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1、1老龄大鼠对外周不同化学组织损伤的痛行为反应特点作者：葛伟陈军李源陈会生 【关键词】 热痛敏 关键词: 老龄大鼠; 持续性自发痛;机械性痛敏;热痛敏;蜜蜂毒试验;甲醛试验 摘 要: 目的 观察老龄大鼠对一侧足底 sc 蜜蜂毒液（BV ）或甲醛（F）诱致外周化学组织损伤的痛行为特点. 方法 应用持续自发缩足反射（PSFR） 、热刺激缩足反射潜伏期（PWTL）和机械刺激缩足反射阈值（PWMT）痛反应定量检测方法，对老龄大鼠持续性自发痛和痛敏特点进行时程观察. 结果 老龄鼠的基础 PWTL 和PWMT 均较青年成龄鼠高 ;老龄大鼠一侧足底 sc BV 或 F 后也可引起 PSFR，但与青年成龄动物相
2、比 BV 诱致的 PSFR 数显著增多，但达到高峰的时间延迟 30min，且反应时程大致相同.F 诱致的 PS-FR 在反应形式和时程上都与青年成龄动物无显著差别，但是第二相PSFR 数显著减少;老龄大鼠一侧足底 sc F 不引起损伤部位 PWTL缩短和 PWMT 降低，相反 PWTL 和 PWMT 显著增高以至对很强刺激无反应;但是，老龄大鼠一侧足底皮下注入 BV 却可引起损伤部位 PWTL 和 PWMT 显著缩短或降低，初步时程观察发现 BV 诱致2的热和机械性痛敏可持续数日以上，且后者的时程远长于前者. 结论 老龄大鼠热和机械痛阈均较青年成龄大鼠高;外周组织损伤时，老龄大鼠持续性自发痛行
3、为反应根据不同模型具有不同反应形式，但是总体表现为反应缓慢，强度弱;sc BV 诱致外周组织损伤时，老龄大鼠有显著的原发性热和机械性痛敏，但是 sc 甲醛后却不引起原发性痛敏，反而出现热和机械刺激反应缺失，提示两种痛模型在老龄也具有不同的发生机制. Keywords:elderly rat;persistent spontaneous pain;mechan-ical hyperalgesia;heat hyperalgesia;bee venom test;formalin test Abstract:AIM To observe pain-related response characte
4、r-istics of elderly rats to peripheral chemical tissue injury in-duced by subcutaneous intraplantar injection with bee venom solution（BV）or formalin（F ）.METHODS By using quan-titative measurements for persistent spontaneous paw flinch-ing reflex（PSFR ） ，paw withdrawal thermal latency（PWTL ）and paw w
5、ithdrawal mechanical threshold（PWMT） ，time course and response characteristics of the persistent spontaneous pain and hyperalgesia of elderly and adult young rats were compared.RESULTS The 3elderly rats showed a significant increase in both PWTL and PWMT compared with the adult young rats.The elderl
6、y rats re-ceiving s.c.BV or F could also express PSFR，however，the total number of the BV-induced PSFR was significantly in-creased and the peak response was delayed about30min after injection when compared with adult young rats.The response pattern and time course of the F-induced PSFR in elderly ra
7、ts were similar to those of adult young rats，however，the num-ber of PSFR in F phase2response was significantly decreased in elderly rats.Intraplantar F injection in elderly rats was not able to induce decrease in PWTL and PWMT，reversely，it resulted in an increase in PWTL and PWMT or loss of sen-sory
8、 response to high intensity stimuli.Intraplantar BV injection in elderly rats，however，was able to induce de-crease in both PWTL and PWMT in the injured region lasting for several days and the duration for PWMT was significant longer than that for PWTL.CONCLUSION The heat and mechanical pain threshol
