沙门菌的检验技术集

《沙门菌的检验技术集》由会员分享，可在线阅读，更多相关《沙门菌的检验技术集（43页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、是一大群寄生于动物肠道内生化反应和抗原构 造相似的革兰氏阴性杆菌 一 沙门氏菌生物学特性 国内外沙门菌检测方法 传统方法 国家标准 GB4789 4 2010 食品微生物学检验沙门氏菌检验 行业标准 SN 0170 1992 出口食品沙门氏菌属 包括亚利桑那菌 检验方法 FDA Food Drug Administration AOAC Association of Official Analytical Chemists FSIS FOOD SAFETY AND INSPECTION SERVICE ISO 加拿大官方食品微生物分析方法 标本采集 增菌培养 肠道选择性培养基分离培养 革兰染色

2、生化反应 取可疑菌落 血清学鉴定 食品中沙门氏菌检测的基本程序 沙门菌常用生化试验 三糖铁 TSI 尿素酶试验 阴性 黄 阳性 红 沙门菌常用生化试验 吲哚试验 阴性 液面黄 阳性 液面红 VP试验 阳性 红色 阴性 不变 沙门菌常用生化试验 赖氨酸脱羧酶试验 对照 阳性 紫 阴性 黄 丙二酸盐试验 阳性 兰 阴性 不变 ONPG试验 阳性 黄 空白 沙门菌常用生化试验 冻肉 蛋品 乳品及其他加工食品鲜肉 鲜蛋 鲜乳或其他未经加工的食品 前增菌法 25g BPW225mL 36 1 一般4h 干蛋品18h 24h 10mL MM 或TTB 100mL 10mL SC100mL 直接增菌法 25

3、g 灭菌生理盐水25mL 检样匀液25mL MM 或TTB 100mL 检样匀液25mL SC100mL BSDHL 或HE WS SS TSI 排除A A H2S 结果 靛基质 尿素 KCN 赖氨酸 沙门氏菌血清学试验 甘露醇 山梨醇 H2S 靛 尿 KCN 赖 H2S 靛 尿 KCN 赖 非如左述的各种反应结果 沙门氏菌血清学试验 ONPG 沙门氏菌非沙门氏菌 42 18h 24h36 1 18h 24h42 18h 24h36 1 18h 24h 36 1 40h 48h36 1 18h 24h 微生物学检验 沙门氏菌检验 中华人民共和国国家标准GB T 4789 4 2010 前增菌

4、使食品加工过程中受伤的沙门菌细胞恢 复活力 未经加工过的食品 检验前不需要前增菌 前增菌 25克 加工食品 225毫升缓冲蛋白胨 水 37度培养4小时 干蛋品18 24小时 一 前增菌 选择性增菌 l含选择性抑制剂 l1 1稀释液而不是1 10 提高检出率 增菌 移取10毫升接种于100mL的增菌液中 氯 化镁孔雀绿 MM 或四硫酸钠煌绿 TTB 亚 硒酸盐胱氨酸 SC 一种增菌剂不可能适合所有的沙门菌 所以 要 同时使用两种以上的培养基增菌 二 分离培养 最适生长温度为35 37 最适pH值为6 8 7 8 选择性琼脂平板 BS培养基 亚硫酸铋琼脂 DHL琼脂 HE 海克顿肠内琼脂培养基 或

5、WS 琼脂 SS琼脂 BS最适合 但为提高检出率 需要使用一个BS培 养基 同时再用另一个DHL HE SS或 WS 选择选择 琼琼脂平板 沙门门氏菌 沙门门氏菌 即亚亚利桑那菌 亚亚硫酸琼琼脂 BS琼琼脂 产产硫化氢氢菌落为为黑色有 金属光泽泽 棕褐色或灰色 菌落周围围培养基可呈黑 色或棕色 有些菌株不产产 生硫化氢氢 形成灰绿绿色的 菌落 周围围培养基不变变 黑色有金属光泽泽 DHL琼琼脂无色半透明 产产硫化氢氢菌 落中心带带黑色或几乎全黑 色 乳糖迟缓迟缓 阳性或阴性的菌株与沙门门氏菌 相同 乳糖阳性的菌株为为粉 红红色 中心带带黑色 HE琼琼脂 WS琼琼脂 蓝绿蓝绿 色或蓝蓝色 多数菌

6、 株产产硫化氢氢 菌落中心黑 色或几乎全黑色 乳糖阳性的菌株为为黄色 中心黑色或几乎全 黑色 乳糖迟缓迟缓 阳性或阴性的菌株为蓝绿为蓝绿 色或蓝蓝色 中心黑色或几乎全黑色 SS琼琼脂 无色半透明 产产硫化 氢氢菌株有的菌落中心带带黑 色 但不如以上培养基明 显显 乳糖迟缓迟缓 阳性或阴性的菌株 与沙门门氏菌 相同 乳糖阳性的菌株为为 粉红红色 中心黑色 但中心无黑色形成时时与 大肠肠艾希氏菌不能区分 lSS平板 l分离肠道致病菌的强选择培养基 lSS平板组成 l基础培养基 乳糖 抑制剂 胆盐 枸橼酸 钠 0 1 煌绿水溶液 指示剂 中性红 lSS平板上肠道细菌的生长现象 l肠道致病菌 不分解乳

