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1、食品安全检测实验指导书食品工程教研室目 录实验一 食品中铅的测定 .3实验二 食品中三梨酸、苯甲酸的测定6实验三 食品中亚硝酸盐的测定8实验四 食品中漂白剂的测定（蒸馏法）10实验一 食品中铅的测定一、实验目的：了解食品中铅含量测定的原理；掌握食品中铅的测定方法。二、实验原理：试样经酸消解后，导入原子吸收分光光度计石墨炉中，电热原子化后吸收283.3 n m共振线，在一定浓度范围，其吸收值与铅含量成正比，与标准系列比较定量。三、试剂与仪器:3.1 硝酸。3.2 过硫酸铵。3.3 过氧化氢(30%)。3.4 高氯酸。3.5 硝酸(1+1):取50mL硝酸慢慢加人50mL水中。3.6 硝酸(0.5
2、 mol/1.):取3.2mL硝酸加人50mL水中，稀释至100mL.3.7 硝酸(1 mol/L):取6.4mL硝酸加人50mL水中，稀释至100mL,3.8 磷酸铵溶液(20gg/L):称取2.0 g 磷酸铵，以水溶解稀释100mL.3.9 混合酸:硝酸+高氯酸(4+1)。取4份硝酸与1份高氯酸混合。3.10 铅标准储备液:准确称取1.000g 金属铅(99.99%)，分次加少量硝酸(1+1)，加热溶解，总量不超过37mL，移人1000m L容量瓶，加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含1.0 m g铅。3.11 铅标准使用液:每次吸取铅标准储备液1.0mL于100mL容量瓶中，加硝酸(0.5
3、mol/L)或硝酸(1mol/L)至刻度。如此经多次稀释成每毫升含量为10.0，20.0，40.0，60.0，80.0ng铅的标准使用液。 仪器:所用玻璃仪器均需以硝酸(1+5)浸泡过夜，用水反复冲洗，最后用去离子水冲冼干净。原子吸收分光光度计(附石墨炉及铅空心阴极灯)。马弗炉、干燥恒温箱、瓷坩埚、压力消解器、压力消解罐。可调式电热板、可调式电炉。四、实验步骤：试样预处理4.1 在采样和制备过程中，应注意不使试样污染。4.1.2 粮食、豆类去杂物后，磨碎，过20目筛，储于塑料瓶中，保存备用。4.1.3 蔬菜、水果、鱼类、肉类及蛋类等水分含量高的鲜样，用食品加工机或匀浆机打成匀浆，储于塑料瓶中，
4、保存备用。4.2 试样消解湿式消解法:称取试样1.00g -5.00g 于凯式烧瓶中，放数粒玻璃珠加10mL混合酸，加盖浸泡过夜，加一小漏斗电炉上消解，若变棕黑色，再加混合酸，直至冒白烟，消化液呈无色透明或略带黄色，放冷用滴管将试样消化液洗入或过滤入(视消化后试样的盐分而定)10 mL-25mL容量瓶中，用水少量多次洗涤凯式烧瓶，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混匀备用;同时作试剂空白。4.3 测定4.3. 1 仪器条件:根据各自仪器性能调至最佳状态。参考条件为波长283. 3 nm,狭缝0.2 nm-1.0nm，灯电流5mA-7mA，干燥温度120,20s；灰化温度450，持续15s-20s
5、，原子化温度1700C-2300，持续4s-5s，背景校正为氘灯或塞曼效应。4.3.2 标准曲线绘制:吸取上面配制的铅标准使用液10.0,20.0,40.0,60.0,80.0 ng/mL(或Rg/L)各10L，注入石墨炉，测得其吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。4.3.3 试样测定:分别吸取样液和试剂空白液各10L，注人石墨炉，测得其吸光值，代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中铅含量。4.3.4 基体改进剂的使用:对有干扰试样，则注人适量的基体改进剂磷酸二氢铵溶液(20 g/L)一般为5L或与试样同量消除干扰。绘制铅标准曲线时也要加入与试样测定时等量的基体改进剂磷酸二氢铵
6、溶液。五、数据记录与 结果计算：试样中铅含量按式(1)进行计算。X=(C 一C0) x v x 1000/m x 1000 (1)式中:X 试样中铅含量，单位为微克每千克或微克每升(g/kg或L g/L) ;C, 测定样液中铅含量，单位为纳克每毫升(ng/mL) ；Co 空白液中铅含量，单位为纳克每毫升(ng/mL) ；V一 一试样消化液定量总体积，单位为毫升(mL)；m 试样质量或体积，单位为克或毫升(9或mL) ；计算结果保留两位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%,六、结果分析与问题讨论实验二 食品中苯甲酸、山梨酸含量的测定 薄层色谱法
7、一、实验目的：掌握薄层分析的原理和方法。利用薄层法测定苯甲酸、山梨酸在食品中的含量。二、实验原理：样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将样品提取液浓缩，点于聚酞胺薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值，与标准比较定性，并可进行概略定量。三、仪器与试剂：仪器： 吹风机、层析缸、玻璃板:10cm18cm、微量注射器:10；100 L、 喷雾器。试剂：异丙醉、正丁醇、石油醚:沸程为30-60C、乙醚:（不含过氧化物）、氨水、无水乙醇、聚酰胺粉:200目、盐酸(1+1):取100 ml盐酸，加水稀释至200 mL、氯化钠酸性溶液(40 g/L)：于氯化钠溶液(40 g/L)中加少
8、量盐酸(1+1)酸化、展开剂：正丁醇+氨水+无水乙醇(7+1+2)、异丙醇+氨水+无水乙醇(7+1+2)、 山梨酸标准溶液:准确称取；0.2000g山梨酸用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0 mg山梨酸、 苯甲酸标准溶液:准确称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0mg苯甲酸。 显色剂:澳甲酚紫一乙醇(50%)溶液(0.4 g /L)，用氢氧化钠溶液(4g /L)调至pH=8,四：操作方法：样品提取：称取 2.50 g 事先混合均匀的样品，置于25m L带塞量筒中，加0.5 m L盐酸(1
