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1、食品安全国家标准食品营养强化剂 醋酸视黄酯（醋酸维生素 A）1 范围本标准适用于食品营养强化剂醋酸维生素A或以-紫罗兰酮和醋酸为主要原料，经加工制得的食品营养强化剂醋酸视黄酯（醋酸维生素A或维生素A醋酸酯）。2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1化学名称反式-3,7-二甲基-9-(2,6,6-三甲基-1-环己烯基-1)-2,4,6,8-壬四烯乙酸酯trans-3,7-dimethyl-9-(2,6,6-trimethyl-1-cyclohexen-1-yl)-2,4,6,8-nonatetraene-1-acetate2.2分子式C22H32O22.3结构式2.4相对分子质量328.
2、49（按照2007年国际相对原子质量计算）3 技术要求3.1感官要求感官要求应符合表1的规定。表1感官要求项 目要 求检验方法色泽淡黄色至亮微红黄色将适量试样置于清洁、干燥的白瓷点滴板中，在自然光线下，观察其色泽和状态滋味、气味稍有特殊气味但无酸败味组织状态结晶性粉末或油性物质3.2理化指标理化指标应符合表2的规定。表2理化指标项目指标检验方法醋酸视黄酯（醋酸维生素A）标示量a,w/%每1g 含维生素A280 万IU；标示量的95.0-105.0%附录A中A.4酸值（以KOH计）/（mg/g）2.0附录A中A.5过氧化值/（m mol/kg）5.0附录A中A.6铅（Pb）/（mg/kg）1GB
3、 5009.12砷（As）/（mg/kg）1GB 5009.76注：商品化的醋酸视黄酯（醋酸维生素 A）产品应以符合本标准的醋酸视黄酯（醋酸维生素 A）为原料，可添加符合相关食品质量规格要求的食用植物油、淀粉、糊精、蔗糖、抗氧化剂、抗结剂、增稠剂等辅料而制成。a维生素A以国际单位（IU）表示，1 IU维生素A =0.344g 醋酸视黄酯（醋酸维生素 A），醋酸视黄酯实际含量为标示量的95.0-105.0%。附录A检验方法A.1 操作提示试样应在密闭、避光和不超过 25条件下贮存。配制的试样溶液应尽快使用，建议在 2 h内使用。试样中如出现结晶，可在65条件下混匀，但加热时间不宜过长。含量测定过
4、程中，应最小程度地接触光和空气中的氧及其他氧化剂，使用低光化玻璃仪器。A.2 一般规定本标准除另有规定外，所用试剂的纯度应在分析纯以上，所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，应按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备，实验用水应符合 GB/T 6682中三级水的规定。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.3 鉴别试验A.3.1 试剂和溶液 A.3.1.1 醋酸视黄酯（醋酸维生素 A）；A.3.1.2 三氯甲烷。A.3.1.3 三氯化锑溶液：取三氯化锑适量，制成25%（m/v）的三氯甲烷溶液。A.3.1.4 石油醚。A.3.1.5 异丙醇。A
5、.3.1.6 环己烷。A.3.1.7 乙醚。A.3.1.8 展开剂：环己烷-乙醚（12+1）。A.3.1.9 色谱用硅胶板。A.3.2 鉴别试验A.3.2.1 呈色试验A.3.2.1.1 方法原理醋酸维生素A和亲电试剂三氯化锑作用形成不稳定的蓝色碳鎓离子。A.3.2.1.2 分析步骤称取一定量试样，配制成约含醋酸维生素A 6g/mL的三氯甲烷溶液，加入10mL三氯化锑指示剂，立即出现蓝色，并迅即褪去蓝色。A.3.2.2 薄层色谱分析A.3.2.2.1 方法原理试样溶液所显示主斑点与标准品溶液所显示主斑点的颜色和Rf值相同。A.3.2.2.2 分析步骤称取相当于15000IU维生素A的醋酸维生素
