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1、微生物的实验室培养一、 选择题(每小题5分，共50分)1除了高温加热以外，其它灭菌方法还有()A紫外线照射B真空包装 C用保鲜膜密闭 D添加防腐剂【解析】紫外线照射也可以进行灭菌，故A正确。真空包装是防止污染，故B错误。用保鲜膜密闭是为了保鲜不能消毒和灭菌，故C错误。添加防腐剂是为了防止腐败变质但不能灭菌，故D错误。【答案】A2所有细菌都具有特征是()A都是异养生物B仅在有水条件下繁殖C仅在有氧条件下生长D生存温度都超过80【解析】A、有些细菌是自养型，例如硝化细菌，A错误；B、水是所有微生物生长共同所需的营养物质，B正确；C、有些细菌进行厌氧呼吸，例如产甲烷细菌，C错误；D、有些细菌生长的温
2、度很低，例如生活在终年积雪山上的细菌，D错误。【答案】B3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为10的培养基中得到以下几种统计结果，正确的是()A涂布了1个平板，统计菌落数230B涂布了2个平板，统计菌落数215和260，取平均值为238C涂布了3个平板，统计菌落数21、212和256，取平均值为163D涂布了3个平板，统计菌落数210、240和250，取平均值为233【解析】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30300的进行计数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，所以，A、B、C三
3、项均错误，D项正确。【答案】D4无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是()A对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B将用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌C为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行D实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触【解析】对操作者的衣着和手进行消毒处理，故A错误。对于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基都应进行灭菌操作，故B正确。实验过程中为了避免周围环境中微生物的污染，应在酒精灯火焰附近进行，故C正确。实验操作时应避免已经灭菌的材料用具和周围物品相接触，故D正确。【答案】A5为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏
4、，下列有关叙述不正确的是()A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C临时保藏菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4保藏的方法【解析】对于经常使用的菌种，可以采用斜面培养基临时保藏，故A、B正确。临时保藏菌种容易被污染或产生变异，故C正确。长期保存菌种应采用甘油管藏法在20保藏的方法，故D错误。【答案】D6下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组
5、和对照组平板倒置，37恒温培养2448小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数【解析】配制培养基应用牛肉膏蛋白胨培养基，然后经高压蒸汽灭菌后倒平板，故A正确。应取稀释倍数较小的稀释液进行分别涂平板，故B正确。实验组合对照组都应倒置在相同的培养箱中进行培养24到48小时，故C正确。确定对照组无菌后，应选择30300的实验组平板进行计数，故D错误。【答案】D7.如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是()A步骤倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置B步骤将接种环在火焰上灼烧后迅速沾取菌液后进行平板划线C步骤应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现
6、单个菌落D步骤培养箱培养后可用来对X细菌进行计数【解析】分析图形可知，步骤倒平板操作时，倒好后适当冷却，然后将其倒过来放置，A错误；步骤将接种环在火焰上灼烧后冷却后沾取菌液后进行平板划线，B错误；步骤应按一定的方向顺序划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，C正确；步骤培养箱培养后可用来对X细菌进行分离纯化，得到单个菌落，D错误。【答案】C8.细菌需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖下列与此有关的说法正确的是()A乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B氮源不可能作为细菌的能源物质C琼脂是细菌生长和繁殖中不可缺少的一种物质D以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解
7、菌【解析】乳酸菌的代谢类型属于异养型，利用的碳源为有机物，而硝化细菌的代谢类型属于自养型，利用的碳源为二氧化碳，故A错误；蛋白质既可以作为氮源，又可以作为碳源提供能量，故B错误；琼脂是凝固剂，不是细菌生长和繁殖过程中必需的物质，故C错误；以尿素为唯一氮源的培养基上生长的细菌可能是尿素分解菌，也可能是固氮菌，故D正确。【答案】D9下列有关微生物实验的叙述，不正确的是()A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B平板划线法可用于微生物的计数C分离不同的微生物要采用不同的稀释度D观察菌落的特征可以用来进行菌种的鉴定【解析】微生物培养过程中要进行无菌操作，防止杂菌污染，故A正确；平板划线法可以用于微生物的
