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1、1茶多糖降糖作用机制【摘要】 目的 研究茶多糖的降糖作用机制。方法 用比色法测定茶多糖对 葡萄糖苷酶(EC 32120)和 淀粉酶(EC 3211)的抑制活性，用快速过滤法观察茶多糖对兔小肠刷状缘囊泡葡萄糖转运活性的影响。结果 茶多糖显示较强的 葡萄糖苷酶抑制活性，其 葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50)值为 32g/L;茶多糖对 淀粉酶的抑制活性则较弱，浓度为为 1g/L 时，其对 淀粉酶的抑制率为 10%；茶多糖同时明显降低兔小肠刷状缘囊泡葡萄糖转运能力，其半抑制浓度(IC50)值为 15g/L。结论 茶多糖可抑制 葡萄糖苷酶及 淀粉酶活力和小肠刷状缘囊泡葡萄糖转运能力，从而可延缓小肠对糖的
2、消化吸收。 【关键词】 茶多糖茶多糖是一类从茶叶提取来的多糖类化合物，具有增强免疫力、降血脂、降血糖、抗辐射、抗血凝、抗血栓等功效1，2 。我国和日本民间就有泡饮粗老茶治疗糖尿病的历史3 。研究初步证实，茶多糖是粗老茶叶降血糖的主要有效成分4 ，但具体的作用机制尚不清楚。本文以茶多糖为材料，探讨其对 葡萄糖苷酶、淀粉酶和刷状缘囊泡葡萄糖转运能力的抑制作用，旨在揭示茶多糖的降糖机制。21 材料与方法11 试剂和仪器 酵母 葡萄糖苷酶 (日本和光公司) ；猪胰淀粉酶 type 1-A(美国 Sigma 公司) 。Wallac 1209 Rackbeta闪烁记数器、微量血糖侧定仪(德国 Bayer
3、公司)；U-2010 型紫外分光光度仪(日本 HITACHI 公司)。12 茶多糖的制备 100g 绿茶用 2L 蒸馏水侵泡过夜，将提取液喷雾干燥得茶粉。将茶粉溶解，用 3 倍体积 95%的乙醇充分搅拌，离心。沉淀物用 75%的乙醇洗涤 2 次，所得沉淀物再用蒸馏水溶解，真空冷冻干燥，得不含茶多酚的灰白色粗茶多糖，其多糖含量为 157%(蒽酮硫酸法)。13 葡萄苷酶抑制活性的测定 葡萄糖苷酶的抑制活性的测定采用渡边5 等的方法，测吸光度 (A)400nm 和半抑制浓度(IC50)值。IC50 定义为抑制酶活性 50%时所需的抑制剂浓度。14 淀粉酶抑制作用的测定 将 10l淀粉酶溶于 4ml含
4、有 50mmol/L NaCl、5mmol/L CaCl2、05/L TritonX-100 的pH69,25mmol/L Piperazine-N,N-bis2-ethanesulfonic acid缓冲液中作为酶保存液，测定时用缓冲液稀释 40 倍使用。碘法36测定 A700nm 和 IC50 值。15 刷状缘囊泡葡萄糖转运能力的测定 将兔小肠浸泡于300ml 含 200mmol/L 甘露醇的 pH74，2mmol/L HEPESN-(2-hydroxyethyl)piperazine-N-(2-ethanesulfonic acid)-Tris缓冲液中，刮取小肠黏膜，在冰溶中高速匀浆 2
5、min。匀浆液中加061g 固体 MgCl2，溶搅拌 20min 后，在 4、3000g 离心15min，所得上清在 4 、3500g 离心 30min，此沉淀液用 10ml含 100mmol/L 甘露醇、 01mmol/L MgSO4 的pH74，2mmol/L HEPES-Tris 缓冲液溶解，在 4 、35000g 离心 40min，所得沉淀用 3 倍体积含 300mmol/L 甘露醇、01mmol/L MgSO4 的 pH74,10mmol/L HEPES-Tris 缓冲液重新溶解，用 25 号注射针头反复抽吸，即得刷状缘囊泡悬液。以3HD葡萄糖为底物，用快速过滤法7测定刷状缘囊泡葡萄
6、糖转运能力。抑制葡萄糖转运活性 50%时所需的抑制剂浓度定义为IC50。2 结果21 茶多糖对 葡萄糖苷酶和 淀粉酶的抑制作用(表 1) 茶多糖具有较弱的 葡萄糖苷酶和 淀粉酶抑制活性。本实验同时测定了绿茶和乌龙茶提取物的 葡萄糖苷酶抑制活性作为比较。4表 1 茶多糖对 葡萄糖苷酶、 淀粉酶和葡萄糖转运活性的抑制作（略）注：* 此时所用提取物的浓度为 1g/L22 茶多糖对兔小肠刷状缘囊泡葡萄糖转运活性的影响 茶多糖降低兔小肠刷状缘囊泡的葡萄糖转运活性，且在较宽范围内呈剂量依赖性关系。随着浓度升高，兔小肠刷状缘囊泡葡萄糖转运活性降低幅度明显减小，呈直角双曲线关系。其对刷状缘囊泡葡萄糖转运的抑制
7、作用为快速反应。3 讨论有效地控制血糖是糖尿病治疗的基本目标。 葡萄糖苷酶抑制剂是一组通过延缓糖的消化以降低餐后高血糖的口服降糖药，其作用特点是在糖消化的最后一步抑制双糖降解为单糖5 。 淀粉酶抑制剂也能减慢食物淀粉在肠道中的消化，抑制餐后血糖水平的升高，因此，也是近年来糖尿病口服药物开发研究的一个热点9 。肠道对葡萄糖的吸收则以葡萄糖转运体的主动吸收来完成，因此，抑制葡萄糖转运活性也是降低餐后血糖的重要环节之一7 。本研究结果表明，茶多糖是 葡萄糖苷酶和 淀粉酶的弱抑制剂，同时降低兔小肠刷状缘囊泡的葡萄糖转运活性，从而能够通过延缓或5减慢糖在肠道的消化和吸收来降低餐后高血糖。虽然茶多糖对 葡
8、萄糖苷酶和 淀粉酶及刷状缘囊泡葡萄糖转运的抑制作用较弱，但因为肠道中茶多糖浓度能达到较高水平，经常饮用可能有助于降低餐后血糖的持续升高。【参考文献】1 陈海霞，谢笔钧. 茶多糖对小鼠实验性糖尿病的防治作用J.营养学报，2002，24(1)：85-86.2 Tadakazu T,Tomoki U,Hitoshi K,et al.The chemical properties and functional effects of polysaccharides dissolved in green tea infusionJ .Nippon Shokuhin Kagaku Kaishi,1998,4
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10、,Kanamori M,et al.Purification and characterization of amylase inhibitors from the seeds of three cultivars of the genus PhaseolusJ.Nippon Shokuhin Kagaku Kaishi,2001,48(3):182-188.7 Vedavanam K,Srijayanta S,OReilly J,et al.Antioxidant action and potential antidiabetic properties of an isoflavonoid-containing soybean phytochemical extract(SPE)J .Phytother Res,1999,13:601-608.8 Layer P,Rizza PA,Zinsmeister AR,et al.Effect of a purified amylase inhibitor on carbohydrate tolerance in normal subjects and patients with diabetes mellitusJ .Mayo Clin Proc,1986,61(6):442-447.
