《体外诱导产生无能细胞的免疫调节作用.pdf.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《体外诱导产生无能细胞的免疫调节作用.pdf.doc（87页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 作者姓名：王祥慧 学位论文版权使用授权书保密口，在一年解密后适用本授权书。朐谝陨戏娇蚰诖颉啊獭膨舅一指导教师签名：月 体外诱导产生免疫无能细胞的免疫调节作用摘要直鹪擞肕法和流式细胞仪检测在不同浓度时，体外混合培养淋巴细胞的增殖即受到结果 胞的增殖、分化和凋亡的影响。共蒯激阻断组为；此时，无能细胞中的赴壤黾又终浓度合淋巴细胞反应体系的免疫调节作用。反应体系淋巴细胞的增殖都有显著的抑制作用，抑制率分别为和 共刺激信号阻断剂组，；贑率分别为和。而在第三方刺激的新反应体系结论单独应用断剂，所诱导产生的小鼠免疫无能细胞，在体外具有非抗原特异性的免疫调节作用，关键词： 琣瓺痯， 珼琩瓼籺 琩 ；瓵產猘琲
2、 移植物浸润性淋巴细胞 官移植受者长期应用传统免疫抑制剂。虽然能够成功的防治大部分移植受者的排斥反应，但是因为其不具有抗原特异性，大剂量或长期应用这类免疫抑制剂后所造成的诸多不良反应成为移植物长期存活的主要障碍。因而，探索特异性免疫抑制方法，以期减少或停用免疫抑制剂、乃至主动地诱导供者抗原特异的免疫耐受状态，具有迫切的现实需求。 的【。这将是今后移植免疫学的一个重点研究方向。的患者失去对于结核菌素的高敏感性。但直到年，和】爿借用它来中描述的无能细胞，是指通过阻断共刺激信号等手段，所诱导产生的呈现免疫应答低反应性的淋巴细胞。 。分子式：肿恿浚俅彩匝橹小敬保浚礔制赴蜃拥姆置凇醒弑溃笫罂诜:螩籆和共
3、刺激信号外混合培养淋巴细胞增殖、分化和凋亡的影响。并试图摸索出与共刺激信号阻断剂 ，篺： 甀：瓼 籶 琓琣 ，：琀甌；：；： 可能引起的肝、肾毒性。蛔璋璗淋巴细胞对病毒感染的活化、增殖和记忆性；也不通过细胞因子的合成干扰淋巴细胞；对体液免疫不产生影响，因此其作用机制与目 淖饔孟拢馨拖赴脑鲋呈欠癖灰种啤送猓現材料和方法实验动物龄周，清洁级，购自中国科学院上海实验动物中心。饲养于上海市瑞会医院动物 玻璃烧杯。锥形离心管。细胞计数板，篖细胞培养板，孔细胞培养板，公司生产。 勰琘小鼠重组白介素琹支，红细胞裂解液，台盼蓝染料、青霉素、链霉素、噻蓝，畒舣向引物序列产物长度培养基配制：将粉剂和 培养基润湿经
4、过灭菌处理的磕崃送一次性注射器的活塞推杆轻柔地研碎脾脏组织，并不断以培养基冲洗，使脾细胞通过尼龙滤网。以尼龙滤胄分钟，收集脾细胞沉淀。用釵担复孔的平均值。与荧光抗体混合后，避光反 悬浮沉淀细胞，上机检澳，一比例，用完成数据分析，实验重复三次。将上层水相转入新的管中，加入异丙醇， 在缓冲液下，取淖躌在管底。分一保存。呐渲疲卤 嫱嘶，延伸试剂 蒸馏水中，在搅拌器上剧烈搅拌。在用调节溶液值至夹。后送至高压灭菌。室温保存。冰乙 的凝胶倒入己置好梳子的电泳板中，在室温下放置话混匀后依次加入孔中。接电混匀后依次加入孔中。接统计学方法 如图所示，应用后活细胞数量较多，形态较均等，成纤维细胞与对照组图逋庀赴嘌
5、逑抵屑尤隖 图逋庀赴嘌逑抵屑尤隖粤馨拖赴鲋车挠跋臁迸仍芄幌灾种屏馨拖赴鲋。当和 蕴逋釳中淋巴细胞增殖的影响 时，细胞比例各自提高至、。随着药物剂量的增加，细胞比例呈上升趋势。 毒毒任；仍时，与对照组相比能 认拢庠葱訧对淋巴细胞的增图煌菷痀图髯橄赴鹒 组与对照组无明显著异讨哂卸捞氐淖饔没怼谔迥冢現巴细胞归巢曲、并抑制免疫效应细胞向外周迁移“。以后，病毒的复制未受影的表达。这些毒性分子尤其是 痥所能达到的血药浓度约为，这一有所需设备及试剂相对低廉，操作简便，特别足试剂无放射性污染等优点。所以我时没有抑制作用等报道，体外单向赴派湎哒丈培养旌螅現在笨梢韵灾种屏馨拖赴鲋场醒咄撇庹馐荈仍隩墓叵怠颐堑氖笛橹
6、担現浓度在时能显著增加 并且细胞内蛋白表达下调、鞍妆泶锷系鳌罱芯勘砻鱂的作用可本实验发现，在刑砑覨呐仍俳鳰体系中淋巴细胞凋亡作用机制还有待进一步阐明。应用竽茉斐蒚细胞对同种异体抗原低反应性，加入 ；篺，：鰐 甁 ，：，； 琁詒 诱导产生免疫无能细胞答低反应性；无能细胞免疫应答低反应性的细胞。是指通过阻断共刺激信号等手段，所诱导产生的证实，阻断共刺激信号能够预防移植物排斥并且可以诱导耐受【。阻断共刺激信号抑甶赴拿庖呶弈茏刺醒芯恐担么胖榻玀中鹘谛訲细胞赴拿庖叩鹘诨粕形赐耆鳌匾5氖牵珻 易H綜基因阻断共刺激通路，能够显著延长大鼠移植肺脏的存活时间【。但两者单独作用都达不到显著延长存活时问的效果。而且
7、轋痀动物、设备、药品与试剂同第一部分。单克隆抗体抗小鼠梗琈克隆，属仓鼠 公司生产。，公司生产。垂公司生产。，华美生物工程公司生产。缓冲液，；甲醛上样染液；缬净撼逡海篛 牵珻。生产。实验方法浓度孔培养扳中每孔分别加入虰痗的脾细胞各调整培养液至，之后力鯥，之后加入 溶液洗脱培养液。去上清，体系约为直鸺尤耄投哉誔投哉誇。低温妫芄夥跤种印胄娜锨澹尤芤合赐驯昙强固濉胄娜锨澹酥轿伞尤雔固定破膜工作液破膜痯，振荡混匀。妫芄夤梗鲂薄甲醛固定，上流式细胞仪器返腞抽提直接在本兜呐嘌讨屑尤琂的至种印下，胍分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，的醇，胄分钟。 倭恳禾逵肨一般稀释螅寥湓诜止夤舛燃溶液将分光光度计调零。电泳缓冲液至覆盖胶面几个急窻样品所提取的糜谀孀B迹缓铣傻膃糜谑凳倍縋 玃产物进行倍梯度稀释：设定锱任猯，分别