7、糖 菌落无色或淡黄 色 l肠道非致病菌 分解乳糖产酸 菌落呈红色 肠道菌选择性培养基分离培养 l分离培养 l取增菌液划线接种于SS琼脂平板 于37 培养18 24h 观察菌落特征 l肠道致病菌在SS平板上的菌落特征 l沙门氏菌形成不发酵乳糖菌落 l无色透明 光滑湿润 边缘整齐菌落 发酵乳糖菌落 大肠杆菌菌落 不发酵乳糖菌落 肠道致病菌菌落 SS培养基平板分离 革兰染色 沙门氏菌 革兰阴性杆菌 三 五项生化试验 1 三糖铁琼脂试验 2 靛基质试验 吲哚试验 3 尿素酶试验 4 氰化钾试验 KCN 5 赖氨酸脱羧酶试验 1 三糖铁琼脂 TSI 成分 蛋白胨 20 0g 牛肉膏 3 0g 乳 糖 1

8、0 0g 蔗 糖 10 0g 葡萄糖 1 0g 硫酸亚铁铵 含6个结晶水 0 5g 酚 红 0 025g或5g L溶液5mL 氯化钠 5 0g 硫代硫酸钠0 5g 琼 脂 12 0g 蒸馏水 1000 0mL TSI生化原理 斜面部分暴露于空气中 为有氧环境 而下部 与空气隔绝是相对厌氧的环境 因此TSI时 最重要的是斜面部分和管下部琼脂的长度 两 者均为3cm 以保证两部分相对应的有氧或 厌氧环境 测试时使用接种针先穿刺至底部 而后于斜面作划线 接种 经培养18 24小时后 依情况判断糖类发酵情形 观察结果 有三种类型 A 非发酵型 无碳氢化合物发酵 所以无酸产生 斜面上琼脂的肽降解产物是碱

9、性物质导致斜 面变红 这种类型的细菌称为非发酵型 B 非乳糖发酵型 如果接种的是发酵葡萄糖不发酵乳糖的 细菌 培养基内仅有0 1 葡萄糖可以产酸 开始阶段 培养8 12h时 产生的酸足以引起斜面和底部颜色 变成黄色 在接下来的时间里 葡萄糖被完全消耗 斜面部分的细菌在有氧条件下开始氧化降解氨基酸 产生的胺类很快就中和斜面上存在的酸 到18 24h 整个斜面又转换成碱性PH 颜色有变成红色 深部 厌氧区域 氨基酸降解不足以中和形成的酸 培 养基仍为黄色 C 乳糖 蔗糖 发酵型 三糖铁 TSI 试验 肠道杆菌科为革兰氏阴性菌 可发酵葡萄糖产酸 利用糖类发酵之不同与硫化氢产生与否 加以区分 三糖铁琼

10、脂斜面培养基含有1 乳糖及蔗糖与0 1 葡 萄糖作为发酵基质 且以酚红作为酸碱指示剂 如培 养基由橘红转为黄色 表示有糖类发酵 三糖铁 TSI 琼脂试验 本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气 变黄 产生硫化氢 变黑 葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄 但因量少 生成的少量酸 因接触空气而氧化 加之细菌利用培养基中含氮物质 生成碱性产物 故使斜面后来又变红 底部由于是在厌氧状态下 酸类不被氧化 所以仍 保持黄色 a uninoculated b little change alkaline c alkaline acid d acid acid e acid acid slant color

11、 butt color gas production hydrogen sulfide production 制好的培 养基 对照管 斜面红色 底面黄色 培养基全黄色 斜面 底部黄 色 并 产生H2S 斜面红色 底部黑 色 产生H2S 底面黄色 并产生CO2 1 斜面碱性 红色 底部酸性 黄色 产 气或不产气 产气时会造成琼脂裂开 表示 仅葡萄糖发酵 因微生物优先分解葡萄糖产酸 使培养基变黄 但因葡萄糖含量低 于斜面 产生之微量酸立即氧化而呈碱性反应 同时培 养基中的蛋白质也随之利用而产碱 培养基底 部则因氧张力较小 且微生物生长较慢 故仍 维持酸性反应 2 斜面酸性 黄色 底部酸性 黄色 产

