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1、1脐带血干细胞治疗慢性肾功能不全 19 例近期疗效分析作者：陶其强 唐明淇 许冬联 穆志静 刘 影 张丽欣【摘要 】 从 2009 年 1 月至 2009 年 11 月，我科共对 19 例慢性肾功能不全的患者进行干细胞移植治疗，其中尚未开始血液透洗者 7 例，已经透洗者 12 例，并进行了 1-2 个月的随访观察。其中，尿素氮、肌苷下降者 3 例，占 15.79%，尿量增加者 2 例，占10.52%，夜尿习惯改变者 1 例，占 5.26%，肾血管明显增加者 1例，占 5.26%；恶心、呕吐症状改善者 2 例，占 10.52%，总有效率 47.37%。表明：干细胞治疗慢性肾功能不全有一定的近期疗
2、效，远期疗效还需要进一步观察。【关键词】 干细胞 移植 慢性肾功能不全【Abstract】 From January 2009 to November 2009, a total of 19 cases of patients with chronic renal failure undergoing stem cell transplantation. Among them, the urea nitrogen and creatinine decreased in 3 cases, accounting for 15.79%;urine output increased in 2 case
3、s, accounting for 10.52%;nocturnal habits changes in 1 case, accounting for 5.26%; the renal blood vessels increased in 1 case, accounting for 5.26% ;the symptoms of nausea and vomiting improved in 22 cases, accounting for 10.52%. the total effective rate was 47.37%. The results showed that stem cel
4、l therapy for chronic renal failure have a certain short-term effects, The long-term effects need further observation.【Keywerds】 stem cell transplantation chronic renal failure1 对象与方法1.1 研究对象 2009 年 1 月-2009 年 11 月在我院细胞治疗中心住院并确诊为慢性肾功能不全的患者 19 例，男 12 例，女 7 例，年龄 20-63 岁，平均（47.64.9 ）岁。入选患者需满足以下条件：（1）尿素
5、氮、肌苷均高于正常且呈进行性升高；（2 ）经过其他方法长期治疗不能恢复正常；（3）需要透洗的病人继续给予透洗治疗。1.2 研究方法1.2.1 患者准备 于患者入院后进行全面检查，包括血尿便常规、肝肾功能、出凝血时间、乙肝五项、丙肝抗体、滋病抗体、梅毒抗体以及心电图、肝胆脾 B 超、胸部 X 光片等，全面评价患者的身体状况。对于适合干细胞移植的患者，签定干细胞治疗知情同意书和介入治疗知情同意书。介入手术前做碘过敏试验和手术区备皮。1.2.2 干细胞的制备 无菌纱布蘸 75%酒精，擦拭所有操作过程中所需物品及操作台。将含有枸橼酸钠抗凝剂的脐血或骨髓 200ml的血袋，用蘸 75%酒精的无菌纱布擦拭
6、进行消毒，将其倒入试剂中瓶中（注：若试剂中试剂超过 200ml 需弃掉，血与试剂比例为31：1 ） 。将试剂 B 全部倒入 A 瓶中，盖紧瓶盖，充分摇匀（5min）注：若不能充分摇匀，则分层速度非常缓慢。将试剂 A 瓶置于超净台，松动瓶盖后静置 20-30min，待分层。12 支离心管拆封，备用。取试剂 C，用蘸 75%酒精的无菌纱布擦拭其外壁消毒，开盖，用新移液管移取 25ml 试剂 C 置于 50ml 新离心管中，一共移取 3 次，得到 3 支有试剂 C 液的离心管，备用。取步骤 1 静置 20-30min 后的试剂 A 瓶中的上层液，用移液管移取分别置于离心管中每只45ml，盖紧盖置于离
7、心机中设置速度为 2500 转时间为 5 分钟温度为 5，从离心机中取出离心管，用蘸 75%酒精的无菌纱布擦拭其外壁消毒，开盖，弃上清液，取新移液管，移取 0.9%氯化钠分别加入到离心管中至 10ml 处，摇匀得细胞混合液备用。取步骤 2 下装有试剂 C 液的离心管，倾斜并缓慢加入步骤 3 下的细胞混合液，保持细胞混合液悬浮于试剂 C 液表面，加至 45ml（注：2 支步骤 3下细胞混合液加入到 1 支含 C 液的离心管中，共计 45ml） ，轻放至试管架，即得到 3 支具有分层液的离心管，置于离心机中，设置速度为 1800 转时间为 30 分钟温度为 5。从离心机中轻取出离心管，尽量保持离心
