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1、1薄层法测定黄芪及消痞胶囊中黄芪甲甙的含量作者：王胜春王俊琴皇甫娟 【关键词】黄芪甲甙, 关键词 :薄层色谱法;含量测定; 黄芪甲甙 0 引言 黄芪为常用中药，药方中出现频率极高，现代药理学研究表明，黄芪甲甙为主要活性成分，由于黄芪甲甙分子结构紫外吸收弱，常在溶剂的紫外吸收范围内，紫外色谱测定干扰大，薄层测定法即为黄芪甲甙定量分析的首选方法，薄层色谱测定干扰因素多，重复性差，文献1-4报道对测定方法评价不一，我们采用薄层色谱测定药材与制剂中黄芪甲甙的含量，现报道如下: 1 材料和方法 1.1 材料 CS-9000 薄层扫描仪，日本岛津;毛细管（USADrummand） ;黄芪甲甙对照品，批号
2、:0781-9807 中国药品生物制品鉴定所;黄芪购自陕西大同和河北张家口;薄层层析硅胶G（60 型） 、高效薄层板购自青岛海洋化工厂，所用试剂均为分析2纯. 1.2 方法 1.2.1 标准曲线与线性范围取黄芪甲甙对照品适量，精密称定，配成 1gL-1 的对照品溶液. 精密吸取对照品溶液2，3 ，4 ， 5 和 6L，交叉点于同一硅胶 G 板上，用氯仿- 甲醇-水（653510）的下层液-甲酸（202）为展开剂，展开，取出，晾干，显色剂为;硫酸-乙醇- 水（107515 ） ，热风吹至斑点清晰，测定波长 s=530nm 参比波长 R=700nm，反射法锯齿扫描测定各斑点吸收峰面积，以面积为纵坐
3、标，对照品为横坐标，其回归方程为 Y=0.6282+0.00104Xr=0.9997，线性范围 26g. 图 1 黄芪甲甙含测标准曲线图略 1.2.2 稳定性与精密度考察精密吸取对照品液、供试品液分别点于硅胶 G 薄层板上，按上述方法操作扫描测定，每 30min 测定一次斑点面积，5 次测定面积为 :4314，4559，4452，4353 和 3256.再取硅胶 G 板 5 块，吸取黄芪和消痞胶囊（991117）供试品液5L，分别交叉点于硅胶 G 板上按前述方法测定，所测黄芪供试品含量分别为:1.816，1.831 ，1.828，1.815 和1.820mgg-1，RSD=0.39%所测消痞胶
4、囊中黄芪甲甙含量分别为:0.41，0.44，0.41，0.41 和 0.44mgg-31RSD=3.89%，精密度符合含量测定要求. 1.2.3 回收试验取消痞胶囊样品（991110）粉末约 2g 精密称定，准确加入黄芪甲甙对照品溶液 1mL，依样品测定黄芪甲甙的回收含量. 1.2.4 样品测定取黄芪药材粉末约 1g，消痞胶囊内容物约 2g，精密称定，分别加 0.036molL-1 氢氧化钾乙醇溶液30mL，回流提取 2 次，每次 1h，合并 2 次提取液置水浴挥干，残渣加水 15mL，溶散并定量移至分液漏斗内，用水饱和的正丁醇提取 3 次，每次 20mL，合并提取液用 1.8molL-1 盐
5、酸溶液洗脱 3 次，每次 20mL，正丁醇提取液置水浴上挥干，加甲醇溶解至 2mL 作为供试品溶液，另精密称取黄芪甲甙对照品，用甲醇配成 1gL-1 对照品溶液，精密吸取供试品溶液 2L 和对照品溶液 2，4 和 6L，分别交叉点于同一硅胶 G 板上，以氯仿-甲醇-水（653510）的下层液- 甲酸（202）为展开剂，展开，取出，晾干，显色剂为:硫酸-乙醇- 水（107515 ） ，热风吹至斑点显色清晰，测定供试品斑点面积积分值并计算含量. 1.2.5 干扰性试验按处方比例制备不含黄芪药材阴性样品，依样品方法测定，阴性样品在与黄芪甲甙对照品相应的位置上无相应的斑点存在. 1.2.6 重复性试验
6、取消痞胶囊约 2g，精密称定，连续称取 5 份，依样品测定方法测黄芪甲甙含量，5 次样品的测定值分别为0.48，0.45，0.45，0.45 和 0.44mgg-41，RSD=3.34%，取黄芪药材粉末，同时测定黄芪甲甙含量， 5 次样品的测定值分别为 1.793，1.834 ，1.790，1.702 和1.702mgg-1，RSD=3.39%.1.2.7 两种硅胶 G 板测定结果的比较取自制手工硅胶 G 板与高效板硅胶 G 板，两板均点同一样品进行测定比较，两者测定值相似，误差不超过 10.0%. 2 结果 稳定性试验表明黄芪甲甙测定稳定时间为 2h，2h 后结果偏低，RSD=2.48%;重
