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1、 怀化医专微生物学检验教案 编号：2010年上学期授课教师桂 芳教研室主任审核签名李争鸣教学课题衣原体、支原体、立克次体课时授课时间月 日 月 日 月 日 月 日 月 日 月 日2星期星期星期星期星期星期授课对象检验专业班级目的要求1、掌握主要致病性衣原体、支原体、立克次体概念、特点及其微生物学检验法。2、了解衣原体的培养特性和防治原则，立克次体流行病学和防治。教学重点及难点重点 ： 1、支原体、支原体、立克次体的概念与特征2、支原体、支原体、立克次体的主要生物学性状3、支原体、支原体、立克次体的微生物学检验难点： 支原体、支原体、立克次体的微生物学检验。教法与学法讲授法课型理论课教学手段多媒
2、体教学内容与时间分配衣原体:（1）衣原体概述。（10min）（2）主要病原性衣原体致病性和微生物学检验。（20min）立克次体:（1）立克次体概述。（5min）（2）主要病原性立克次氏的传播方式与致病特点、微生物学检查。（25min）支原体：（1）概述。（5min）（2）主要病原性支原体的致病作用和微生物学检查，其他支原体的致病作用。（25min）总结 （10min）复习思考题什么叫支原体、支原体、立克次体？各有哪些特征？参考资料1、张卓然主编 临床微生物学与微生物检验人卫出版社 第3版 2006.112、倪语星主编 临床微生物学与检验 人卫出版社 第4版， 2007年3、李凡主编 医学微生物
3、学 人卫出版社 第7版 2008.1自评本次课内容较多，概念之间容易混淆，在讲课过程中特别注意进行各类微生物之间的横向比较，做到重点突出，条理清楚。衣原体、支原体、立克次体第二十六章 衣原体及检验第一节 概 述一、衣原体的概念和特征衣原体（chlamydia）是一类能通过细菌滤器，严格活细胞内寄生，有独特发育周期的原核细胞型微生物。 共同特征： 体积大于病毒，约250500nm，在光学显微镜下可以查见，革兰染色阴性，圆形或椭圆形。含有DNA和RNA。具有细胞壁，但无肽聚糖，只含微量的胞壁酸。对多种抗生素敏感。具有一些酶类但不够完善，这些酶缺乏产生代谢能量的作用，要由宿主细胞提供，故专性细胞内寄
4、生。能在鸡胚卵黄囊及多种细胞中生长繁殖。有独特发育周期，仅在活细胞内以二分裂方式繁殖。 分布： 广泛寄生于人类、鸟类及哺乳动物。 致病种类： 沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体二、生物学性状（一）形态：在细胞内生长繁殖，具有独特的发育周期：1 .原体： 球形，椭圆形，小而致密，0.2-0.4um，光镜下勉强可见；Giemsa染色呈紫色。为成熟的衣原体，具有强的感染性，无繁殖能力。2.始体： 由原体侵入细胞，在空泡发育而成。圆形或椭圆形，体大而疏松，0.5-1.0um，光镜可见，Giemsa染色呈红色，为衣原体的繁殖体，无感染性，以二分裂增殖，在空泡内发育成许多子代的原体。 成熟的子代原体从破
5、裂的细胞中释放出来，再感染新的易感细胞，开始新的发育周期，每一周期约需48-72小时。3、包涵体：衣原体在易感细胞内增殖所形成的网状体和子代原体的空泡，经染色后可在光镜下看到。称为包涵体。经Giemsa染色后呈紫蓝色。碘染色呈褐色。具有鉴别意义。（二）培养特性： 专性活细胞内寄生，多数能在6-8日龄鸡胚卵黄囊中生长繁殖，并可在卵黄囊中找到包涵体和原体。 有些可感染小鼠，如鹦鹉热衣原体等。 可在某些原代或传代细胞株中生长，如Hele-299等，并比鸡胚更敏感。 （三）抵抗力： 耐冷怕热，60 10min 可失去感染性，-70可保存数年；对消毒剂敏感；对利福平、四环素、红霉素、磺胺药敏感。(四)抗