6、A，加石油醚5 mL溶解，作为试样溶液。取试样溶液5L进行薄层色谱分析。将环己烷-乙醚混合液（12：1）作为展开剂。当展开剂的最前端上升到距离点样点原线约10cm时，停止展开，风干薄层板。均匀喷洒三氯化锑指示剂溶液，供试样溶液和标准品溶液显示相同的蓝色主斑点且Rf值相同。A.3.2.3 最大吸收波长A.3.2.3.1 方法原理试样溶液在波长324-328nm范围内有最大的吸收峰。A.3.2.3.2 分析步骤取醋酸维生素A样品0.01 g，加入异丙醇溶解，按每1 mL约含3 g醋酸维生素A制备溶液，此溶液在波长324-328nm范围内有最大的吸收峰。A.4 醋酸视黄酯（醋酸维生素A）含量的测定A
7、.4.1 试剂和材料A.4.1.1 无水乙醇：色谱纯。A.4.1.2 异丙醇：色谱纯。A.4.1.3 甲醇：色谱纯。A.4.1.4 水：GB/T 6682中的一级水。A.4.1.5 异丙醇溶液：每升异丙醇中含1 g二丁基羟基甲苯。A.4.1.6 全反式醋酸维生素A标准品：按A.4.3.1紫外分光光度法测定标准品中醋酸维生素A的含量。在测定过程中，用全反式醋酸维生素A标准品作为试样，试样溶液的最大吸收峰应在324-328nm之间，且吸光度比值A/ A326符合表A.1的要求。A.4.2 仪器和设备A.4.2.1 紫外分光光度计。A.4.2.2 高效液相色谱仪，配紫外检测器（检测波长326 nm）
8、。A.4.3 分析步骤A.4.3.1 紫外分光光度法A.4.3.1.1 方法原理醋酸维生素A分子中含有5个共轭双键，在324-328nm波长之间具有最大吸收峰，其最大吸收峰的位置随溶剂不同而异，因而可用于含量测定。本法是在三个波长处测得吸光度,根据校正公式计算吸光度A 校正值后,再计算含量。A.4.3.1.2 试样溶液的制备称取试样0.01 g，精确至0.001 g，加入异丙醇溶解，按每1 mL约含3 g醋酸维生素A制备溶液。A.4.3.1.3 测定取适量试样溶液，采用紫外分光光度法验证试样溶液的最大吸收峰是否在324-328nm之间。如果试样溶液的最大吸收峰在324-328nm nm之间，则
9、测定试样溶液在波长300 nm，310 nm，326 nm，340 nm和350 nm处的吸光度，并计算不同波长下的吸光度A与326 nm处吸光度A326之比A/ A326。将326 nm波长的吸光度以1000表示，计算各个波长的吸光度与326nm吸光度的比值。每一吸光度比值与表A.1所列值的偏差应在0.030内。如果不同波长的吸光度比值符合表A.1的要求，则按A.4.4结果计算中的公式（A.1）计算试样中醋酸视黄酯（醋酸维生素A）的含量。如果试样溶液的最大吸收峰不在324-328nm之间，或者吸光度比值有一项或多项不符合表A.1的要求，则应按A.4.3.2液相色谱法测定含量。表A.1 不同波
10、长的吸光度AA/ A3263000.5783100.8153261.0003400.7863500.523A.4.3.2 液相色谱法A.4.3.2.1 方法原理将醋酸视黄酯（醋酸维生素A）溶解后直接注入反相色谱柱上，用流动相洗脱分离，紫外检测器测定，外标法计算醋酸视黄酯（醋酸维生素A）含量。A.4.3.2.2 参考色谱条件A.4.3.2.2.1色谱柱：ODS液相色谱柱，150 mm4.6 mm，粒径5 m，或同等性能的色谱柱。A.4.3.2.2.2 流动相：甲醇水955（体积比）。A.4.3.2.2.3 流速：1 mL/min。A.4.3.2.2.4 检测波长：326 nm。A.4.3.2.2