7、复性试验 ESD=3.34%，阴性样品测定结果表明无干扰，说明此方法符合含量测定要求. 黄芪药材 5 次平均回收率为（100.003.11）%，RSD=3.10%，消痞胶囊 5 次平均回收率为（ 101.004.03）%，RSD=3.99%，结果见表 1.黄芪药材Mongolianmikvetchroot，Membranousmikvetchroot ，Astragaluschysopterus.Bag 黄芪甲甙的含量分别为 2.60，2.10 和0.79gL-1，消痞胶囊样品三批（991110， 991117， 991123）含量分别为 0.44，0.42 和0.41gL-1. 表 1 黄芪
8、药材与消痞胶囊测定黄芪甲甙的回收试验（略） 3 讨论 5薄层扫描法作为药物含量测定的一种手段，因干扰因素多，对测定结果准确性和重复性影响比较大，如何规范试验操作就显得非常重要，文献2， 4报道对样品的纯化与处理，分离后对测定干扰大，展开后的斑点不理想，影响测定结果的准确性，文献5采用碱性甲醇溶液提取，再进行分离，消除对皂甙类成分测定的干扰和色带，可使结果准确与好的重现性，回收率确实.展开剂以氯仿-甲醇-水（604010）对黄芪甲甙分离重复性不太好，文献6报道展开剂斑点圆，重复性也好，可 Rf 值太小不宜用作含量测定，作者曾做大量展开剂筛选，结果以氯仿-甲醇-水（603510）4放置过夜的下层液
9、 -甲酸（202 ）为展开剂，所得斑点令人满意，甲酸更换批号时，应注意使用量和酸度的调整，由于展开剂中含氯仿，对展开温度应注意，温度应控制在 20为好，若室温太高应放在冰浴中展开，展缸内应放置滤纸，以稳定溶媒的蒸气压，高效板与手工板对同一样品测定结果相似，高效板测定黄芪药材结果为 2.083mgg-1，手工板测定黄芪药材结果为 2.091mgg-1，故含量测定不必选用价格昂贵的高效板，我们曾对显色剂进行筛选，若采用氯仿-甲醇-水（603510）为展开剂 100mLL-1 硫酸乙醇液喷雾显色使斑点成灰红色，斑点面积太小，若用硫酸-乙醇-水（107515）喷雾显色斑点为鲜红色，较前者清晰，若用文献
10、6的展开剂喷相同的显色剂，斑点又成为樱红色.黄芪甲甙用碱性乙醇提取，有利于消除黄芪内黄酮化合物对测定的干扰，碱的浓6度用 0.0180.036molL-1 均对测定无影响，以0.036molL-1 浓度较好，黄芪甲甙的提取以正丁醇为佳，若改用乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚提取均不得黄芪甲甙. 参考文献: 1Thechinesepharmacopoeiacommission M.GuangdongKexueShubanshe（GuangdongSciencepress） ，1995;271. 2LuJ，WangBQ.ContentDeterminationofastragalosidebythin
11、-layerchromatographyJ .Zhongchengyao （ChinTradi-tionalPatentMedacine） ，1992;14（6） :34-35. 3JuAH，HeML，ZhouK.ContentDeterminationofastragalo-sideindangguibuxuecapsulebyTLCJ.Zhengchengyao（ChinTraditionalPatentMedacine） ，1998;20（ 11）:13-14. 4LiLD， HeXQ.ContentofAstraglinAinzhongfengnaomaitongoralliguidJ
12、 .ZhongguoZhongyaoZazhi（ChinJChineseMa-teriaMedica） ，1991;16（2 ）:91-92. 57ChangZR，ZhangXX，ZhouFR.DeterminationofAstragalo-sideinRadixAstragaliandpreparationbyTLCJ.ZhongguoZhongyaoZazhi（JChineseMateriaMedical） ，1995;20（ 8）:482-483. 6XiePS.ChinesepharmacopoeaTLCATLASoftraditionalchi-neseHerbDrugsM.GuangdongKexueShubanshe （Guang-dongSciencepress） ，1993:66-67.