9、十1)酸化，用15，10 ml乙醚提取两次，每次振摇1min，将上层醚提取液吸入另一个25 mL带塞量筒中，合并乙醚提取液，用3 ml氯化钠酸性溶液(40g/L)洗涤两次，静止15 min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀，吸取10.0mL乙醚提取液分两次置于10mL带塞离心管中，在约40的水浴上挥干，加入0.10mL乙醇溶解残液，备用。 测定：聚酞胺粉板的制备：称取1.6 g 聚酞胺粉，加0.4 g 可溶性淀粉，加约7m L水，研磨3-5min,立即倒人涂布器内制成10 cm18c m,厚度。.3 m m的薄层板两块，室温干燥后，于80干燥1h，取出。置于
10、干燥器中保存。点样：在薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点1L,2L样品液，同时各点1L,2L山梨酸、苯甲酸标准溶液。展开与显色：将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂槽内，展开剂槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10 cm，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色背景为蓝色样品中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量（山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82，0.73）五、计算：X=实验三 香肠中亚硝酸盐测定一、实验的目的：掌握分光光度计的原理及其使用方法。学会用分光光度法测定食品中亚硝酸盐的含量。二、实验原理：样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N-1-萘基乙二
11、胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。三、仪器与试剂与材料：仪器： 小型粉碎机； 721分光光度计；万分之一天平；水浴锅等。试剂：（1） 氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入500mL水，准确加入20.0mL盐酸，振荡混匀，准确加入50mL氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐和稀氢氧化铵调试至pH9.69.7。（2） 硫酸锌溶液（0.42mol/L）：称取120g（ZaSO47H2O用水溶解，稀释至1L。（3） 氢氧化钠溶液（20g/L）：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。（4） 对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL水和300mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。（5）
12、 N-1-萘基乙二胺溶液（1g/L）：称取0.1gN-1-萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。（6） 显色剂：临用前将N-1-萘基乙二胺溶液（1g/L）和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。（7） 亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加10mL氯化铵缓冲液，加水稀至刻度，混匀，在4避光保存。此溶液每毫升相当于500g的亚硝酸钠。（8） 亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液0.50mL，置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0g亚硝酸钠。四、操
13、作步骤：1） 样品处理：称取约10.00g（粮食取5g）经绞碎混匀样品，置于打碎机，加30mL水和6mL氢氧化钠溶液（20g/L），混匀，用稀盐酸调样品pH=8.0定量转移至100mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加25mL氢氧化钠，混匀。置60水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液备用。2 ） 测定（1） 亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0.00； 1.00；2.00；3.00；4.00；5.00mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0； 5.0；10.0；5.0；20.0；25.0g亚硝酸钠），分别
14、置于25mL带塞比色管中。于标准管中分别加入4.50 mL氯化铵缓冲液，加2.5 0mL60%乙酸后立即加入5.00 mL显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm比色杯（灵敏度低时可换2cm比色杯），以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0,00；0.40；0.80；1.20；1.60；2.00mL亚硝钠标准使用液（相当于0.0；2.0；4.0；6.0；8.0；10.0g亚硝酸钠）。(2) 样品测定：吸取10.00mL（或更合适的量）上述滤液（4.1）于25mL带塞比色管中，自4.2.1“于标准管中分别加入
15、4.50mL氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。5、计算X样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg;m1样品质量，g；m2测定用样液中亚硝酸盐的质量，g；V1样品处理液总体积，mLV2测定用样液体积，mL；6、思考题：1）标准曲线的求作过程中应注意哪些事项？2）紫外可见分光度计的结构如何？其测定原理是什么？实验四 食品中漂白剂的测定（蒸馏法）1、实验目的：进一步认识二氧化硫及亚硫酸盐在食品中用途，掌握其测定方法。2、实验原理： 在密闭容器中对样品进心行酸化并加热蒸馏，以释放出其中的二氧化硫，释放物用乙酸铅溶液吸收。吸收后用浓盐酸酸化，再以碘标准溶液滴定，根据所消耗的碘标准溶液量计算出样品中的二氧化硫含量。本法
