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1、1色谱技术在中药药动学研究中的应用进展【摘要】 中药药动学研究中药在体内的动态变化和量效关系，对提高中药的研究水平，实现中医药现代化有重要的意义。药物浓度法通过测定药物及其活性代谢物在体内血浆、其他组织液或尿液中的浓度，分析药物的代谢变化。色谱分析检测技术因其各方面的优势，在药物浓度检测分析上有着广泛的应用。文章简要介绍了近年来国内利用色谱分析技术开展中药药动学研究的情况。 【关键词】 色谱; 中药药动学; 应用进展Abstract：The studies on the dynamic changes and dose-effect relationship of TCM in the bod
2、y by the pharmacokinetics of TCM in takes important significance to promote the research of TCM and realize the modernization of TCM. By measuring the concentration of the drug and its active metabolites in bodys plasma, other tissues liquid, or urine, the drug concentration method analyzes drugs me
3、tabolism. For its advantages in all aspects, the chromatography detection techniques take a wide range of applications in drug concentration analysis. This article briefly introduced the domestic applications of chromatography 2analytical techniques in the pharmacokinetics researches of TCM in recen
4、t years.Key words： Chromatography; Pharmacokinetics of TCM; Application progress中药药动学1(Pharmacokinetics of TCM)是以中医药理论为指导，借助于药动学原理，研究中药活性成分、组分、有效单体及复方在体内吸收、分布、代谢和排泄的动态变化规律及其体内时间-浓度关系，并用数学函数加以定量描述的一门边缘学科。目前，中药药动学研究的方法主要为体内药物浓度法和生物效应法2。体内药物浓度法是中药药动学研究的经典方法，也是最主要的方法，主要用于研究有效成分较为明确的中药及其复方。色谱3(chromatogr
5、aphy)技术自 1906 年问世后得到长足发展 ，现代色谱技术因其具有高效、准确、灵敏度高、重复性好、操作方便、使用范围广等优点，已在生物医药行业中得到非常广泛的应用。药物在体内的浓度检测，要求分析仪器能快速、准确、微量、专一性强地进行分析。气相色谱(GC)、液相色谱(LC)以及二者与质谱技术的联用(GC-MS 和 LC-MS)等技术能较好的满足这些要求，已在众多的中药药动学研究中得到应用。本文即对这些方面的情况进行综述。3色谱技术对样品的检测结果与色谱仪器密切相关，同时，也与样品的制备密不可分。药动学4研究中的生物样品有外源性和内源性杂质干扰、检测物浓度低(常在 ng/l 以下)、体内外药
