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1、第九章 维生素类药物的分析 维生素 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质 人体不能合成维生素 VitA D2 D3 E K1等 脂溶性 水溶性 VitB族 B1 B2 B6 B12 VitC 叶酸 烟酸 烟酰胺 VitM VitPP H维生素A醇 COCH3维生素A醋酸酯 COC15H31维生素A棕榈酸酯 R 第一节维生素A的分析 为一个具有共轭多烯侧链的环己烯 一 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物 维生素A325 5100 新维生素Aa32875 新维生素Ab320 524 新维生素Ac310 515 异维生素Aa32321 异维生素Ab32424 相对生物效价 VitA2 Vit
2、A3 易发生脱氢 脱水 聚合反应 聚合反应鲸醇 1溶解性不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等 2不稳定性共轭多烯侧链易被氧化 或有金属离子存在时氧化 环氧化物 VitA醛 VitA酸 CHCl3 紫外吸收特性325 328的范围有最大吸收 条件 无水 无醇 CHCl3 蓝色 逐渐变紫红 方法取维生素A油溶液1d 加氯仿10ml 振摇溶解 取出两滴 加氯仿2ml 与25 三氯化梯氯仿液0 5ml反应 成兰色 渐成紫红 BP 2000 max为326nm一个吸收峰 max为350 390nm三个吸收峰 去水VitA VitA3 VitA 讨论维生素A有五个共扼双键 无水乙醇溶液在326nm处有最大吸收
3、 盐酸催化加热脱水 成5个双键 故 波长红移 同时在350 390之间出现3个吸收峰 USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值 BP杂质对照品法显色剂三氯化锑 立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A VitA2 去水维生素A VitA3 UV法 一 三含量测定 三 点校正法 P208 1 条件 1 杂质的吸收在310 340nm波长范围内呈一条直线 且随波长的增大吸收度减小 2 物质对光的吸收具有加和性 2 波长的选择 1 1VitA的 max 328nm 2 2 3分别在 1的两侧各选一点 对吸收有影响的杂质见书209液 测定对象 VitA醋酸酯 第一法等波长差法 第二法等吸收度法
4、 皂化法 测定对象 VitA醇 测定法 1 基本步骤 第一步A选择选择依据 所选A值中杂质的干扰已基本消除 注意 C为混合样品的浓度 第二步求 第三步求效价 换算因数由纯品计算而得 第四步 求标示量 二 二 三氯化锑比色法标准曲线法 优点简便快速 max618nm 620nm 注意事项1颜色不稳 动作要快 2用无水氯仿作溶剂测定 要求无水 3温度恒定 4非专属性 结果偏高 5有腐蚀性 HPLC 氨基嘧啶环 CH2 噻唑环 季铵碱 第二节维生素B1 HCl Cl 二 性质1溶解性 易溶于水 水溶液呈酸性2硫色素反应 噻唑环在碱性介质中开环 在与嘧啶环环合 经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素
5、 3盐酸液的246nm波长处测定吸收度 吸收系数为421 UV共轭双键 max 246nm4碱性嘧啶环 伯氨噻唑环 季铵1 可与酸成盐2 与生物碱沉淀剂沉淀 3 含量测定 非水碱量法 二 鉴别试验 一 硫色素反应 ChP 硫色素 2H 方法取本品约5mg 加氢氧化钠与正丁醇2 5ml 强烈振摇 放置分层 上面醇层显强烈兰色荧光 加酸消失 再加碱又重现 专属性反应 VitB1 H H H H 二 沉淀反应 S元素反应 Cl 反应 三 其他反应 含量测定 一 非水滴定法1原理两个碱性的 已成盐的伯胺与季胺的基团 在非水溶液中 醋酸汞存在下 均可与高氯酸作用 根据消耗高氯酸的量进行计算 喹那啶红 亚
