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1、1结直肠癌中 PTEN 蛋白的表达【摘要 】 目的 探讨结直肠癌中 PTEN 蛋白的表达及其与侵袭和转移的关系。方法 应用免疫组化 SP 法检测 67 例结直肠癌中PTEN、Ecad 、MMP2 的表达情况，5 例正常大肠黏膜作对照。结果 PTEN 蛋白表达定位于细胞质。与正常大肠黏膜相比，癌组织中 PTEN 表达明显降低，并随分化程度降低呈递减趋势；淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组；与浸润深度呈负相关。结直肠癌中PTEN 表达与 Ecad 呈正相关，与 MMP2 呈负相关；淋巴结转移组 PTEN、 Ecad 低表达且 MMP2 高表达的人数明显高于无淋巴结转移组。结论 PTEN、Ecad
2、低表达，MMP2 高表达在结直肠癌的侵袭和转移过程中可能起协同作用，联合检测可为结直肠癌生物学行为判定和进一步的研究和治疗提供有效病理学依据。 【关键词】 结直肠癌 PTEN Ecad MMP2 免疫组化0 引言PTEN 是迄今发现的第一个具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因，在参与细胞周期调控、抑制细胞迁移、扩散和转移等方面具有重要作用1，但尚需深入研究。本研究采用免疫组化 SP 法检2测结直肠癌中 PTEN 的表达情况，并分析其表达与生物学行为以及与 Ecad 和 MMP2 表达的关系，为结直肠癌的进一步研究和治疗提供病理学依据。1 材料和方法1.1 病例 收集邢台市人民医院 2000 年
3、11 月2002 年 10月期间手术切除经病理证实的结直肠癌存档蜡块 67 例。按照 2000年 WHO 结直肠肿瘤组织学分级标准分类，高、中、低分化腺癌分别为 21、15 和 31 例。有淋巴结转移的 36 例，无淋巴结转移的 31例。另选 5 例正常大肠黏膜作对照。标本经 10%中性福尔马林液固定，常规取材、脱水，石蜡包埋，4m 厚连续切片，分别做 HE 及免疫组化染色。1.2 试剂 鼠抗人 PTEN、Ecad 、MMP2 单克隆抗体（均为即用型）和 SP 试剂盒及 DAB 显色剂均购自福州迈新生物技术开发公司。1.3 免疫组化染色方法 采用 SP 法。 切片常规脱蜡水化，枸橼酸盐缓冲液微
4、波抗原修复（MMP2 除外） ,分别滴加一抗，4湿盒过夜，DAB 显色，苏木素复染。用 PBS 代替一抗作阴性对照。31.4 结果判定标准 PTEN、MMP2 表达定位于胞质，Ecad 表达定位于细胞膜，阳性信号呈黄棕褐色颗粒。每例均随机观察 10 个高倍视野，参照有关研究1，2，用半定量积分法判断结果。为确保实验结果评估的准确性，所有病例均经 2 名有经验的病理科医生进行光镜观察共同确诊。1.5 统计学分析 应用 SPSS10.0 统计软件对实验结果进行2 检验、KruskalWallis 秩和检验、Spearman 等级相关分析。2 结果2.1 PTEN 在正常大肠黏膜及结直肠癌组织中的表
5、达 5 例正常大肠黏膜组织中 PTEN 蛋白表达均为阳性 ,定位于上皮细胞胞质内，其中，强阳性占 80%。67 例癌组织中，PTEN 阳性表达占83.5%，其中强阳性占 47.7%，部分病例表达降低或缺失。癌组织中 PTEN 蛋白的阳性表达低于正常大肠黏膜，见图 13。2.2 结直肠癌中 PTEN 表达与临床病理特征的关系 PTEN 在高、中、低分化腺癌中的表达呈逐步降低趋势（2=23.339，P0.01） ；在 T3T4 组表达明显低于 T1T2 组（2=4.644，P0.05） ；在淋巴结转移组的表达明显低于无淋巴结转移组（2=14.18，P0.01） 。PTEN 蛋白表达与性别、年龄4和
