《年高考生物总复习重点精品教案：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数()(人教版选修)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《年高考生物总复习重点精品教案：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数()(人教版选修)（31页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、课题课题2 2 土壤中分解尿素的细菌的土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数分离与计数 专题专题2 2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用 一 课题背景一 课题背景 1 1 尿素的利用 尿素的利用 尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥 农业氮肥 尿素尿素不能直接不能直接被农被农 作物作物吸收 吸收 土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才之后才 能被植物利用 能被植物利用 2 2 细菌利用尿素的原因 细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶 CO NHCO NH 2 2 脲酶脲酶 H H 2 2 OO CO CO
2、2 2 NHNH 3 3 3 3 常见的分解尿素的微生物 常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌 小球菌 假单胞杆菌 克氏杆菌 芽孢杆菌 小球菌 假单胞杆菌 克氏杆菌 棒状杆菌 梭状芽孢杆菌 某些真菌和放线菌棒状杆菌 梭状芽孢杆菌 某些真菌和放线菌 也能分解尿素 也能分解尿素 4 4 课题目的 课题目的 从土壤中分离出能够分解尿素的细菌从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一一 研究思路研究思路 筛选菌株筛选菌株 统计菌落数目统计菌落数目 设置对照设置对照 1 1 实例 实例 启示 启示 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的
3、寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求 到相应的环境中去寻找 要求 到相应的环境中去寻找 原因 原因 因为热泉温度因为热泉温度7070 8080 0 0 C C 淘汰了绝大 淘汰了绝大 多数微生物只有多数微生物只有TaqTaq细菌被筛选出来 细菌被筛选出来 DNADNA多聚酶链式反应多聚酶链式反应是是 一种在体外将一种在体外将少量少量DNADNA 大量复制大量复制的技术 此项的技术 此项 技术要求使用技术要求使用耐高温 耐高温 9393 0 0 C C 的 的DNADNA聚合酶 聚合酶 要分离一种微生物 必须根据该微生物的特点 要分离一种微生物 必须根据该微生物的特点 包括营养 生理 生长条
4、件等 包括营养 生理 生长条件等 方法 方法 抑制大多数微生物不能生长抑制大多数微生物不能生长 造成有利于该菌生长的环境 造成有利于该菌生长的环境 结果 结果 培养一定时间后 该菌数量上升 再通过培养一定时间后 该菌数量上升 再通过 平板稀释等方法对它进行纯化培养分离 平板稀释等方法对它进行纯化培养分离 2 2 实验室中微生物的筛选原理 实验室中微生物的筛选原理 人为提供有利于人为提供有利于目的菌株目的菌株生长的条件生长的条件 包括营包括营 养 温度 养 温度 pHpH等等 同时抑制或阻止其他微生 同时抑制或阻止其他微生 物生长 物生长 15 0g15 0g琼脂琼脂 1 0g1 0g尿素尿素
5、10 0g10 0g葡萄糖葡萄糖 0 2g0 2gMgSOMgSO4 4 7H 7H 2 2 OO 2 1g2 1gNaHNaH 2 2 POPO 4 4 1 4g1 4gKHKH 2 2 POPO 4 4 3 3 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基 养基 从物理性质看此培养基属于哪类 从物理性质看此培养基属于哪类 固体培养基固体培养基 在此培养基中哪些作为碳源 氮源 在此培养基中哪些作为碳源 氮源 碳源 碳源 葡萄糖 尿素葡萄糖 尿素 氮源 氮源 尿素尿素 培养基的培养基的氮源为尿素氮源为尿素 只有能合成 只有能合成脲酶脲酶的微生物的微生物
6、才能分解尿素 以尿素作为氮源 才能分解尿素 以尿素作为氮源 缺乏缺乏脲酶的微脲酶的微 生物由于不能分解尿素 缺乏氮源而不能生长发生物由于不能分解尿素 缺乏氮源而不能生长发 育繁殖 而受到抑制 所以用此培养基就能够选育繁殖 而受到抑制 所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物 择出分解尿素的微生物 5 5 培养基选择分解尿素的微生物的原理 培养基选择分解尿素的微生物的原理 1 1 显微镜直接计数 显微镜直接计数 利用利用血球计数板血球计数板 在显微镜下计算一定容积里 在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量 样品中微生物的数量 统计菌落数目 统计菌落数目 不能区分死菌与活菌 不能区分死菌
7、与活菌 不适于对运动细菌的计数 不适于对运动细菌的计数 需要相对高的细菌浓度 需要相对高的细菌浓度 个体小的细菌在显微镜下难以观察 个体小的细菌在显微镜下难以观察 缺点缺点 2 2 间接计数法 间接计数法 活菌计数法 活菌计数法 原理 原理 在稀释度足够高时 微生物在固体培在稀释度足够高时 微生物在固体培 养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖 而成的 即一个菌落代表原先的一个单细胞 而成的 即一个菌落代表原先的一个单细胞 常用方法 稀释涂布平板法 常用方法 稀释涂布平板法 每克样品中的菌落数 每克样品中的菌落数 C V M C V M 其中 其中 C
