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1、 怀化医专微生物学检验教案 编号:2010年上学期授课教师桂 芳教研室主任审核签名李争鸣教学课题衣原体、支原体、立克次体课时授课时间月 日 月 日 月 日 月 日 月 日 月 日2星期星期星期星期星期星期授课对象检验专业班级目的要求1、掌握主要致病性衣原体、支原体、立克次体概念、特点及其微生物学检验法。2、了解衣原体的培养特性和防治原则,立克次体流行病学和防治。教学重点及难点重点 : 1、支原体、支原体、立克次体的概念与特征2、支原体、支原体、立克次体的主要生物学性状3、支原体、支原体、立克次体的微生物学检验难点: 支原体、支原体、立克次体的微生物学检验。教法与学法讲授法课型理论课教学手段多媒
2、体教学内容与时间分配衣原体:(1)衣原体概述。(10min)(2)主要病原性衣原体致病性和微生物学检验。(20min)立克次体:(1)立克次体概述。(5min)(2)主要病原性立克次氏的传播方式与致病特点、微生物学检查。(25min)支原体:(1)概述。(5min)(2)主要病原性支原体的致病作用和微生物学检查,其他支原体的致病作用。(25min)总结 (10min)复习思考题什么叫支原体、支原体、立克次体?各有哪些特征?参考资料1、张卓然主编 临床微生物学与微生物检验人卫出版社 第3版 2006.112、倪语星主编 临床微生物学与检验 人卫出版社 第4版, 2007年3、李凡主编 医学微生物
3、学 人卫出版社 第7版 2008.1自评本次课内容较多,概念之间容易混淆,在讲课过程中特别注意进行各类微生物之间的横向比较,做到重点突出,条理清楚。衣原体、支原体、立克次体第二十六章 衣原体及检验第一节 概 述一、衣原体的概念和特征衣原体(chlamydia)是一类能通过细菌滤器,严格活细胞内寄生,有独特发育周期的原核细胞型微生物。 共同特征: 体积大于病毒,约250500nm,在光学显微镜下可以查见,革兰染色阴性,圆形或椭圆形。含有DNA和RNA。具有细胞壁,但无肽聚糖,只含微量的胞壁酸。对多种抗生素敏感。具有一些酶类但不够完善,这些酶缺乏产生代谢能量的作用,要由宿主细胞提供,故专性细胞内寄
4、生。能在鸡胚卵黄囊及多种细胞中生长繁殖。有独特发育周期,仅在活细胞内以二分裂方式繁殖。 分布: 广泛寄生于人类、鸟类及哺乳动物。 致病种类: 沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体二、生物学性状(一)形态:在细胞内生长繁殖,具有独特的发育周期:1 .原体: 球形,椭圆形,小而致密,0.2-0.4um,光镜下勉强可见;Giemsa染色呈紫色。为成熟的衣原体,具有强的感染性,无繁殖能力。2.始体: 由原体侵入细胞,在空泡发育而成。圆形或椭圆形,体大而疏松,0.5-1.0um,光镜可见,Giemsa染色呈红色,为衣原体的繁殖体,无感染性,以二分裂增殖,在空泡内发育成许多子代的原体。 成熟的子代原体从破
5、裂的细胞中释放出来,再感染新的易感细胞,开始新的发育周期,每一周期约需48-72小时。3、包涵体:衣原体在易感细胞内增殖所形成的网状体和子代原体的空泡,经染色后可在光镜下看到。称为包涵体。经Giemsa染色后呈紫蓝色。碘染色呈褐色。具有鉴别意义。(二)培养特性: 专性活细胞内寄生,多数能在6-8日龄鸡胚卵黄囊中生长繁殖,并可在卵黄囊中找到包涵体和原体。 有些可感染小鼠,如鹦鹉热衣原体等。 可在某些原代或传代细胞株中生长,如Hele-299等,并比鸡胚更敏感。 (三)抵抗力: 耐冷怕热,60 10min 可失去感染性,-70可保存数年;对消毒剂敏感;对利福平、四环素、红霉素、磺胺药敏感。(四)抗
