《人教版选修一课题1《DNA的粗提取与鉴定》ppt课件2》由会员分享，可在线阅读，更多相关《人教版选修一课题1《DNA的粗提取与鉴定》ppt课件2（31页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、选修选修I I 专题专题5 5 课题课题1 1 DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 DNA的粗提取与鉴定实验 一 目的要求 1 了解从细胞中提取DNA的基本原理 2 初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方 法 3 观察提取出来的DNA 二 实验思路 1 DNA从哪提取 2 怎样将DNA与细胞中的其他物质分 离 3 怎样鉴定我们提取的DNA 1 提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离 具有不同物理或化学性质的生物 大分子 2 生物大分子 主要指蛋白质 酶和核酸 3 提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA 蛋白质和脂质等在物理和化学性 质方面的差异 提取DNA 去除其他成分 三
2、提取DNA的 方法 4 4 DNADNA的溶解性的溶解性 DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶解度不溶液中溶解度不 同 利用这一特点 选择适当的盐浓度就能使同 利用这一特点 选择适当的盐浓度就能使DNADNA充分溶解充分溶解 而使杂质沉淀 或者相反 而使杂质沉淀 或者相反 5 5 讨论 讨论 根据根据DNADNA在在NaClNaCl溶溶 液中的溶解度曲线图 思考液中的溶解度曲线图 思考 在什么浓度下 在什么浓度下 DNADNA的溶解度的溶解度 最小 最小 DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶液中的 溶解度是如何变化的溶解度是如何
3、变化的 在NaCl溶液浓度低于0 14 mol L时 DNA的溶解度随 NaCl溶液浓度的增加而逐渐 降低 在0 14 mol L时 DNA溶解度最小 当NaCl溶 液浓度继续增加时 DNA的 溶解度又逐渐增大 如何通过控制如何通过控制NaClNaCl溶液的浓溶液的浓 度使度使DNADNA在盐溶液中溶解或析在盐溶液中溶解或析 出 出 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol L时 DNA的溶解度最大 浓度为 0 14 mol L时 DNA的溶解度最低 利用这一 原理 可以使DNA在盐溶液中 溶解或析出 6 6 DNADNA在酒精溶液中的溶解性在酒精溶液中的溶解性 DNADNA不溶于酒精不溶于酒精溶
4、液 但是细胞中的某些物质则可以溶液 但是细胞中的某些物质则可以 溶于酒精溶于酒精 利用这一原理 可以将 利用这一原理 可以将DNADNA与蛋白质进一与蛋白质进一 步分离步分离 7 7 DNADNA对酶 高温和洗涤剂的耐受性对酶 高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能蛋白酶能水解蛋白质水解蛋白质 但是对 但是对DNADNA没有影响没有影响 大多数蛋白质大多数蛋白质不能不能忍忍 受受6060 80 C80 C的高温 的高温 而而DNADNA在在80 C80 C以上才会以上才会 变性变性 洗涤剂可以溶解细胞洗涤剂可以溶解细胞 的细胞膜 的细胞膜 去除脂质和去除脂质和 蛋白质蛋白质 但对但对DNADNA没有影
5、没有影 响响 四 四 DNADNA的粗提取与鉴定的实验面的粗提取与鉴定的实验面 临的问题临的问题 一 实验材料的选取 一 实验材料的选取 不同生物的组织中DNA含量不同 在选取材料时 应本着DNA含量高 材料易得 便于提取的原则 你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA 哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌 从核DNA数目来看 猪38条 鸡78条 哺乳动物血0 条 猕猴桃58条 洋葱16条 豌豆14条 菠菜12条 大肠杆菌1条 请选择动植物材料各一种 1 动物细胞 动物细胞的破碎较易 例如 在鸡血细胞 液中加入一定量的蒸 馏水 同时用玻璃 棒搅拌 过滤后收集 滤液即可 讨论 为什么加 入蒸