9、d in elderly rats are higher than those of adult young rats;The persistent spontaneous pain-related behavioral response in elderly rats is likely to be different in different pain models of tissue injury and the acute pain response is 4generally slower and weaker than that in adult young rats;The el
10、derly rats show dramatic pri-mary heat and mechanical hyperalgesia following peripheral tissue injury by s.c.BV injection，however ，the same treat-ment with F fails to produce either heat or mechanical hype-ralgesia，but causes a loss of heat and mechanical response，suggesting a difference in underlyi
11、ng mechanisms of the two pain models. 0 引言 近几年的研究显示人体实验性痛、临床急性和慢性病理痛都随年龄的变化而异，因此要求疼痛的治疗也应该具有相应的对策1 .但是，因为当前对疼痛年龄变化的特点和发生机制了解甚少，治疗上仍无相应对策.实验发现随着年龄增长，人的痛阈增高、痛耐受性降低以及对伤害性阈上刺激的辨别能力下降1，2 .当前对这些疼痛年龄变化特点的神经生物学机制尚无任何实验证据，原因是缺乏系统而深入的动物实验和模型.本研究的目的是应用两种比较成熟的动物病理痛模型 蜜蜂毒试验3-8 和甲醛试验9，10 对老龄和青年成龄大鼠基础热和机械刺激痛反射阈值、外
12、周不同化学组织损伤诱致的持续性自发痛、原发性热和机械性痛敏的行为特点进行比较分析，以此为进一步研究这些行为特点的神经生物学基础提供实验模型. 51 材料和方法 1.1 材料 健康自然饲养老龄（大于 20mo 龄）雄性 SD 大鼠 20 只（西安交通大学医学院实验动物中心） ，体质量 500600g;健康青年成龄雄性 SD 大鼠 20 只（第四军医大学实验动物中心） ，体质量 180220g.实验过程中每只动物单独饲于塑料盒中，室温2226，为了保持动物昼夜生物节律，实验室每日8:0020:00 开灯，20:008:00 熄灯，行为学实验均在9:0018:30 之间进行 .实验前 5d 每日将大
13、鼠置于实验观察箱中30min，使之适应.本实验是严格按照 IASP 关于应用清醒动物进行疼痛实验研究纲要的要求来实施和完成的11 .将老龄大鼠随机分为 2 组: 实验组 1:左足底 sc 蜜峰毒液（bee venom，BV ）组（n=10）;实验组 2:左足底 sc 甲醛（Formalin，F）组（n=10）.将成年大鼠也随机分为 2 组作为对照:对照组 1:左足底 sc BV 组（n=10）;对照组 2:左足底 sc F 组（n=10 ）. 所用 BV 溶液是将粗制冻干蜜蜂毒素（美国 Sig-ma 公司）溶于 9g L-1 生理盐水制成，采用质量浓度 为 4g L -1 ，体积为 50L3-
14、8 .F 溶液是用 9g L-1 生理盐水溶解化学纯多聚甲醛配制 9.25g L-1 溶液，配制成浓度 25mL L-1 的溶液，体积 50L.测痛的实验器材为 RTY-3 型自动热刺激仪（西安峰岚仪器厂）及 von-Frey 纤毛机械刺激器（刺激强度由大到小依次为:6150， 120， 90，60，45，39.5，37，36 ，30，26.5，19，12 ，9.5，8.0，5.8，3.7，1.7，1.0 ，0.6 和 0.3g）. 1.2 方法 1.2.1 BV 与 F 致痛模型的建立 根据本实验室以往的报道3，5，6 ，实验者轻轻地固定大鼠，用 26G5/8 皮针连接1mL 注射器，尽快地
15、将 50L 的 BV 或 F 注入其左后肢足底中心皮下，注入后立即定量观察动物自发性痛反射行为（5min 自发缩足反射次数）.致痛剂注射前或 2h 后用辐射热刺激仪或 von-Frey 机械刺激器测试注射侧足底热刺激缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency，PWTL）和机械刺激缩足反射阈值（ paw withdrawal mechanical thre-shold，PWMT）.BV 或 F 注射完毕后，分别对持续自发痛缩足反射、PWTL 和 PWMT 的变化程度与时程（给药后 2，4，8，24，48，72 及 96h）进行定量评价. 1.2.2 PWTL 评
16、价法 3-5 将大鼠置于一底部为 2mm 厚玻璃板的 20cm20cm25cm 的透明有机玻璃箱中，并放置于高于实验台 30cm 的架子上以便观察，待测大鼠于箱中适应 30min 以上，使之从不安到逐渐安静下来.应用 RTY-3 型辐射热刺激仪，内装100W 卤素投射灯，调节电压至 10V，调节灯源与玻璃板之间的距离，使落在足底的照射光圈直径为 5mm，记录从照射开始至出现缩足逃避反射时间（s） ，此即为 PWTL;重复测量 35 次，同一部7位间隔 10min，不同部位间隔 5min，取 PWTL 平均值. 如果大于40s 大鼠仍无反应则停止照射，以免导致足底组织热损伤. 1.2.3 PWMT 评价法3-5 以不同粗细和长度的尼龙丝制成 17 个刺激强度不同（0.3 45g）的 von-Frey 机械刺激器.将一20cm20cm25cm 的透明有机玻璃箱放置于顶部为铁丝网高30cm 的架子上，实验者手