6、物浓度差别大(可至 100 倍)、代谢物与药物结构相近，易干扰检测等特点。而中药药动学检测中，生物样品的处理更加复杂。相比化学药物，其体内浓度更低，进入体内的成分复杂，受到的干扰更大，其样品制备更难。需要除去其中易干扰的内源性和外源性杂质(组织蛋白、氧化酶以及其他化学成分等)，富集低浓度的检测物，保持待测成分的稳定等。在具体研究中，常采用有机溶剂或固相提取、常温高速离心、浓缩及有机溶剂复溶等操作，以达到前述要求。1 气相色谱法在中药药动学研究中的应用气相色谱5以气体为流动相，以液体或固体为固定相，适用于分析气体、易挥发性液体以及可转化为易挥发性物质的液体和固体。对中药而言，其中的挥发油类、苯丙
7、素类、萜类以及小部分生物碱等易挥发性成分可用气相色谱法检测。对其他非挥发性的药效成分，可用衍生化使其适用于气相色谱检测，以测定其在体内的药物浓度。1.1 GC 法用于中药药效成分的药动学检测针对研究对象的不4同，气相色谱采用不同的检测器，常用的有热导池检测器(TCD)、氢火焰离子化检测器(FID)、电子捕获检测器(ECD)等。朱耀伟等6建立了麝香酮血药浓度的气相色谱测定方法，以高纯氮为载气，过OV-1 交联甲基硅烷毛细管柱，FID 检测，正十九烷为内标，定量测定。研究发现麝香酮口服吸收在大鼠体内的药时过程为线性动力学过程，符合一级吸收一级消除的开放二室模型，t1/2Ka 为 22.0 min，
8、tmax 为 74.4 min，Cmax 为 1.44 mg/L，T1/2()为 196.1 min，说明麝香酮在大鼠体内口服吸收快，消除也快。魏立平等7采用热导池检测器，用气相色谱法测定了 -2 细辛醚及石菖蒲挥发油中 -2 细辛醚的在兔体内的血药浓度。研究发现 -2 细辛醚灌胃ig 后，在兔体内符合一级吸收二室模型，T1/2 () 为 7.5 min，T1/2 () 为 69. 6 min 。家兔灌胃石菖蒲挥发油后，-2 细辛醚在体内的药时过程为线性动力学过程，同样符合一级吸收二室模型。1.2 GC-MS 用于中药药动学研究相比其他 GC 方法使用的检测器，GC-MS 联用技术中的 MS
9、可以看做是其检测器，其检测限更低、灵敏度更高、特异性更强。李秀琴8用 GC-MS 法研究正己醛联合柴胡给药前后在大鼠血浆中的药物变化。表明股动脉给予大鼠正己醛后，血浆中正己醛的最大血药浓度为 6.98 gml-1，生物半衰期为 29.32 min，AUC0 为 96.62 gminL-1。股静脉给予大鼠柴胡挥发油后，血浆中正己醛的最大血药浓度为 12.02 5gml-1，半衰期为 42.06 min，AUC0为 137.84 gminL-1，这表明股静脉给予大鼠柴胡挥发油后，同给予正己醛单体相比，正己醛在大鼠血浆中的浓度明显升高，消除半衰期显著延长，AUC值显著增大，两组药动学参数间有显著性差
10、异(P0.05)。沈群9建立了小鼠服用麻黄汤复方后麻黄碱和伪麻黄碱的 GC-MS 分离检测方法。研究表明：麻黄汤中麻黄碱和伪麻黄碱的药动学参数符合二室模型，属一级动力学消除过程，两者皆吸收快，分布快，消除慢。研究发现，麻黄碱和伪麻黄碱在小鼠体内的药时曲线多有双峰现象，提示两者的体内吸收可能存在重吸收过程。2 液相色谱法在中药药动学研究中的应用相比气相色谱在应用上对被检测成分形态的要求，液相色谱的限制较少，其适用范围更广，应用更多样，液相色谱也是研究使用最多的血药浓度检测方法。2.1 液相色谱法用于中药药动学研究依据色谱柱的极性大小，液相色谱一般可分为正相色谱(NP)和反相色谱(RP) ，其检测
11、器10主要有紫外检测器(UV) 及二极管阵列检测器 (DAD)、荧光检测器(FD)、电化学检测器(ECD)和蒸发光散色检测器(ELSD)，当前研究以紫外检测器最为常见。6高效液相色谱不仅用于中药药效化合物的药动学研究，同时也用于中药复方指标性成分的药动学研究。王兴11研究了大川芎丸提取物灌胃给药家兔和 SD 大鼠后，阿魏酸在家兔体内的处置过程符合二室开放模型，其吸收快而消除慢，且从中央室向周边室分布较慢，而另一 药效成分天麻素在大鼠体内也符合二室开放模型，其吸收快而消除慢，从中央室向周边室分布较快。贺福元等12采用反相高效液相色谱法研究了大鼠补阳还五汤及总生物碱灌胃后，体内川芎嗪的血药浓度变化