6、原构造与分型1、属特异性抗原:为细胞壁上的脂多糖,但不同于细菌。2、种特异性抗原:为衣原体的主要外膜蛋白(MOMP),可以用补体结合、中和实验测出以鉴别不同的衣原体。3、型特性异抗原:也存在于MOMP,为蛋白质,可对衣原体分型。第二节 主要致病性衣原体一、沙眼衣原体1956年,由汤飞凡首次用鸡胚培养分离到。分三个亚种:沙眼生物亚种沙眼生物变种有A、B、Ba、C、D、Da、E-I、Ia、J、K等14个血清型 ;性病淋巴肉芽肿生物亚种有L1、L2、L2a、L3四个血清 ;鼠生物亚种。(一)生物学性状: 可在细胞浆中形成包涵体(由密集的原体和始体组成)包涵体可呈散在型、帽型、桑椹型或填塞型 Giem
7、sa染色后呈紫色。(二)致病性 所致疾病(1)沙眼:主要由沙眼生物变种的A、B、Ba、C型引起,通过眼眼及眼手眼传播。沙眼衣原体感染结膜上皮细胞并在其中繁殖,在胞浆中可形成散在型、帽型、桑椹型或填塞型包涵体(彩图19),主要表现为滤泡,乳头增殖,血管翳和瘢痕形成。由于反复发作,使瘢痕加剧,损伤角膜变混浊,最终可失眼。(2)包涵体结膜炎:由沙眼生物变种D-K血清型引起。可经性接触,手眼或间接接触而感染。新生儿可经产道感染引起化脓性结膜炎(也称包涵体性脓漏眼)。不侵犯角膜。(3)泌尿生殖道感染:经性接触传播,主要由D-K型沙眼生物变种引起,是性病的主要病原。还可引起尿道炎、阴道炎、盆腔炎等。如输卵
8、管炎反复发作,可导致不孕症和宫外孕。(4)性病淋巴芽肿(lymphongranuloma venereum, LGV):由;L1、L2、L2a、L3四个血清型引起。主要通过性接触传播,是一种性病。外阴部可形成溃疡,还可侵犯腹股沟淋巴结,也可累及会阴、肛门、直肠及盆腔淋巴结,发生化脓性炎症和慢性肉芽肿。二、鹦鹉热衣原体 引起呼吸道感染,鹦鹉热原为野生鸟类及家禽的自然感染,也可经呼吸道传给人,发生呼吸道感染和肺炎。 三、肺炎衣原体只有一个血清型,1965年从台湾一小学生眼结膜分离出一株称TW-183;1983年又从美国的大学生的急性呼吸道感染者的咽喉部分离出另一株称AR-39,将这两株的字头合并,
9、称作TWAR株。致病性:引起急性呼吸道感染。 寄生于人,是人类重要的呼吸道病原体,经呼吸道感染。可引起肺炎、支气管炎、咽炎。 世界各地肺炎衣原体感染非常广泛,成人体内的抗体阳性率可达50%,约5-10%的成人肺炎是由肺炎衣原体引起。 近年,还发现TWAR株慢性感染与冠状动脉硬化和心脏病的发生有关。三种衣原体主要特性比较。第三节 衣原体的微生物学检验一、标本采集: 1、沙眼、包涵体结膜炎:用棉拭在眼穹隆部、眼结膜上涂擦,或用无菌小刀刮取上皮细胞;2、泌尿生殖道感染:取泌尿生殖道拭子、宫颈刮片、或精液等;3、性病淋巴肉芽肿:抽取淋巴结脓肿脓液,采集血清做抗体检测;4、鹦鹉热、和肺炎衣原体感染:可取
10、痰、咽拭子、血清。二、检验程序三、检验方法及鉴定1、直接涂片镜检:沙眼急性期可在结膜病灶作刮片,用Giemsa染色直接镜检或免疫荧光检查,观察上皮细胞浆内有无特殊包涵体,查见有诊断价值。2、分离培养:(1)鸡胚卵黄囊接种法:7日龄鸡胚,标本先用抗生素处理。(2)细胞培养法:经X线照射的McCoy细胞和Hela-299细胞。(3)小鼠接种:用于鹦鹉热衣原体的分离,可用:腹腔、脑内、鼻腔接种。3、免疫学诊断:查抗原和抗体,目前均有相应试剂盒供应。(1) 抗体检测:补体结合试验、微量免疫荧光法等 (2) 抗原检测:免疫荧光染色、金标法、酶标法等(3) 核酸探针或PCR技术作用核酸检测,其敏感性、特异
