《乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书-微量法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书-微量法（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、北京索莱宝科技有限公司 第 1页 共 3 页 乳酸脱氢酶 乳酸脱氢酶 LDHLDH 活性检测试剂盒说明书 活性检测试剂盒说明书 微量法微量法 注意 正式测定前务必取注意 正式测定前务必取 2 32 3 个预期差异较大的样本做预测定 个预期差异较大的样本做预测定 货号 货号 BC0685 规格 规格 100T 48S 产品内容 产品内容 提取液 液体 60mL 1 瓶 4 保存 试剂一 液体 7 mL 1 瓶 4 保存 试剂二 粉剂 1 支 20 保存 用时加入 1 3 mL 双蒸水充分溶解备用 配好后可分装成小管 20 保存 可保存两周 禁止反复冻融 试剂三 液体 7 mL 1 瓶 4 保存
2、试剂四 液体 25 mL 1 瓶 4 保存 丙酮酸钠标准液 液体 1 mL 1 支 4 保存 2 mol ml 产品简介 产品简介 LDH EC 1 1 1 27 广泛存在于动物 植物 微生物和培养细胞中 是糖酵解途径的末端酶 催化丙 酮酸与乳酸之间的可逆反应 伴随着 NAD NADH 之间互变 LDH 催化 NAD 氧化乳酸生成丙酮酸 丙酮酸进一步与 2 4 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙 在碱性溶液中显棕红色 颜色深浅与丙酮酸浓度成正比 试验中所需的仪器和试剂试验中所需的仪器和试剂 可见分光光度计 酶标仪 恒温水浴锅 台式离心机 可调式移液器 微量玻璃比色皿 96 孔板 研钵 冰和蒸馏
3、水 操作步骤 操作步骤 一 粗酶液提取 一 粗酶液提取 北京索莱宝科技有限公司 第 2页 共 3 页 1 细菌 细胞或组织样品的制备 细菌或培养细胞 先收集细菌或细胞到离心管内 离心后弃上清 按照细菌或细胞数量 10 4个 提 取液体积 mL 为 500 1000 1 的比例 建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液 超声波破碎细菌或细 胞 冰浴 功率 20 或 200W 超声 3s 间隔 10s 重复 30 次 8000g 4 离心 10min 取上清 置冰上待 测 组织 按照组织质量 g 提取液体积 mL 为 1 5 10 的比例 建议称取约 0 1g 组织 加入 1mL 提 取液
4、进行冰浴匀浆 8000g 4 离心 10min 取上清 置冰上待测 2 血清 浆 样品 直接检测 3 丙酮酸钠标准液 取 100 L 标准液 倍比稀释至 1 0 5 0 25 0 125 0 mol mL 用 2 1 0 5 0 25 0 125 0 mol mL 做标准曲线 二 测定操作表 二 测定操作表 1 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上 调节波长至 450nm 蒸馏水调零 2 样本测定 试剂名称 L 测定管对照管标准管 待测样本1010 标准液 10 试剂一505050 试剂二10 蒸馏水 1010 充分混匀 37 哺乳动物 或 25 其它物种 准确水浴 15min 试剂三50
5、5050 充分混匀 37 哺乳动物 或 25 其它物种 水浴 15min 试剂四150150150 充分混匀 室温静置 3min 取 200 L 转移至微量玻璃比色皿或在 96 孔板中 450 nm 下测定吸光度 计算 A A 测定管 A 对照管 每个测定管需要设一个对照 北京索莱宝科技有限公司 第 3页 共 3 页 根据标准管测定值和浓度做标准曲线 y 为标准品浓度 mol mL x 为对吸光度 减去浓度为 0 的标 准管的 OD 值 LDHLDH 活力单位计算 活力单位计算 1 计算样品丙酮酸的含量 即将 A 带入回归方程中 x 计算 y 值 2 血清 浆 LDH 活力的计算 单位的定义
6、每 mL 血清 浆 每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位 LDH U mL y V 样 V 样 T 10 3 66 7 y 3 细胞 细菌和组织中 LDH 活力的计算 1 按样本蛋白浓度计算 单位的定义 每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位 LDH U mg prot y V 样 Cpr V 样 T 10 3 66 7 y Cpr 需要另外测定 建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒 2 按样本鲜重计算 单位的定义 每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位 LDH U g 鲜重 y V 样 W V 样总 V 样 T 10 3 66 67 y W 3 按细菌或细胞密度计算 单位的定义 每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位 LDH U 10 4 cell y V 样 500 V 样总 V 样 T 10 3 0 133 y V 样 反应体系中加入的样本体积 10 L 0 01mL V 样总 加入的提取液体积 1mL T 反应时间 15 min Cpr 蛋白质浓度 mg mL W 样品质量 g 500 细胞或细菌总数 500 万 10 3 1 mol mL 103nmol mL 北京索莱宝科技有限公司 第 4页 共 3 页