12、 气或不产气 表示除了葡萄糖发酵外 乳糖与 或 蔗糖也发酵 由于乳糖与蔗糖浓度高 经继续发酵 可维持培养基斜面与底部保持酸 性反应 3 斜面碱性 红色 底部碱性 红色 或无 变化 橘红色 表示无糖类发酵 而蛋白质则 于有氧或厌氧条件下进行代谢产生氨 而使培养 基呈碱性反应 如有氧与厌氧均发生蛋白质分解 则斜面与底部均呈碱性反应 为使结果准确 应于接种培养18 24小时内观 察结果 以确保糖类尚未用尽 且蛋白质分解之 碱性终产物尚未产生 培养基变黑 4 三糖铁琼脂培养基中 亦含有硫代硫酸钠 若微生物有硫化氢产生 会 与亚铁离子作用生成不溶性 硫化亚铁之沉淀 进而使培 养基变黑 肠杆菌科各属在三糖

13、铁琼脂内的反应结果 斜面底层层产产气硫化氢氢可能的菌属和种 沙门门氏菌属 弗劳劳地氏柠柠檬酸 杆菌 变变形杆菌属 缓缓慢爱爱德 华华氏菌 沙门门氏菌 弗劳劳地氏柠柠檬酸 杆菌 普通变变形杆菌 沙门门氏菌属 大肠肠埃希氏菌 蜂窝窝哈夫尼亚亚菌 摩根氏菌 普罗罗菲登斯菌属 伤伤寒沙门门氏菌 鸡鸡沙门门氏菌 志贺贺氏菌属 大肠肠埃希氏菌 蜂窝窝哈夫尼亚亚菌 摩根氏菌 普罗罗菲登斯菌属 大肠肠埃希氏菌 肠肠杆菌属 克 雷伯氏菌属 沙雷氏菌属 弗 劳劳地氏柠柠檬酸杆菌 注 阳性 阴性 多数阳性 少数阴性 肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表 反应序号 硫化氢 H2S 靛基质pH7 2尿素 氰化钾 KCN 赖氨

14、酸脱羧酶判定结果 A1 沙门氏菌属 A2 沙门氏菌属 少见 缓慢爱 德华氏菌 A3 弗劳地氏柠檬酸杆菌 奇异 变形杆菌 A4 普通变形杆菌 B1 沙门氏菌属 大肠埃希氏 菌 甲型副伤寒沙门氏菌 大肠埃希氏菌 志贺氏菌属 B2 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 志贺氏菌属 B3 克雷伯氏菌族各属阴沟肠杆 菌 弗劳地氏柠檬酸杆菌 B4 摩根氏菌 普罗菲登斯菌属 注1 三糖铁琼脂底层均产酸 不产气者可排除 斜面产酸与产气与否均不限 注2 KCN和赖氨酸可选作其中一项 但不能判定结果时 仍需补做另一项 注3 表示阳性 表示阴性 表示多数阳性 少数阴性 2 靛基质 吲哚 试验 阴性 液面黄 阳性 液面玫瑰红

15、3 尿素酶试验 阴性 黄 阳性 红 5 赖氨酸脱羧酶试验 对照 阳性 紫 阴性 黄 4 氰化钾试验 浑浊 为 ONPG试验 阳性 黄 空白 丙二酸盐试验 阳性 兰 阴性 不变 沙门氏菌O多价血清凝集试验 左为阳性 右为阴性对照 3 3 血清学试验结果 结果报告 l凡血清学鉴定与生化反应均符合沙门氏菌者 l报告 食品25g检出沙门氏菌 l反之则报告 食品25g未检出沙门氏菌 出口食品沙门氏菌属 包括亚利桑那菌 检验方法 肉类 蛋品 缓冲胨水 BPW 四硫磺酸盐煌绿 TTB 亚硒酸盐胱氨酸 SC 37 4h or 20 24h 直接选择性增菌 亚硒酸盐胱氨酸 SC 四硫磺酸盐煌绿 TTB 37 2

16、4 2h BS DHL 亚利桑那菌琼脂 前增菌 37 24 48h TSI 赖氨酸脱羧酶TSI 尿素酶 37 24 48h 生化试验 血清学试验 O 抗原 Vi 抗原 42 20 2h 37 24 48h 结果判定 检验检疫行业标准SN 0170 92 样品 20类 25g 225mL 乳糖肉汤 LB or 胰酪胨大豆肉汤 TSB or 煌绿溶液 BG or 通用前增菌肉汤 UPB or营养肉汤 NB or 再造脱脂奶粉 or 四硫酸盐煌绿 TT pH6 8 0 2 24 2 h 35 RVTT 43 0 2 or 35 2 0 24 2h 24 2h 42 0 2 BS XLD HE 24 2h 35 TSI LIA 非沙门菌 沙门菌非沙门菌 LIA LIA TSI K ALIA TSI A A 尿素酶 H抗原 多价H抗血清或Spicer Edwards flagellar H test 赖氨酸脱羧酶 酚红卫矛醇肉汤 色氨酸肉汤 KCN 丙二酸盐 吲哚 O抗原 酚红乳糖肉汤 酚红蔗糖肉汤 MR VP 西蒙氏柠檬酸盐 5种商业生化鉴定系统 API 20E Enterotube II E