11、.5 进样量：10 L。A.4.3.2.2.6 保留时间：醋酸维生素A的保留时间约为5.3 min。A.4.3.2.3 试样溶液的制备称取约0.01 g试样，精确至0.001 g，置于25mL棕色容量瓶中，加入15-20mL无水乙醇，置于超声水浴中处理2min使之完全溶解，用无水乙醇稀释定容，摇匀，得到试样储备液。根据试样浓度，用无水乙醇进行稀释，过0.2m微孔滤膜过滤后用于高效液相色谱的测定。A.4.3.2.4 标准溶液的制备称取适量全反式醋酸维生素A标准品0.01 g，精确至0.001g，置于25mL棕色容量瓶中，加入15-20 mL无水乙醇，置于超声水浴中处理2min使之完全溶解，用无水
12、乙醇稀释定容，摇匀，得到标准储备液。移取一定量标准储备液，按照需要用无水乙醇稀释，制备标准曲线溶液。A.4.3.2.5 测定在A.4.3.2.2参考色谱条件下，分别对试样溶液和标准溶液进行测定，重复进样两次，分别记录相应色谱图中醋酸维生素A的峰面积值。按A.4.4结果计算中的公式（A.2）计算试样中醋酸视黄酯（醋酸维生素A）的含量。A.4.4 结果计算A.4.4.1 紫外分光光度法醋酸视黄酯（醋酸维生素A）含量w1以国际单位每克（IU/g）计，按公式（A.1）（A.1）式中：A326试样溶液在326 nm处的吸光度；1900醋酸视黄酯（醋酸维生素A）的吸光度与含量之间的换算系数；V试样溶液的稀
13、释体积，mL；m试样的质量，g；100换算系数。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的2 %。A.4.4.2 液相色谱法醋酸视黄酯（醋酸维生素A）含量w2以国际单位每克（IU/g）计，按公式（A.2）计算：（A.2）式中：A1试样溶液色谱图中醋酸维生素A的平均峰面积值；C全反式醋酸维生素A标准品的溶液浓度，IU/mL；V最终样液的定容体积，mL；A2标准溶液色谱图中醋酸维生素A的平均峰面积值；m试样的质量，g。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5 %。注：1.
14、 在试样中可能会存在少量醋酸维生素A的顺式异构体，同样具有维生素A的效价，因此在计算时应将醋酸维生素A的顺-反异构体峰面积合并计算；2. 对照品和试样的稀释液最后进样浓度应控制在仪器的线性范围内；A.5 酸值的测定A.5.1 试剂和溶液A.5.1.1 95%乙醇。A.5.1.2 乙醚。A.5.1.3 氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液：c（KOH）=0.1 mol/L（使用前需标定）。A.5.1.4 乙醚与95%乙醇混合液（1：1）：将乙醚与95%乙醇等体积混合。使用前，需加入3-5滴酚酞指示剂，滴加0.1 mol/L 氢氧化钾乙醇液至微显粉红色，保持30秒不消失。A.5.1.5 酚酞指示液：10 g/L。A.5.2 分析步骤准确称取约5 g试样（精确到0.001 g）于250 mL带塞锥形瓶中，加入100 mL乙醚与95%乙醇混合液（1：1），盖上塞子轻摇至试样完全溶解。如需要，可加热溶解。加入3-5滴酚酞指示剂，用0.1 mol/L 氢氧化钾乙醇液对上述试样液进行滴定，逐渐地、不间断地滴入滴定液，同时不停地摇动均匀，至微显粉红色，保持30 秒不消失，即为终点；如溶液本身颜色较深，可在接近滴定时，加入10mL饱和氯化钠溶液，观察水层颜色变化至微显粉红色，保持30 秒不消失，即为终点。A.5.3 结果计算酸值（以KOH计）w3以毫克每克（mg/g）计，按