6、原构造与分型1、属特异性抗原：为细胞壁上的脂多糖，但不同于细菌。2、种特异性抗原：为衣原体的主要外膜蛋白（MOMP）,可以用补体结合、中和实验测出以鉴别不同的衣原体。3、型特性异抗原：也存在于MOMP，为蛋白质，可对衣原体分型。第二节 主要致病性衣原体一、沙眼衣原体1956年，由汤飞凡首次用鸡胚培养分离到。分三个亚种：沙眼生物亚种沙眼生物变种有A、B、Ba、C、D、Da、E-I、Ia、J、K等14个血清型 ；性病淋巴肉芽肿生物亚种有L1、L2、L2a、L3四个血清 ；鼠生物亚种。（一）生物学性状： 可在细胞浆中形成包涵体（由密集的原体和始体组成）包涵体可呈散在型、帽型、桑椹型或填塞型 Giem
7、sa染色后呈紫色。（二）致病性 所致疾病（1）沙眼：主要由沙眼生物变种的A、B、Ba、C型引起，通过眼眼及眼手眼传播。沙眼衣原体感染结膜上皮细胞并在其中繁殖，在胞浆中可形成散在型、帽型、桑椹型或填塞型包涵体（彩图19），主要表现为滤泡，乳头增殖，血管翳和瘢痕形成。由于反复发作，使瘢痕加剧，损伤角膜变混浊，最终可失眼。（2）包涵体结膜炎：由沙眼生物变种D-K血清型引起。可经性接触，手眼或间接接触而感染。新生儿可经产道感染引起化脓性结膜炎（也称包涵体性脓漏眼）。不侵犯角膜。（3）泌尿生殖道感染：经性接触传播，主要由D-K型沙眼生物变种引起，是性病的主要病原。还可引起尿道炎、阴道炎、盆腔炎等。如输卵
8、管炎反复发作，可导致不孕症和宫外孕。（4）性病淋巴芽肿（lymphongranuloma venereum, LGV）：由；L1、L2、L2a、L3四个血清型引起。主要通过性接触传播，是一种性病。外阴部可形成溃疡，还可侵犯腹股沟淋巴结，也可累及会阴、肛门、直肠及盆腔淋巴结，发生化脓性炎症和慢性肉芽肿。二、鹦鹉热衣原体 引起呼吸道感染，鹦鹉热原为野生鸟类及家禽的自然感染，也可经呼吸道传给人，发生呼吸道感染和肺炎。 三、肺炎衣原体只有一个血清型，1965年从台湾一小学生眼结膜分离出一株称TW-183；1983年又从美国的大学生的急性呼吸道感染者的咽喉部分离出另一株称AR-39,将这两株的字头合并，
9、称作TWAR株。致病性：引起急性呼吸道感染。 寄生于人，是人类重要的呼吸道病原体，经呼吸道感染。可引起肺炎、支气管炎、咽炎。 世界各地肺炎衣原体感染非常广泛，成人体内的抗体阳性率可达50%，约5-10%的成人肺炎是由肺炎衣原体引起。 近年，还发现TWAR株慢性感染与冠状动脉硬化和心脏病的发生有关。三种衣原体主要特性比较。第三节 衣原体的微生物学检验一、标本采集： 1、沙眼、包涵体结膜炎：用棉拭在眼穹隆部、眼结膜上涂擦，或用无菌小刀刮取上皮细胞；2、泌尿生殖道感染：取泌尿生殖道拭子、宫颈刮片、或精液等；3、性病淋巴肉芽肿：抽取淋巴结脓肿脓液，采集血清做抗体检测；4、鹦鹉热、和肺炎衣原体感染：可取
10、痰、咽拭子、血清。二、检验程序三、检验方法及鉴定1、直接涂片镜检：沙眼急性期可在结膜病灶作刮片，用Giemsa染色直接镜检或免疫荧光检查，观察上皮细胞浆内有无特殊包涵体，查见有诊断价值。2、分离培养：（1）鸡胚卵黄囊接种法：7日龄鸡胚，标本先用抗生素处理。（2）细胞培养法：经X线照射的McCoy细胞和Hela-299细胞。（3）小鼠接种：用于鹦鹉热衣原体的分离，可用：腹腔、脑内、鼻腔接种。3、免疫学诊断：查抗原和抗体，目前均有相应试剂盒供应。(1) 抗体检测：补体结合试验、微量免疫荧光法等 (2) 抗原检测：免疫荧光染色、金标法、酶标法等(3) 核酸探针或PCR技术作用核酸检测，其敏感性、特异
