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1、实验二 紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量苯酚是工业废水中一种有害污染物质，需对水中酚含量控制。苯酚在 270-295nm波长处有特征吸收峰，其吸光度与苯酚的含量成正比，应用LambertBeer定律可直接测定水中总酚的含量。一、实验目的1学会使用Cary50型紫外-可见分光光度计2掌握紫外-可见分光光度计的定量分析方法 二、原理简介紫外-可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。紫外-可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即：其中A是吸光度，I、分别为透过样品后光的强度和测试光的强度
2、，为摩尔吸光系数，b为样品厚度。由于苯酚在酸、碱溶液中吸收波长不一致（见下式），实验选择在碱性中测试，选择测试的波长为288nm左右，取紫外-可见光谱仪波长扫描后的最大吸收波长。Cary50是瓦里安公司的单光束紫外-可见分光光度计。仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。三、仪器与溶液准备1、Cary50型紫外-可见分光光度计2、1cm石英比色皿一套3、25 ml容量瓶5只，100 ml容量瓶1只，10ml移液管二支配置250 mg/L苯酚的标准溶液：准确称取 0.0250 g
3、苯酚于 250 mL烧杯中，加入去离子水20 mL使之溶解，加入0.1M NaOH 2mL，混合均匀，移入 100 mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度，摇匀。取5只25 mL容量瓶，分别加入 1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL苯酚标准溶液，用去离子水稀释至刻度摇匀， 作为标准溶液系列。将溶剂，标准溶液，待测水样依此装入石英比色皿。按测试程序的提示，依次放入样品室中进行测试。四、测试过程1、确认样品室内无样品2、开电脑进入Window 系统3、点击进入Cary50 主菜单4、双击 Cary-WinUV图标5、在Win-UV 主显示窗口下，双击所选图标“SCAN”以扫描测定吸收曲
4、线：取上述标准系列任一溶液装进 1cm石英比色皿至4/5，以装有蒸馏水的1cm石英比色皿作为空白参比，设定在 220350 nm波长范围内扫描，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据。6、在Win-UV 主显示窗口下，双击图标“Concentration”进入定量分析主菜单7、设定测试分析步骤:（l）单击 Setup功能键，进入参数设置页面。在Wavelength处填入由步骤5获取的波长数据。（2）按Cary Control 、Standards、Options、Samples、Reports、Auto store顺序，分别设置好菜单中每页的参数。按OK回到“Concentration”界
5、面主菜单。（3）单击View莱单，选择需要显示的内容。例如基本选项Toolbar，buttons，Graphics，Report。（4）单击Zero，提示“Load blank press OK to read” (放空白按OK读)，放入空白蒸馏水到样品室内，按OK测试，测完取出样品。（5）单击 Start, 出现标准样品选择页。选Selected for Analysis（选择分析的标准和样品）。此框的内容为准备分析的标准和样品。（6）按OK进行分析测试。依Presentstdl的提示：放入标准1然后按OK键进行读数。放标准2按OK进行读数。直到全部标准读完。（7）出现“Present Sa
6、mplel Press OK to read”提示框，根据提示，放入样品1按OK开始读样品，直到样品测完。（8）可点击Save Method AS保存此方法，以后可以从Open Method调用此方法。从标准曲线读出水样中苯酚的含量（gL），测试数据采用点击Save Data AS 保存。五、实验数据处理打印报告，读取待测样品的苯酚含量。六、问题与讨论1、为什么紫外-可见光谱定量分析的准确度比红外光谱高？2、为获得准确数据，在使用分光光度计时，哪些操作必不可少？参考文献1、陈培榕,邓勃. 现代仪器分析实验与技术, 清华大学出版社，1999.122、CARY 50/100/300操作手册，美国瓦里安中国有限公司分析仪器服务部，2003