12、。研究发现补阳还五汤及总生物碱中川芎嗪药代动力学为二室模型，代谢参数无明显差别，但与川芎嗪单独给药差别较大，提示中药复方成分组合对药代动力学参数有一定影响。蒋永培等13 研究了磷酸川芎嗪在健康和血瘀犬体内的药动学特征，研究发现川芎嗪在健康犬和血瘀犬体内的药动学参数有明显差异，这与症治药动学假说相符。上述研究均采用紫外-可见光检测器。二极管阵列检测器在研究中也得到广泛使用，其能记录不同时间流出的组分在不同波长下的检测值，最大程度的记录色谱信息。任平等14 利用 DAD 检测器测定了甘草甜素在脾虚大鼠的药动学特征。杨燕15 使用 Agilent 1100 高效液相色谱仪 (DAD 检测器)等研究了
13、兔灌胃给药蒲黄后，其体内槲皮素、山柰素和异鼠李素的药动学特征。研究者使用高效液相色谱法进行中药药动学研究时，还采用了电化学检测器(ECD)和荧光检测器(FT)。阮志鹏等16将大鼠血浆样品经液-液萃取后，采用高效液相色谱- 电化学检测法测定了大鼠7血浆中灯盏乙素的药代动力学参数。蓝晓红等17利用高效液相色谱-荧光检测器法研究了羟基喜树碱注射液在肿瘤患者体内的群体药动学，利用非线性混合效应模型(NONMEN) 法分析羟基喜树碱群体药动学参数，发现其二室模型群体参数估算的血药浓度值与实测值有良好的相关性，性别对中央室消除率参数影响较大。罗承峰等18和金昔陆等19 分别采用 HPLC-FD 测定了葛根
14、素在大鼠和狗血浆中的药物浓度，发现其在两种动物中都符合开放二室模型。2.2 HPLC-MS 联用技术在中药药动学研究中的应用液相色谱-质谱20的联用技术随着接口技术的发展逐步成为热点的研究领域，LC-MS 需解决 LC 分理处的具有极性大、挥发度低、热稳定性差等特点的化合物的电离问题，且需除去进入质谱之前流动相中的大量溶剂，电喷雾电离(ESI)接口和大气压化学电离 (APCI)接口技术能较好的解决上述问题，故使液质联用技术得到快速发展，并用于中药药动学的研究。王长虹等21采用液质联用法研究了银杏叶滴丸剂和银杏叶片剂在新西兰家兔体内多成分(银杏内酯 A、银杏内酯 B、银杏内酯C 及白果内酯)的药
15、代动力学，发现家兔口服银杏叶滴丸剂和片剂后，四种成分都符合一房室模型，2 种剂型的药动学参数无显著差异，滴丸剂和片剂生物等效。吴豪22采用 Agilent 液相色谱仪-G1946D 单重四极杆质谱仪联用检测单独给药芍药苷，芍药苷分别8与牡丹皮或丹参配伍前后，大鼠血浆中芍药苷的药动学特征。结果显示，灌胃给药芍药苷水溶液、牡丹皮水煎液和复方水煎液后芍药苷在体内的药代动力学有明显变化，研究表明中药中的提取物可以提高芍药苷的生物利用度。2.3 超高效液相色谱及超高效液相色谱 -质谱联用技术在中药药动学研究中的应用随着液相色谱分析对象的复杂化，对高效液相色谱提出了更高的要求，针对更加复杂的生物样品基质，
16、如血浆、尿液、组织液等，且样品数量巨大，要求液相色谱具有更加高效、快速、灵敏的性能。随着色谱柱填料粒径的减小，液相色谱的柱效得到明显提高。超高效液相色谱由此产生，并在实际研究着显示出巨大的研究应用价值。Lu Tong 等23系统研究了 SD 大鼠、雄性 Beagle 犬、人体血浆及尿液中的丹参素的代谢情况，使用 UPLC-MS 测定了血浆、血红细胞匀浆液、尿液或细胞培养基等生物样品中的丹参素、原儿茶醛、丹酚酸 A、丹酚酸 B、丹酚酸 D、迷迭香酸、紫草酸的含量，分析发现丹参中的丹参素可认为是动物或人体按临床剂量口服强心丸后合适的代谢靶标。3 讨论9随着中药药效机理研究的深入以及中药药动学自身的不断发展，中药药动学所采用的单一成分血药浓度法日益不能适应于研究需要，中药及其复方的作用并不能以单一的化学成分来衡量24。故而，加强和提高中药药动学研究方法，使其从单一成