11、性更优。第二十七章 立克次体及检验概念：立克次体（Rickettsia）是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，在形态结构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似：具有细胞壁；以二分裂方式繁殖；含有RNA和DNA两种核酸；由于酶系不完整需在活细胞内寄生；对多种抗生素敏感等。共同特点 ：大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出疹性疾病；以节肢动物为传播媒介或为储存宿主；大小介于细菌与病毒之间，光镜下呈多形态性，主要为微，杆状或球杆状，革兰阴性；除了少数外全是专性活细胞内寄生；菌体内同时含有DNA和 RNA两类核酸；以二分裂方式进行繁殖；对抗生素敏感。 对人类致病的立克次体科包括立克次体属、柯克斯体属
12、和罗沙利马体属等三个属。立克次体属又分成三个生物群：斑疹伤寒群、斑点热群与恙虫病群。 第一节概 述一、生物学性状（一）形态染色与结构1、形态：多形态，球杆状或杆状，0.30.60.82.0um。在感染细胞内，常聚集成致密团块状，也可成单或成双排列。 不同立克次体在细胞内的分布不同，可供初步识别。如普氏立克次体常散在于胞质中，恙虫病立克次体在胞质近核旁，而斑点热群立克次体则在胞质和核内均可发现。革兰氏染色阴性，但一般着色不明显，因此常用Giemnez、Giemsa或Macchiavello法染色，其中以Gimenez法最好。该法着染后，除恙虫病立克次体呈暗红色外，其他立克次体均呈鲜红色。Giem
13、sa法和Macchiavello法分别将立克次体染成紫或蓝色和红色。2、结构：与革兰氏阴性杆菌非常相似。用电子显微镜观察： 最外层为由多糖组成的粘液层，有粘附宿主细胞及抗吞噬作用。其内为微荚膜或称外包膜，由多糖或脂多糖组成。 细胞壁 包括外膜（磷脂双分子层）、肽聚糖及蛋白脂类三层。有与细菌内毒素性质相似的脂多糖复合物，但脂类含量比一般细菌高得多。胞浆膜 为双层类脂，主要由磷脂组成。胞质内有核糖体（由30s和50s两个亚基组成）。（二）培养特性 常用的培养方法有1、动物接种： 多种病原性立克次体能在豚鼠、小鼠等动物体内有不同程度的繁殖。在豚鼠睾丸内保存的立克次能保持致病力和抗原性不变。2、鸡胚接
14、种： 立克次体还能在鸡胚卵黄囊中繁殖，常用作制备抗原或疫苗的材料。3、细胞培养： 常用的细胞培养系统有敏感动物的骨髓细胞、血液单核细胞和中性粒细胞等，一般不产生细胞病变。以3235孵育最为适宜。（三）抗原结构 立克次体有两种主要抗原： 一种为可溶性（醚类）抗原，耐热，与细胞壁表面的粘液层有关，为群特异性抗原。另一种为颗粒（外膜）性抗原，不耐热，与 细胞壁成份有关，为种特异性抗原。在斑疹伤寒群，群特异性抗原在普氏、莫氏及加拿大立克次体中均存在，与其他属的立克次体很少交叉或不交叉，而种特异性蛋白抗原在上述三个种间互不交叉。 恙虫病群中只有恙虫病立克次体一个种，根据恙虫病立克次体种特异性抗原性的差异，可分为若干血清型。立克次体具有与变形杆菌某些X株的菌体抗原（O）共同的耐热多糖类抗原，临床上常用以代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，作为人或动物血清中相关抗体的检查。这种交叉凝集试验称为外斐反应（Weii-Felix reaction），作为辅助诊断。(四)抵抗力除贝钠(Q热)柯克斯体外,立克次体抵抗力较弱。5630分钟死亡；室温放置数小时即可丧失活力。对低温及干燥的抵抗力强，在干燥虱粪中