6、甲蓝 紫红 天蓝 2方法取本品0 15g 精密称定 置100ml具塞锥形瓶中加冰醋酸 醋酸汞 喹那啶红 亚甲蓝2d 高氯酸滴定 由紫红 天蓝 1ml相当于16 86mg 二紫外光谱法维生素B1片的测定 取20片称定 严细 称取细粉适量 相当于25mg 置100ml量瓶中 取5ml 在定溶于100ml 246nm测 标准吸光系数421 注意所使用的溶剂 421 每片 相当于标示量的 A ECL 规格g 片 g 100ml g ChP片剂 维生素B1注射液的测定取本品相当于B150mg 置200ml量瓶中 加水置刻度 取5ml 用盐酸定溶于100ml 246nm测 标准吸光系数421 注射剂 每m
7、l 相当于标示量的 规格g ml ml NaOH 激发波长365nm发射波长435nm NaOH 铁氰化钾 异丁醇 NaOH 异丁醇 NaOH 铁氰化钾 异丁醇 NaOH 异丁醇 S d A b 对照液 供试液 1 灵敏度高 线性范围宽 2 代谢产物不干扰 适用于体液分析 第三节维生素C L 抗坏血酸 一 结构为L 抗坏血酸 在化学结构上和醣类似 有4种光学异构体 L右旋活性最强 具有二稀醇的结构 具有内酯环 具有两个手性碳 C4 C5 性质活泼 二 性质 溶解性易溶于水水溶液呈酸性 2酸性C3 OH的酸性较强 pKa 4 17 C2 OH的酸性较弱pKa 11 57 故表现为一元酸的性质 能
8、与碳酸氢钠成钠盐 二烯醇结构 二酮基结构 强还原性二烯醇结构的还原性极强 有活性 有活性 无活性 光学活性L 抗坏血酸活性最强手性C C4 C5 5水解反应与碱反应 50 6具糖的性质结构与糖类相似有糖类的显色反应 7紫外特征 二 鉴别反应 一 与AgNO3反应 ChP2000 具有强还原性 取本品0 2g 加水10ml溶解 取5ml 加硝酸银0 5ml 成 二 与2 6 二氯靛酚反应 氧化型 玫瑰红色 ChP2000 玫瑰色 无色 取本品0 2g 加水10ml溶解 取5ml 加2 6 二氯靛酚2d 成 三 与其他氧化剂的反应 与碱性酒石酸铜反应 USP 与KMnO4反应 四 糖类的反应USP
9、 或盐酸 50 吡咯 蓝色 糠醛 戊糖 四 UV 0 01mol LHCl 杂质检查 一 溶液的澄清度与颜色检查注射液取本品适量 加水成50mg ml的溶液 420nm测 吸收度不得超过0 06 片剂取片粉适量 相当于1 0g 加水20ml溶解 滤过 成50mg ml的溶液 440nm测 吸收度不得超过0 07 在加工过程中有色杂质略有不同 故波长不同 二 铁 铜离子的检查 指示剂淀粉指示液 四 含量测定 一 碘量法1原理 H 取本品约0 2g 精密称定 加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解 加淀粉指示液1ml 立即用碘滴定液 0 1mol L 滴定 至溶液显蓝色 在30秒内不褪 每
10、1ml碘滴定液 0 1mol L 相当于8 806mg的C6H8O6 2 方法 1 酸性环境d HCl 2 新沸冷H2O 减慢VitC被O2氧化速度 4 讨论 3 立即滴定 赶走水中O2 减少O2的干扰 4 附加剂干扰的排除 片剂 滑石粉 过滤 一缩二亚硫酸 二 2 6 二氯靛酚钠滴定法法 1 原理 自身指示终点法 2 方法 4 缺点 需经常标定 贮存 一周 干扰多氧化力较强 三 HPLC法 例 多种维生素片中VitA VitB1 VitB2 VitB6 烟酰胺 VitC VitE的含量测定 色谱柱ODS流动相A 水 甲醇 4 1 B 甲醇 梯度洗脱 抗氧剂二巯基丙烷磺酸钠 水溶性维生素离子对色谱法 樟脑磺酸 内标法 校正因子内标物 苯酚 脂溶性维生素外标法