11、性更优。第二十七章 立克次体及检验概念:立克次体(Rickettsia)是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,在形态结构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似:具有细胞壁;以二分裂方式繁殖;含有RNA和DNA两种核酸;由于酶系不完整需在活细胞内寄生;对多种抗生素敏感等。共同特点 :大多是人畜共患病原体,引起人类发热和出疹性疾病;以节肢动物为传播媒介或为储存宿主;大小介于细菌与病毒之间,光镜下呈多形态性,主要为微,杆状或球杆状,革兰阴性;除了少数外全是专性活细胞内寄生;菌体内同时含有DNA和 RNA两类核酸;以二分裂方式进行繁殖;对抗生素敏感。 对人类致病的立克次体科包括立克次体属、柯克斯体属
12、和罗沙利马体属等三个属。立克次体属又分成三个生物群:斑疹伤寒群、斑点热群与恙虫病群。 第一节概 述一、生物学性状(一)形态染色与结构1、形态:多形态,球杆状或杆状,0.30.60.82.0um。在感染细胞内,常聚集成致密团块状,也可成单或成双排列。 不同立克次体在细胞内的分布不同,可供初步识别。如普氏立克次体常散在于胞质中,恙虫病立克次体在胞质近核旁,而斑点热群立克次体则在胞质和核内均可发现。革兰氏染色阴性,但一般着色不明显,因此常用Giemnez、Giemsa或Macchiavello法染色,其中以Gimenez法最好。该法着染后,除恙虫病立克次体呈暗红色外,其他立克次体均呈鲜红色。Giem
13、sa法和Macchiavello法分别将立克次体染成紫或蓝色和红色。2、结构:与革兰氏阴性杆菌非常相似。用电子显微镜观察: 最外层为由多糖组成的粘液层,有粘附宿主细胞及抗吞噬作用。其内为微荚膜或称外包膜,由多糖或脂多糖组成。 细胞壁 包括外膜(磷脂双分子层)、肽聚糖及蛋白脂类三层。有与细菌内毒素性质相似的脂多糖复合物,但脂类含量比一般细菌高得多。胞浆膜 为双层类脂,主要由磷脂组成。胞质内有核糖体(由30s和50s两个亚基组成)。(二)培养特性 常用的培养方法有1、动物接种: 多种病原性立克次体能在豚鼠、小鼠等动物体内有不同程度的繁殖。在豚鼠睾丸内保存的立克次能保持致病力和抗原性不变。2、鸡胚接
14、种: 立克次体还能在鸡胚卵黄囊中繁殖,常用作制备抗原或疫苗的材料。3、细胞培养: 常用的细胞培养系统有敏感动物的骨髓细胞、血液单核细胞和中性粒细胞等,一般不产生细胞病变。以3235孵育最为适宜。(三)抗原结构 立克次体有两种主要抗原: 一种为可溶性(醚类)抗原,耐热,与细胞壁表面的粘液层有关,为群特异性抗原。另一种为颗粒(外膜)性抗原,不耐热,与 细胞壁成份有关,为种特异性抗原。在斑疹伤寒群,群特异性抗原在普氏、莫氏及加拿大立克次体中均存在,与其他属的立克次体很少交叉或不交叉,而种特异性蛋白抗原在上述三个种间互不交叉。 恙虫病群中只有恙虫病立克次体一个种,根据恙虫病立克次体种特异性抗原性的差异,可分为若干血清型。立克次体具有与变形杆菌某些X株的菌体抗原(O)共同的耐热多糖类抗原,临床上常用以代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应,作为人或动物血清中相关抗体的检查。这种交叉凝集试验称为外斐反应(Weii-Felix reaction),作为辅助诊断。(四)抵抗力除贝钠(Q热)柯克斯体外,立克次体抵抗力较弱。5630分钟死亡;室温放置数小时即可丧失活力。对低温及干燥的抵抗力强,在干燥虱粪中