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1、AB SCIEX TRIPLE QUADTM 5500的PPG质量准确度校准操作规程1、 前期准备1、PPG稀释溶液的准备，对于5500系列采用的标准溶液：正离子模式：POS PPG 2E-7M；负离子模式：NEG PPG 3E-5M2、离子源的垂直旋钮调至“5”位。3、用质谱仪上的针泵式进样针吸取适量的PPG校准液，检查管路是否连接好。二、操作步骤 1、双击“Hardware Configuration”，激活“MS Only”。2、菜单栏切换到“Installation”项目。3、双击“Manual Turning”，打开手动调谐界面。4、点击“Open File”，选择相对应的采样方法（
2、Q1 Pos PPGs .dam；Q3 Pos PPGs .dam；Q1 Neg PPGs.dam；Q3 Neg PPGs.dam），先正离子再负离子，先Q1调谐再Q3调谐，扫描速率依次为10、200、1000、2000Da/s，对应MCA分别为 10、50、50、100 。5、点击“Start Syringe Pump”，再点击“Start”开始采集数据。6、将会在界面上出现采集到的质谱图，右键点击右侧质谱图区域，选择“Open Date”。7、点击工具栏中的“Calibration From Spectrum”。8、在弹出的菜单中选择合适的校验标准，在“Standard”中选择对应的校准溶
3、液，点击“Start”开始校准前的计算。9、第一个图形代表的是此次校准与理论值的质量偏差，各点应位于“0.1Da”线内。若某质量点超出了设定的范围，则应点击“Update Mass Calibration”，更新那些偏离的质量点的电场参数，使之落到“0.1Da”线内。10、第二个图形代表的是PPG校准峰的半峰高宽度，各点应位于“0.60.8”范围内。若某点质谱峰半峰宽超出标准范围，点击界面上的“Advanced”按钮，调节对应的“Offset”电压，使之合规。质谱分辨率质谱半峰宽（FHWM）Offset值增加提高减小Offset值降低降低增加11、第三个图形代表的是此次校准与上次校准所有PPG
4、校准点峰强度变化的百分比。14、待校准完成后，点击“Stop”停止进样，并灭活“Mass Only”。三、结束工作 针泵吸取50%甲醇水溶液，对管路进行冲洗，23次即可。标准品质谱条件调谐（Tune and Calibrate）操作规程一、前期准备1、检查离子源是否干净，将垂直旋钮跳到“5”位。2、用50%甲醇水溶液（乙腈水溶液也可）配置2050ng/mL的标准溶液（根据响应值调节浓度，将目标化合物母离子与周围离子响应值相差明显即可）。 正离子化合物，可添加0.1%甲酸 负离子化合物，无需添加 2、 操作步骤1、创建project：打开Analyst软件，在菜单栏中打开“Tools”，选择“p
5、roject”下的“Create Project”，输入“Project name”即可。2、双击“Hardware Configuration”，激活“MS Only”，双击“Manual Tuning”，打开调谐界面。3、 Q1 Scan：在当前界面设置扫描模式为“Q1 MS（Q1）”，将扫描范围设为100MW+30，扫描速率为200Da/s，Duration为5min，先点击“Start Syringe Pump”，再点击“Start”，找到目标化合物母离子。待扫描完成后，选择“Center/Width”，将目标母离子的m/z输入“Center（Da）”中，“Width（Da）” 设置为
6、3，“Scan rate”设置为10Da/s，选上“MCA”，“Cycles”设置为2050，点击“Acquire”采集数据并保存。4、 Product ion Scan：扫描模式为“Product Ion（MS2）”，在“Product of”中输入母离子的m/z，将CE值修改为5eV，扫描范围为100MW+30，扫描速率约200Da/s，Duration为5min，点击“Start”开始扫描，以5eV为步长手动调节CE，找到合适的子离子（母离子的强度为基峰强度的1/3到1/4为宜），点击“Stop”。选上“MCA”，“Cycles”设置为2050，点击“Acquire”采集数据并保存二级质
7、谱图（若要获得柱状图需在Advanced MS 中选择Centroid）。5、 优化化合物参数：根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对，输入右侧框中，每对离子对建议分析时间为100ms（若化合物比较多减小时间），并输入ID。点击“Edit Ramp.”，先后选择CE和DP，点击“Start”进行优化，将优化好的CE和DP值添加到表格中。6、 保存质谱方法，灭活“MS Only”。三、 结束工作 针泵吸取50%甲醇水溶液，对管路进行冲洗，23次即可。ACQUITY UPLC串联质谱（UPLC-MS/MS）操作规程1、 前期准备1、 检查线路是否连接完好。2、最重要的是离子源的垂直旋钮调至“2
8、”位。3、将流动相准备好，过0.45微米的滤膜并超声脱气。4、连接好进样采集触发线。二、操作步骤1、打开UPLC的Sample Manage和Binary Solvent Manager电源，待其自检完成后，打开质谱分析软件，左下角双击“ACQUITY Console”，点击“Control”，分别进行“Prime A/B solvents.”和“Prime seal wash”，用A、B流动相冲洗5min。2、 激活“UPLC MS”。3、 安装并用甲醇或乙腈活化新的色谱柱，一般活化30min即可。4、 点击Analyst软件菜单栏中的“Script”，选择“Merge MRM”合并所需测的
