《艾灸对衰老模型鼠外周血淋巴细胞DNA损伤程度影响的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《艾灸对衰老模型鼠外周血淋巴细胞DNA损伤程度影响的实验研究（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1艾灸对衰老模型鼠外周血淋巴细胞 DNA 损伤程度影响的实验研究【摘要 】 目的：探讨艾灸“足三里”延缓衰老的机理。方法：对臭氧衰老模型小鼠“足三里”穴实施艾灸治疗后，用彗星实验(Comet Assay)检测小鼠外周血淋巴细胞 DNA 的损伤程度。结果：艾灸小鼠外周血淋巴细胞 DNA 的拖尾率显著下降(P0.05)，尾长显著减短(P0.05) ，差异有统计学意义。结论：艾灸能够通过提高机体自身抗自由基氧化损伤的能力，减轻淋巴细胞 DNA 的损伤程度，从而达到延缓衰老的目的。 【关键词】 艾灸 衰老 淋巴细胞 DNA 氧化损伤 小鼠 足三里在衰老的研究中发现，随增龄 DNA 存在着不同程度的各种
2、损伤及损伤的积累现象1、2 。而在生物体内，导致 DNA 损伤的物质，主要是生物新陈代谢过程中广泛存在的自由基。其诱导过度的氧化还原反应，长期随机毒害的结果，是引起生物衰老的原因之一 。免疫系统的功能下降是衰老的主要特征之一，针灸可有效提高机本免疫器官内抗氧化酶的活性，减轻脂质过氧化程度4 ，但与此同时，能否起到对免疫细胞内 DNA 的保护作用，目前涉足不多。本研究利用彗星实验观察艾灸“足三里”对臭氧(O3)衰老模型鼠外周2血淋巴细胞 DNA 损伤程度的影响，从而探讨艾灸延缓衰老的可能机理。1 材料与方法1.1 实验动物、主要药物试剂及器材 健康 3 月龄昆明种雄性小白鼠 40 只(四川大学实
3、验动物中心提供 )，体重 2530g。维生素E(厦门鱼肝油厂)，正常熔点琼脂糖、低熔点琼脂糖(PROMEGA 分装)，溴化乙啶、肌氨酸钠、二甲基亚砜(SIGMA 生产)，Tritox100(BIB 生产)，木质臭氧发生柜，DYY 型水平式电泳仪(北京六一仪器厂) ，荧光显微镜 (Nikon)等。1.2 动物实验方法1.2.1 动物的分组及造模 40 只小鼠随机分为空白组、模型组、模型+艾灸组和模型维生素 E 组放入臭氧发生柜(O3 浓度为1.9mg/m3)，连续造模 56d，每天 24h。将空白组同时放入与臭氧发生柜相同大小但无 O3 的柜内，均按相同标准饲养。1.2.2 治疗方法1.2.2.
4、1 模型加艾灸治疗组 于造模前 5d 起，将小鼠仰卧位固定，3根据实验针灸学定位，用特制清艾条分别灸治双侧“足三里”穴，距穴位皮肤 0.5 1.5cm 左右，每次每穴灸 15min，隔日 1 次。共治疗 62d。1.2.2.2 模型加维生素 E 对照组 造模前 5d 起，按人鼠剂量换算，将维生素 E 用蒸馏水配成均匀悬浊液，按每日 250mg/kg 灌胃给药，共治疗 62d。空白组和模型组要求隔日抓拿 1 次以外，未予任何治疗和处理。1.3 指标检测方法1.3.1 样本采集 动物造模及治疗结束后禁食 12h，次日小鼠股动脉取血 1ml，抗凝处理。1.3.2 淋巴细胞 DNA 损伤检测 将 1m
5、l 抗凝血，用 2ml 的 PBS稀释混匀，轻轻加入已盛有 1.5ml 淋巴细胞分离液的离心管液面上，室温下 1000r/min 离心 10min。弃掉上清液，吸取中间有核细胞层，移入离心管中，以 PBS 清洗 1 次，再次离心收集淋巴细胞，调整细胞数至 107 个/ml，同时，用台盼蓝法检测活细胞百分率在95%以上后，采用彗星实验进行5、6 淋巴细胞 DNA 损伤的检测。实验每张片子各观察 150 个细胞，记录拖尾细胞数，计算拖尾率；并用目镜测微尺每张片子随机测量 50 个细胞的尾长，计算平4均尾长。1.4 资料处理 对检测结果采用 SPSS10.0 统计软件进行单因素方差分析，结果均以s
6、表示。2 结果见表 1 表 1 艾灸治疗对小鼠外周血淋巴细胞 DNA 损伤程度比较与艾灸组比较 P0.053 讨论一切生物的天然寿限都是由遗传物质 DNA 上的基因安排的，但生物的遗传物质是受后天环境及其它内外因素影响的7 。在影响生物寿限的各种后天因素之中，DNA 氧化损伤已公认为是最重要的致衰老因素之一3 。所以，现代中医研究认为8 :DNA 作为生命活动的基本物质及遗传信息的载体与中医的肾精有直接联系，并随衰老而发生损伤变化。损伤的 DNA 随时间的推移，并不能完全被修复，损伤呈累积增多趋势。实验证明2:老年大鼠外周血淋巴细胞 DNA 的损伤情况较青年和中年大鼠严重，老年大鼠的彗星样淋巴
7、细胞出现率较青年、中年大鼠明显增多，中年大鼠也显著高于青年大鼠；老年大鼠外周5血淋巴细胞电泳后的总彗星长度较中年和青年大鼠明显增加;这表明DNA 损伤随年龄的增长而损伤程度呈加重的显著趋势。艾灸 “足三里”延缓衰老是历来常用方法之一，研究与记载颇多。足三里穴有补益后天，培元固本的作用；艾灸有温经通络、行气活血的作用。此次研究结果表示，与抗自由基氧化剂维生素 E 的作用类似，艾灸“足三里”穴能够降低衰老模型鼠外周血淋巴细胞 DNA的拖尾率，减短细胞 DNA 的拖尾尾长，从而减轻了淋巴细胞 DNA的损伤程度。因此，实验证实：艾灸“足三里”延缓衰老是通过提高机体抗自由基氧化损伤能力，降低外周血淋巴细
8、胞 DNA 的损伤程度达到治疗目的的。【参考文献】 1张宗玉，范新清. 衰老分子机理研究新进展J.实用老年医学，1994，8(3):97.2安文林，李 斌. 不同年龄大鼠淋巴细胞 DNA 的断裂损伤J. 中华老年医学杂志，2000，19(2):138.3Barnet YA.Somatic Mutation and Aging:Cause or EffectJ.Biochemical Social Transfaction，1997，(25):332.64刘一凡. 针灸抗氧化临床及实验研究进展J.中国针灸，1999，(2):124.5陈 波，吕明庄，贺志光，等. 穴位埋线加灸对衰老模型鼠抗自由基氧化损伤 DNA 作用的实验研究J.中国针灸，2993，23(4):234.6Singh NP.Technical report:modification of alkaline microgel electrophoresis for sensitivie detection of DNA damageJ.Int Radiat Biol，1994，66:23.7郑 集. 衰老与抗衰老 M.北京:科学出版社，1985.15.8李顺成，蒋文跃，王传社，等. 正虚挟瘀是衰老的主要机制J. 中国医药学报，1992，7(6):4.
