《乳腺珠蛋白mRNA的表达规律及其临床意义.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乳腺珠蛋白mRNA的表达规律及其临床意义.doc（48页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 中国人民解放军军事医学科学院硕士学位论文乳腺珠蛋白mRNA的表达规律及其临床意义姓名：进淑娟申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：黄焰20100516 级硕士研究生学位论文乳腺珠蛋白表达规律及其临床意义目前检测乳腺癌微转移的方法主要有免疫组化法、流式细胞法等，但是这些中微转移及预后的关系，为临床探索新的、有价值的指标。 结果：橄侔橹衛蝴谝肝蚜馨徒嶂械谋泶锴榭觯河肦狿方法共检测了例乳腺癌患者腋窝淋巴结中扛誂的表达。例病理证实阳性的淋巴结中有例跽錋阳性，阳性表达率。的表达情况，证实了乳腺珠蛋白只在乳腺癌组织中表达，在乳腺结论：鉴于乳腺珠蛋白高的特异性，可以作为检测乳腺癌微转移的标志物。 锄 琫
2、 。 ，豯 。 ， ，锄 。篢 甇略 脏 枞， 癿。蛐 瑃 。 矗 。琑狿 、， 薿 转移是指用常规的检查方法很难发现的非血液系统的恶性肿瘤细胞的转移，包括测会出现假阳性的结果，这主要是：假基因的存在、血液成份的干扰、样本的污 珼片段，年，他们根据这个片段设计特异引物，用末端快速扩增腺珠蛋白，他也是第一个应用差异筛选分离得到的新的乳腺癌相关基因。高，的在雌激素阳性的患者比的更容易检测到。而且，的椭琢龅姆旨都袄怪甘筛合喙亍炔人于年用分子杂交的方法检测的表达，结果显示：除了乳腺，分泌型器官及激素依赖的上皮组织中均检测不到乳腺珠蛋白的表达。对于用作为检测微转肞技术检测外周血中珠蛋白早期检测乳腺珠蛋白
3、的方法多为定性的检测，比如：流式细胞技术、免疫组 ，来检测乳腺珠蛋白的表达。且恢侄蕴囟腄片段在体外进行快速扩增的方法。该它操作，极大地减少了镂廴净幔颐舾行源锏。 猠反转录聚合酶链反应信使核糖核酸篴时 级硕十研究生学位论文可行性研究且减少了反复加样造成样本污染的机会，降低了假阳性率的发生，使结果更加准的方法，并分析乳腺珠蛋白作为乳腺癌微转移检测指标的可行性。材料和方法公司公司公司北京三博远志生物技术公司上海生物工程公司合成购自公司猅 风光光度仪公司生产拦海尔集团公司生产德国公司生产甈凝胶成像系统型电泳仪甇引物设计软件印罰：将琋 ， 溶于双蒸水中，放置在带有控温和控速的磁力搅拌器上，匀速旋转搅拌的
4、校胖糜诳匚潞涂厮俚拇帕涟杵魃希人傩=涟小时，使其：秭宜幔加入的双蒸水，放置于磁力搅拌器搅拌，充分溶解，分装并高温消毒后， 级硕士研究生学位论文橹羲楹蠹尤胍旱V醒心尤隤冲洗，室温离心。室温，胄，将细胞洗涤两次。叫的氯仿加入刑崛叩够煸龋胄模， 樱姹渲腥龇肿昂玫腄砉奈蘧豯，将晾干的沉淀充分溶解，分光光度计检测纯度和浓度，冰箱保存。，豯引物和探针的设计查阅基因库寻找基因序列，应用采用普通墙蠵扩增。發将上述体系加入到苤校荡蚧煸龋胄蠼蠵扩增。运行参数： 级硕士研究生学位论文电泳缓冲液：“宜冷却后加入适量的，倒入模具，即成目的片段的纯化皇占埽街湃肫渲校鲜鏊玫娜芤杭尤胛街鵆中，肛钠匆海尤胛街欣胄模巾，弃收集管