9、多种目标分析物的MRM通道（也可双击“Build Acquisition Method”建立方法手动输入），并存储一个新的采样离子通道的质谱方法文件。5、 双击“Build Acquisition Method”，将同步模式选为“Lc Sync”，打开文件选择需要的质谱方法。点击“Edit Parameters”，设置“CUR”：35；“IS”：+5500（正离子），-4500（负离子）；“TEM”：550；“GS1”：50；“GS2”：50；每一个的MRM的驻留时间（Dwell Time）要进行优化，尽可能使“Total Scan Time”控制在最窄峰的峰宽的1/12； “Duration
10、”与UPLC的样品运行时间设为一致，保存此质谱方法。6、 双击左侧栏“ACQUITY Method Editor”，通过“File”打开刚保存的质谱方法。选择进样方式、进样针的强洗和弱洗、色谱柱温度及样品室温度、流动相组成与梯度程序及运行时间（与质谱分析时间一致），保存此方法。7、 双击左侧栏“Build Acquisition Batch”建立处理批次，选择上述保存的方法，添加批次（SET1可修改为日期），添加样品，设置样品名称、甁号（48vial 2mL holder）及“Date file”，保存此批次。8、 提交（submit）此样品序列，点击工具栏中“Equilibrate”按钮，观
11、察压力变化，待 “Delta” 小于50时，点击工具栏中“Ready”，准备进样，在“View Queue”界面下可查看所提交的序列，准确无误后，点击“start sample”开始进样。三、结束工作1、重新建立一个分析批次，选择Penicillin项目下的“UPLC_MS_FLUSH”方法，放置空白样品（水）于样品盘中，提交并运行，对液相及质谱仪进行冲洗。2、待机器冲洗完毕后，灭活“UPLC MS”系统，关闭质谱软件，关闭UPLC电源。Waters Alliance HPLC e2695串联质谱（HPLC-MS/MS）操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、离子源垂直旋钮调至“2”
12、位。3、将流动相准备好，过0.45微米的滤膜并超声脱气。4、连接好进样采集触发线。二、操作步骤1、打开Waters HPLC e2695的Separations Module主机电源，待自检完成后(屏幕显示Idle)，在控制屏点击 “Menu/Status”，选择“Direct Function”进入冲洗选项界面，分别进行“Dry Prime”、“Wet Prime”及“Purge Injector”，排除管道内的气泡。2、安装并活化新的色谱柱，一般活化30min即可。3、打开桌面“Empower”软件，输入用户名（system）及密码（manager）。点击“配置系统”，在配置管理器界面打开
13、“系统”，将“alliance_MS”改为在线模式。左栏点击“项目”添加新项目并保存。4、在软件初始界面，点击“运行样品”，选择所需项目及色谱系统。5、通过菜单栏“编辑”选择“仪器方法”，新建液相方法，设置流动相组分、洗脱程序、柱温及样品室温度，保存当前的仪器方法。6、通过菜单栏“编辑”选择“新建方法组”，使用向导模式创建新方法组，选择上述方法，点击“完成”。7、在主界面上编辑样品运行序列，选择所需的“方法组/报告方法”，输入“进样体积”、“样品名称”及“运行时间”。8、将控制质谱电脑上的Analyst软件打开，激活“HPLC（2695）_MS”。9、点击Analyst软件菜单栏中的“Scri
14、pt”，选择“Merge MRM”合并所需测的多种目标分析物的MRM通道，并存储一个新的采样离子通道的质谱方法文件（也可双击“Build Acquisition Method”建立方法手动输入）。10、双击“Build Acquisition Method”，将同步模式选为“Lc Sync”，打开文件选择需要的质谱方法。点击“Edit Parameters”，设置“CUR”：35；“IS”：+5500（正离子），-4500（负离子）；“TEM”：550；“GS1”：50；“GS2”：50；每一个的MRM的驻留时间（Dwell Time）要进行优化，尽可能使“Total Scan Time”控制
15、在最窄峰的峰宽的1/12； “Duration”与HPLC的样品运行时间设为一致，保存此质谱方法。11、编辑出与液相相同顺序的样品运行序列。12、在Waters e2695 主机Separations Module界面上输入仪器方法的初始流动相比例进行平衡色谱柱，监测系统压力，待Delta值降至50以下即可。13、在质谱控制电脑上，点击“Submit”进行样品提交，再点击“Start sample”，待右下角四级杆图谱变为“Wait”状态，在液相端电脑上点击运行样品即可进行分析。三、结束工作1、在Empower操作界面，添加一个空白样品（水），设置进样数为1，“方法组/报告方法”为“HPLCMSFLUSH”。2、在Analyst软件界面上，打开编辑一个空白样品（水），选择Penicillin项目下的“HPLCMSFLUSH”方法，并提交运行样品，同样在Empower软件中点击运行，完成冲洗工作。3、待冲洗完毕后，灭活“HPLC（2695）_MS”，关闭软件。4、关闭HPLC的电源。Waters Alliance HPLC e2695操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、将流动相准备好，过0.45微米的滤膜并超声脱气。二、操作步骤1、