6、馏水能使鸡 血细胞破裂 二 破碎细胞 获取含 二 破碎细胞 获取含DNADNA的滤液的滤液 2 植物细胞 植物细胞需要先 用一定的洗涤剂和 食盐溶解细胞膜 实例 提取洋葱DNA 时 在切碎的洋葱中 加入一定的洗涤剂和 食盐 进行从分的搅 拌和研磨 过滤后收 集研磨液 答 研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全 提取的DNA量变少 影响实验结果 导致看不 到丝状沉淀物 用二苯胺鉴定不显示蓝色等 讨论 如果研磨不充分 会对实验结果产生怎样 的影响 三 去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论 此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞 成分 答 可能含有核蛋白 多糖和RNA等杂
7、质 讨论 为什么反复地溶解与析出DNA 能够 去除杂质 用高盐浓度的溶液溶解DNA 能除去在 高盐中不能溶解的杂质 用低盐浓度使DNA析 出 能除去溶解在低盐溶液中的杂质 因此 通过反复溶解与析出DNA 就能够除去与 DNA溶解度不同的多种杂质 方案一 含DNA的滤液 2mol L NaCl 同方 向搅拌 DNA溶解 加入蒸馏水 DNA析出 过滤得到过滤物 放到2mol LNaCl溶液 中溶解 DNA NaCl溶解液 讨论 方案二与方案三的原理有什么不同 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白 从而使提取的DNA与蛋白质分开 方案三利用 的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同 从而 使蛋白质变性 与DN
8、A分离 方案二 30mL滤液 嫩肉粉 木瓜蛋白 酶 静置10 15分钟 DNA滤液 方案三 30mL滤液 60 75 恒温保温 10 15分钟 过滤获得DNA滤液 四 四 DNA DNA的析出的析出 与鉴定与鉴定 2 DNA的鉴 定 鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度 为2mol L 的NaCl溶液5ml于两只试管中 其中一 只加入DNA丝状物 各加入二苯胺4ml 试剂 混 合均匀后 将试管置于沸水中加热5min 待试管 冷却后 比较两只试管中溶液颜色的变化 看看 溶解有DNA的溶液是否有蓝色 DNA的粗提取与鉴定 一 实验原理 1 血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细 胞核膜
9、的破裂 利用此特性可得到含有DNA的溶液 2 DNA在氯化钠溶液中的溶解度 是随着氯化钠的浓度 的变化而改变的 DNA在物质的量浓度为0 14 mol L 的氯化钠溶液中的溶解度最低 利用这一原理 可以使 溶解在氯化钠溶液中的DNA析出 3 DNA不溶于酒精溶液 但细胞中的某些物质则可以溶 于酒精 利用这一原理 可以进一步提取出含杂质较少 的DNA 4 DNA遇二苯胺 沸水浴 会变成蓝色 因此 二苯胺 可以作为鉴定DNA的试剂 实验材料和用具 实验材料 1 鸡血细胞液 5 10ml 2 体积分数为95 的冷酒精溶液 实验前置于 冰箱内冷却24h 3 蒸馏水 4 质量浓度为0 g ml的柠檬酸钠
10、溶液 抗凝剂 5 物质的量浓度分别为2mol L和0 015mol L 的NaCl溶液 6 二苯胺试剂 实验用具 铁架台 铁环 镊子 三角 架 酒精灯 石棉网 载玻片 玻璃棒 滤纸 滴管 量筒 100ml 一个 烧 杯 100ml 一个 50ml 500ml各二 个 试管 20ml 二个 漏斗 试管 夹 纱布 2 提取血细细胞核物质质 3 溶解核内DNA 4 析出含DNA的粘稠物 5 滤取含DNA的粘稠物 6 DNA粘稠物再溶解 7 过滤含DNA的2 mol L NaCl溶液 8 提取含杂质较少的DNA 9 DNA鉴定 基本操作步骤 1 制备鸡血细胞液 二 方法与过程 1 制鸡血细胞液 活鸡鲜
11、血经分离或沉淀获得 0 1g mL柠柠檬酸钠钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中 玻棒搅拌 离心 分离或静置沉淀 2 提取DNA 取血细胞5 10mL 20mL蒸馏水 用玻棒沿一个方向 快速搅拌 纱布过滤 滤液中含DNA和其他核物质 如蛋白质 原理 血细胞的细胞膜 核摸吸水胀破 玻璃棒快速 搅拌 机械加速血细胞破裂 提取血细胞核物质 溶解核内的DNA 滤液 2mol L的NaCl溶液40mL 玻棒沿一个方向 轻缓搅拌 析出含DNA的粘稠物 滤取含DNA的粘稠物 DNA粘稠物的再溶解 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水 并沿一个方向轻 轻搅拌 出现丝状物 当丝状物不在增加时 停止加 水 此