8、分离，而不能用于计数，稀释涂布平板法可以用于微生物计数，故B错误；土壤中不同微生物的种群数量是不同的，因此采用的稀释度不同，故C正确；不同微生物的菌落特征不同，因此可以观察菌落的特征来进行菌种的鉴定，故D正确。【答案】B10下列有关微生物培养的叙述，不正确的是()A测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数B在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌C酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源【解析】测定土壤样品的细菌数目常采用稀释涂布平板法进行计数，故A正确；对微生物培养之前，需要对培养基进行灭菌，不
9、能对微生物灭菌，故B错误；酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物的生长有抑制作用，故C正确；分离能分解尿素的细菌时，培养基中要以尿素为唯一氮源，故D正确。【答案】B二、非选择题(共50分)11.(15分)某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株。请回答： (1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)为避免培养皿污染，需将培养皿呈_状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行_处理。为了排除_，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。(3)为了筛选出菌株，可将适量的_试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮
10、色后，如果菌落周围的现象是_，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。(4)纯化菌种时，为了得到单菌落，可采用_法接种于新的培养基平板上。(5)试验操作应在酒精灯火焰附近进行的原因是_。【解析】(1)依题意，欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株，应将土壤样品稀释液接种于以豆油为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于选择培养基。 (2)为避免培养皿污染，需将培养皿呈倒置状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行系列稀释(或“梯度稀释”) 处理。为了排除实验组中非测试因素对实验结果的影响(培养基被污染)，提高实验结果的可信度，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。(3)脂肪可
11、以被苏丹染液染成橘黄色(或被苏丹染液染成红色)，而能高效降解脂肪的菌株所分泌的脂肪酶能够催化脂肪水解，在培养基中的该菌落的周围就会出现透明圈。因此，为了筛选出能高效降解脂肪的菌株，可将适量的苏丹(或“苏丹”)试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围出现透明圈(不出现红色圈或橘黄色圈)，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。 (4)在固体培养基上纯化菌种时，为了得到单菌落，可采用平板划线法。(5)为了避免周围环境中微生物的污染，试验操作应在酒精灯火焰附近进行。【答案】(1)豆油选择(2)倒置系列稀释(或“梯度稀释”)实验组中非测试因素对实验结果的影响(培养基被污染)(3)苏丹(或“苏丹”)出现
12、透明圈(不出现红色圈或橘黄色圈) (4)平板划线(5)避免周围环境中微生物的污染12(15分)为解决塑料袋造成的“白色污染”这一问题，某同学试图从土壤中寻找一种能加速塑料袋自然降解过程的目的菌， 以下是该同学从土壤中寻找并筛选目的菌的流程，请回答下列问题：(1)对培养基灭菌常用的方法是_。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是_。(2)号培养基属于_(按功能分)培养基，其作用是使目的菌能“脱颖而出”。如图采用的接种方法为_。号培养基从物理性质来看，_(填“能”或“不能”)添加琼脂。(3)该同学在稀释倍数为104的培养基中测得平板上菌落数的平均值为20.4，则每毫升样品中的菌落数是_个。
13、(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)(4)假设该同学发现培养基上细菌数目过多而连成一片，说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。原因：_；措施：_。【解析】本题主要考查微生物的培养，意在考查考生的理解能力和分析能力。(1)对培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法。接种前需要将未接种的培养基在37 (或适宜温度)恒温箱中倒置培养一段时间，观察是否有菌落生成以检测培养基是否被污染。(2)号培养基为选择培养基。题图接种方法为稀释涂布平板法。号培养基为液体培养基，其中不能添加凝固剂琼脂。(3)每毫升样品中的菌落数(平板上生长的平均菌落数/涂布平板时所用稀释液的体积)稀释倍数(20.4/0.2)1041.02106(个)。(4)如果培养基上菌落数目过多而连成一片，原因可能是菌液浓度过高，可以通过增大稀释倍数解决；也可能是培养过程中被杂菌污染，可以通过严格无菌操作程序来避免；还有可能是利用接种针划线时，划下一个区域前没有对接种针进行灭菌处理，针对此种状况，在每划一个新的区域前都要对接种针进行灭菌处理。【答案】(1)高压蒸汽灭菌法将未接种的培养基在37 (或适宜温度)恒温箱中倒置培养一段时间(或12天)，观察是否