8、管中液面平稳，用蘸 75%酒精的无菌纱布擦拭其外壁消毒，开盖，用一次性胶头滴管吸取离心管中间的絮状液体（一般取至液面到 18-20ml 处） ，收集置三支新离心管中，用移液管加入0.9%氯化钠至 45ml 处，充分与细胞液摇匀，取一支离心管与其他三管配平，置入离心机中，设置速度为 2000 转时间为 5 分钟温度为 5（注：第一次清洗） ，取出具有细胞液的离心管，用蘸 75%酒4精的无菌纱布擦拭其外壁消毒，开盖，弃上清液后，用注射器先加入少量 0.9%氯化钠，摇匀后吸取至一支试管内，加入 0.9%氯化钠至 45ml 处，再摇匀，与配平试管一同置入离心机内设置速度为1800 转时间为 5 分钟温
9、度为 5 （注：第二次清洗） ，取出具有细胞液的离心管，用蘸 75%酒精的无菌纱布擦拭其外壁消毒，开盖，弃上清液，用注射器先加入少量 0.9%氯化钠，摇匀后加入 0.9%氯化钠至 45ml 处，再摇匀与配平试管一同置入离心机内设置速度为1600 转时间为 5 分钟温度为 5 （注：第三次清洗） ，取出具有细胞液的离心管，用蘸 75%酒精的无菌纱布擦拭其外壁消毒，开盖，弃上清液后加入 0.9%氯化钠至所需要稀释刻度处，摇匀，用微量定量移液器取 10ul 用于细胞计数，其余细胞液密封，置于冰桶内待用。1.2.3 干细胞计数 计数板上有四个象限，每个象限内有 16 个小格，将四个象限内共 64 个小
10、格内的细胞数总和除以四所得的数乘以所稀释的毫升数再乘以 10 的 4 次方，即得细胞数。1.2.4 干细胞回输 严禁 X 线照射；细胞产品请尽快回输，以免影响细胞活性；细胞回输时务必使用输血器，按照输血常规进行操作；在回输前、中、后检测患者体温、脉搏、呼吸、血压；回输细胞产品时，先用 0.9%的氯化钠 20-30ml 冲管，开始输入细胞时保持 20-30 滴 /分钟，半小时后无不良反应可增加到 30-50 滴/分钟，细胞回输过程中每 15 分钟轻轻晃动细胞袋一次，细胞输入完毕后用 0.9%的氯化钠 20ml 冲入细胞保存袋中轻轻晃动，输入完毕后再5用 0.9%的氯化钠将输血器中细胞冲净，以保证
11、细胞回输数量。1.2.5 干细胞动脉介入移植 患者仰卧位，选右股动脉为穿刺点，常规消毒，铺无菌巾，利多卡因局部麻醉，穿刺成功后通过导丝引导将导管分别送入双侧肾动脉，推注造影剂证实导管在肾动脉后将干细胞缓慢注入，注入完毕后拔管，局部加压包扎，下肢制动 24小时，拆除绷带。2 结果2.1 尿素氮、肌苷下降者 3 例，占 15.79%，尿量增加者 2 例，占 10.52%，夜尿习惯改变者 1 例，占 5.26%，肾血管明显增加者1 例，占 5.26%；恶心、呕吐症状改善者 2 例，占 10.52%，总有效率 47.37%。其中，尿素氮肌苷下降的 3 例和肾血管明显增加的1 例患者均属于没有进行血液透
12、洗的病人。表明：干细胞治疗慢性肾功能不全有一定的近期疗效，特别是对尚没有开始透洗的患者有效率达 57.14%，远期疗效还需要进一步观察。3 讨论慢性肾功能不全是各种肾脏疾病的终末阶段，常规疗法无明显效果，肾脏移植是治疗该病的有效手段，技术也已经成熟，但由于活体肾脏的来源限制，只有极少数患者能够进行肾移植手术，大多数病人需要血液透洗维持生命。干细胞是指人体内尚未分化的细胞，具有自我复制和多向分的化潜，在不同的条件诱导下，可以分化为不同的组织细胞1-2。研究证实成体干细胞具有可塑性 。可塑性是指一种组织的干细胞可以分6化形成另外一种组织的细胞，并且能跨谱系和胚层分化3-4。目前应用骨髓干细胞和外周
13、血干细胞对非肿瘤性肾脏疾病的预防及治疗已取得了一定的效果，并且有人尝试用成体干细胞治疗急性或慢性肾功能衰竭已取得初步的成果5。虽然成体干细胞治疗肾脏疾病已取得一定的效果，但其增殖、分化能力和可塑性以及对成体干细胞免疫学的研究还比较少，是否存在免疫排斥反应尚没有肯定的结论6。我们的研究显示：干细胞治疗慢性肾功能不全有一定的近期疗效，特别是对尚没有开始透洗的部分患者出现客观指标的改善，所有患者均未出现免疫排斥反应，远期疗效还需要大样本长时间的进一步观察。参 考 文 献1 李桂英，董博.造血干细胞移植术的研究进展J.现代医药卫生，2008，24 （ 1）：82-83.2 达万明，裴雪涛.外周血干细胞
14、移植M.北京人民出版社，2007：7-8. 3 Turhan AGPlasticity of adult stem cellsTransfus Clin Biol，2003，l0(3)： 103-1084 Herzog EL，Chal L，Krause DS ，et a1Plasticity of marrow-deried stem cellsBlood，2003，102(10)：3483-34935 Bredie TC，Humes HDStem cell approaches for the treatment of renalfailurePharmacol Re，2005 ，57(3)：299-73136 Fang TC，Alison MR, Wring NA，et a1Adult stem cell Plasticity：will engineered tissue be rejectedInternational Journal of Experimental Pathology，2004 ，85(3) ：115-124