12、时NaCl溶液的浓度相当于0 14mol L 用多层纱布过滤 含DNA的粘稠物留在纱布上 20mL2mol L的NaCl溶液 步骤 含DNA的粘稠物 在20mL烧杯中轻缓搅拌 3min 使尽可能多的 DNA溶解在NaCl溶液 过滤含有DNA的NaCl溶液 用放有两层纱布的漏斗过滤步骤 所得的溶液 滤液中含有DNA 提取含有杂质较少的DNA 步骤 所得的滤液 体积分数为95 的冷却酒精 50mL 用玻棒沿一个方向轻缓搅拌 溶液中 析出 出现乳白色丝状物 用玻棒将丝状物卷起 并用滤纸 吸取上面的水分 3 DNA的鉴定 加入二苯胺试剂4mL 用玻棒搅拌使DNA溶解 沸水浴5min 观察溶液是否出现浅
13、蓝色 1 共有 三次过滤 两次析出 七次搅拌 2 加入 两次蒸馏水 三次NaCl溶液 一次酒精 三 实验小结 方法步骤 加入物质 目的 1 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 2 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水 3 溶解细胞核内的DNA 2 m1 L 的NaCI溶液40mL 4 析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 5 滤取含DNA的黏稠物 6 将DNA的黏稠物再溶解 2 mol L 的NaCl溶液20 mL 7 过滤含DNA的NaCl 溶液 8 提取含有杂质较少的 DNA 冷却的95 的酒精50 mL A 1 向试管中加入0 015 mol L 的NaCl溶液5mL 2 加入DNA 3 4 mL
14、二苯胺试剂 9 DNA的鉴定 B 1 向试管中加入0 015mol L 的NaCl溶液5mL 2 4 mL 二苯胺试剂 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂 溶解DNA 使2mol L的NaCl溶液稀释至0 14mol L使得DNA 最大限度地释出 使含DNA的黏稠物被留在纱布上 使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 除去含DNA的滤液中的杂质 提取DNA A出现蓝色 B无变化 答 整个实验共 两次蒸馏水 三次过滤 两 次析出 七次搅拌 两次蒸馏水 第一次 细胞吸水胀破 第一步 第二次 使 DNA黏稠物析出 第三步 1 此实验过程中有几次使用蒸馏水 几次过 滤 几次析出 几次
15、搅拌 分别在哪一步 过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有 关 第二次要用其滤出的黏稠物有关 所以要 使用多层纱布 第一次和第三次均要用其滤液 使用的纱布为1 2层 三次过滤 第一次 DNA存在于滤液里 第一步 第二次 DNA被留在纱布上 第四步 第三次 DNA存在于滤液里 第六步 两次析出 第一次 用0 14 mol L 的NaCI溶 液含杂质多 第三步 第二次 用冷却的95 的酒精第七步 七次搅拌 第一 二 三 五 七 八 九步 其中除第八步外 其余均要朝一个方向搅拌 在第三 五步搅动还要轻缓 玻璃棒不要 直插烧杯底部 这样才能保证得到完整的 DNA 2 提取鸡血中的DNA时 为什么要除去血液 中的上清液 答 DNA的提取 关键是对杂质的去除 由于 上清液是血液中的血浆部分 不含DNA 所以 要除去上清液 含有蛋白质 1 实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol L和 0 14 mol L对DNA有何影响 答 前者是溶解DNA 后者是使DNA析出 3 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A 氯化钠的浓度越低 对DNA的溶解度越大 B 人血也可代替鸡血进行实验 C 柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D DNA不能溶于酒精 4 去除DNA杂质时 可直接在滤液中加入 反应10 15min A 嫩肉粉 B 蒸馏水 C 2mol lNaCl D 酒精