5、中废液。中段时间，将其彻底晾干。 级硕研究生学位论文连接：将炕锪又罷载体用罛甌载体转化实验剧烈晃动。的有氨苄的琼脂培养皿上，培养过夜。吕胄模叩肛锨逡鹤魑狿模板。蠵扩增，朋逑担咛寮稀扩增条件如下：预变性；延伸。 级颀。：研究生学位论文溶液，使用涡旋震动器或者移液器将细菌细胞沉淀彻底悬浮。将上清移入其中，操作中尽量避免吸出沉淀。，弃废液。洗脱液于吸附膜中间部位，放置，室温离心，将质粒溶液收集到离心管中。舛縋引物及探针的设计合成 级硕上研究生学位论文反应体系肛罰缓冲液多聚酶运行参数：预变性 三、实验结果质粒标准品建立管家基因质粒标准品的构建再将以上管家基因质粒稀释、杏舛縋扩增， 一一一一一一 图怂芃
6、基因测序结果岳龊蠼星碇悄旱缬荆峁缤：基因凝胶电泳图将目的基因片段扩增、纯化、连接载体，转化入感受态细胞，培养扩增后提取质进行荧光定量觯峁缤 獁基因荧光定量标准曲线三荧光定量检测的精确度、灵敏度和稳定性的分析取怂压质粒倍比稀释为、。蠼杏舛縋扩增，结数据的回归方程，喙叵凳狾 级硕士研究生学位论文一：，；，一，曩了一了一一了一艘一一籣根据倍比稀释后质粒的荧光定量扩增，来制作灵敏度实验荧光定量标准曲线图灵敏度荧光定量标准曲线图异系数如下 级硕士研究生学位论文一取柿瓯局馗醇觳次来检测日内差异试验值均值提取从必蚝凸芗一虻闹柿侗认停直鸾杏舛縋扩增， 患者均为初治，未曾行过术前的新辅助治疗。崛躮和衔奶崛驛过程
7、加入苤校岬煸龋淘堇胄慕欣觥问嬖湫，信号。电脑分析结果。蝴在乳腺癌组织及乳腺正常组织中的表达情况我们检测了例乳腺癌组织，有例织中的表达量量较乳腺鲁橹撸橄倭夹灾琢觫笙鳍鰉疉不表达。乳腺基因在不同癌组织中表达例，用荧光定量觳馄浔泶锪康那榭觯 级硕士研究生学位论文 级硕十：研究生学位论文科的病人作为研究对象。其中乳腺癌组织例，乳腺正常组织例，卵巢癌组 级硕研究生学位论文材料和方法所用试剂溶液同第一章相应部分引物及探针序列购自三博生物公司研究对象 检测乳腺癌腋窝淋巴结及外周血中贰玀的表达的检测。于术中取乳癌病人的淋巴结，放入液氮中研磨。其余同第一章乳腺癌组织提取的步骤。同前按照逆转录试剂盒将逆转录为荧光
8、定量觳庖肝蚜馨徒嶂衛的表达量 多聚酶循环条件：变性#姹湫，退火嫜由，共反应个循环，收集荧光信号进行实时检测。图为阳性腋窝淋巴结图乳腺癌患者腋窝淋巴结的表达图庵苎V械龊讼赴靖誂的提取冰箱保存，方法如下：孪释庵苎R詌：谋壤尤氲胶煜赴呀庖旱敝校仓使红细胞能充分裂解；离心，印 。将离砣晃轎傅腅芗尤的异丙醇，将上述上层水相等体积加入到管中，混匀，室温或者静置管底白色沉淀为所要提取的扛誂。疉的荧光定量图 级硕一研究生学位论文乳腺珠蛋自在乳腺癌患者腋窝淋巴结中的表达的表达，其中有的表达均为阴性表达与患者临床病理关系达与腋窝淋巴结的状态、等无关。表达与临床病理特 乳腺癌患者微转移最常出现的部位是腋窝淋巴结、骨髓和外周血。斟泶锫饰，而病理阴性淋巴明显降低【】。餿指南中，因为这部分微小转移可能是日后病人复发、转移的潜伏病灶。 的表达，证明了乳腺癌是一
