）含量，百分含量（质量分数），%；I34低聚果糖（DP3- DP4）含量，百分含量（质量分数），%；k换算系数；DP平均聚合度；Gi由多聚果糖释放出的葡萄糖，百分含量（质量分数），%；Fi由多聚果糖释放出的果糖，百分含量（质量分数），%；A.6.5 允许差在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5 %。附 录 B低聚果糖（DP3-DP4）检验方法附录BB.1 一般规定除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682中规定的二级水。所用溶液除另有说明外，均为水溶液。B.2 试剂和材料B.2.1 乙腈。B.2.2 蔗果三糖（含量99%）。B.2.3 蔗果四糖（含量99%）。B.2.4 糖标准储备液：分别称取经96 2 干燥4 h后的糖标准品各1.000 g（蔗果三糖和蔗果四糖）放入50 mL容量瓶中，加水搅拌使之完全溶解，定容至刻度，得20 mg/mL标准储备液。B.2.5 工作标准液：根据检测器的不同将糖标准储备液分别用水稀释至如下浓度的溶液。（示差折光检测器）2.50 mg/mL、2.00 mg/m