6、病变部位间，均未发现有显著相关性，见表 1。表 1 67 例结直肠癌中 PTEN 表达与临床病理特征的关系（略）*：侵犯肌层以内；* ：侵犯肌层以外2.3 结直肠癌中 PTEN 表达与 E cad、MMP2 表达的关系 见表 2。表 2 结直肠癌中 PTEN 的表达与 Ecad、MMP2 表达的关系（略）结直肠癌中 PTEN 与 Ecad 表达呈正相关（r=0.65， P0.01） ，与 MMP2 表达呈负相关（r=0.279 ，P0.05） 。值得注意的是，在 31 例无淋巴结转移的病例中，PTEN 和 Ecad 高表达、MMP2 低表达者 13 例，占41.9%，而有淋巴结转移的 36 个
7、病例中仅 2 例，占 5.6%，两组具有明显差异（P0.01 ） ；有淋巴结转移的 36 个病例中，PTEN 和Ecad 低表达、 MMP2 高表达者 17 例，占 47.2%，在 31 例无淋巴结转移的病例中仅有 2 例，占 6.5%，两组亦具有明显差异（P0.01） 。53 讨论3.1 结直肠癌中 PTEN 的表达及意义 近几年研究发现，人类许多恶性肿瘤如胶质母细胞瘤、恶性黑色素瘤、子宫内膜癌、乳腺癌等都存在着 PTEN 基因异常。PTEN 基因突变、杂合性缺失和过甲基化等遗传学改变是构成 PTEN 表达下调的分子基础 3。本实验研究发现，结直肠癌中 PTEN 蛋白表达分布呈弥漫性或散在性
8、或缺失，与正常大肠黏膜组织相比明显降低（P0.05） ，说明结直肠癌中 PTEN 蛋白表达存在下调或缺失现象。同时发现 PTEN 蛋白在高分化、中分化、低分化腺癌中的表达呈逐步降低趋势；有淋巴结转移的病例明显低于无淋巴结转移的病例；与浸润深度呈负相关。这说明结直肠癌中 PTEN 蛋白的表达降低或缺失，可能赋予了癌细胞比较强的侵袭和转移潜能，参与了结直肠癌的侵袭和转移过程。3.2 结直肠癌中 PTEN 表达与 Ecad、MMP2 表达的相关性 Ecad 是一种跨膜糖蛋白粘附分子，主要介导细胞间的同质型粘附。研究表明，其表达程度和功能状态直接影响瘤细胞间的粘着力，与侵袭和转移密切相关4。MMP2
9、是锌离子依赖性蛋白酶家族成员之一，在降解细胞外基质和基底膜，促进瘤细胞向周围组织浸润和转移方面起重要作用5。本实验发现，结直肠癌中 PTEN 表达与 Ecad 呈正相关，与 MMP2 呈负相关，淋巴结转移组 6PTEN、Ecad 低表达且 MMP2 高表达者的人数明显高于无淋巴结转移组。这说明肿瘤的侵袭和转移是一个多因素、多步骤过程，Ecad 低表达可导致细胞间粘附力减弱，使得癌细胞易于脱离原发瘤，MMP2 高表达能够促进周围细胞外基质的降解, 为瘤细胞迁移扫除屏障，PTEN 低表达则通过影响 integrin 介导的 MAPK 信号转导途径，促进瘤细胞的迁移和扩散。PTEN 与 Ecad、M
10、MP2 表达的相关性说明三者在肿瘤的侵袭和转移中可能起协同作用。【参考文献】1 周隽，吴强，杨枫. 乳腺癌中 PTEN 表达及其临床病理意义J. 临床与实验病理学杂志, 2003, 19(2)：162164.2 林勤，庄严阵，许东坡，等 . 乳腺癌中 PTEN 蛋白表达及其与 p27kip1 和 cyclinD1 表达的相关性J. 中华肿瘤杂志, 2003，25(3)：246249.3 郑华川，陈颖，况立革 , 等. PTEN 编码产物在胃癌发生发展不同阶段中的表达及意义J. 中华肿瘤杂志, 2003, 25(4): 1316.74 孙红，李明众，韩军. Ecadherin 与肿瘤侵袭转移的研究进展J. 陕西肿瘤医学, 2001，9(1): 6263.5 刘琳, 熊永炎, 田素芳. VEGF 与 MMP2 在胃腺癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭转移的相关性研究J. 肿瘤防治研究, 2004, 31(1): 1416.