8、 C代表某一稀释度下平板上生长的平代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数 均菌落数 V V代表涂布平板时所用的稀释液代表涂布平板时所用的稀释液 的体积的体积 ml ml M M代表稀释倍数 代表稀释倍数 注意事项注意事项 为了保证结果准确 一般选择菌落数在为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 30 300 300的平板上进行计数 的平板上进行计数 为使结果接近真实值可将为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中个或三个以上的平皿中 经涂布 培养计算出 经涂布 培养计算出 菌落平均数 菌落平均数 统计的菌落往往比活菌的实际数目低 统计的菌落往往比活菌的实际数
9、目低 涂布平板法所选择的稀释度很重要 一般以涂布平板法所选择的稀释度很重要 一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在落数在5050个左右为最好 个左右为最好 计数法计数法 直接计数法 直接计数法 平板计数法 平板计数法 比浊法 比浊法 膜过滤法膜过滤法 例题 统计菌落数目的方法有例题 统计菌落数目的方法有 A B A B C D C D DD 涂布平板法涂布平板法 重量法重量法 直接计数法直接计数法 比浊法比浊法 生理指标法生理指标法 膜过滤法膜过滤法 设置对照的主要目的设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素是排除实验组中非测试因素
10、对实验结果的影响 提高实验结果的可信度 对实验结果的影响 提高实验结果的可信度 设置对照 设置对照 实例 在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数实例 在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时 目的实验时 A A同学从对应的同学从对应的1010 6 6 倍稀释的培养基倍稀释的培养基 中筛选出大约中筛选出大约150150个菌落 但是其他同学在同样个菌落 但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约的稀释度下只选择出大约5050个菌落 分析其原因个菌落 分析其原因 原因 原因 土样不同 土样不同 培养基污染或操作失误培养基污染或操作失误 或或 者是混入了其他的含氮物质者是混入了其他的含氮物质 小
11、结 通过这个事例可以看出 实验结果要有小结 通过这个事例可以看出 实验结果要有 说服力 对照的设置是必不可少的 说服力 对照的设置是必不可少的 方案一 方案一 由其他同学用与由其他同学用与A A同学相同土样进行实验同学相同土样进行实验 方案二 方案二 将将A A同学配制的培养基在不加土样的情同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养 作为空白对照 以证明培养基是况下进行培养 作为空白对照 以证明培养基是 否受到污染 否受到污染 结果预测 结果预测 如果结果与如果结果与A A同学一致 则证明同学一致 则证明A A无误无误 如果结果不同 则证明 如果结果不同 则证明A A同学存在操作失误或培同学
12、存在操作失误或培 养基的配制有问题 养基的配制有问题 二二 实验的具体操作实验的具体操作 土壤取样土壤取样 从肥沃 湿润的土壤中取样 先铲去表层土 3cm左右 再取样 将样品装入事先准备好的信 封中 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌 制备培养基 制备培养基 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基 应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤10g10g 在稀释土壤溶液的过程中 每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中 每一步都要在火焰旁进行 分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因 不同微生物在土壤中含量不同原因 不同微生物在土壤中含量不同 目的 保证获得
13、菌落数在目的 保证获得菌落数在3030 300300之间 适于计之间 适于计 数的平板数的平板 三三 样品样品 的稀释的稀释 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素 的细菌的数量 选用的稀释范围相同吗 原因 原因 土壤中各类微生物的数量 单位 株土壤中各类微生物的数量 单位 株 kg kg 是不同的 例如在干旱土壤中的上层样本中 是不同的 例如在干旱土壤中的上层样本中 好氧及兼性厌氧细菌数约为 好氧及兼性厌氧细菌数约为2 2 185185万 放线菌万 放线菌 数约为数约为477477万 霉菌数约为万 霉菌数约为23 123 1万 万 结论 结论 为
14、获得不同类型的微生物 就需要按不为获得不同类型的微生物 就需要按不 同的稀释度进行分离 同时还应当有针对性地同的稀释度进行分离 同时还应当有针对性地 提供选择培养的条件 提供选择培养的条件 取样涂布取样涂布 实验时要 对培养皿作 好标记 注 明培养基类 型 培养时 间 稀释度 培养物等 如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在30 300 30 300的平板的平板 则说明稀释操作比较成功 并能够进行菌落的计数 则说明稀释操作比较成功 并能够进行菌落的计数 如果如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大 表明同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大 表明 试验不精确
15、试验不精确 需要重新实验 需要重新实验 微生物的培养与观察微生物的培养与观察 在菌落计数时 每隔在菌落计数时 每隔24h24h统计一次菌落数目 统计一次菌落数目 选取菌落数目稳定时的记录作为结果 选取菌落数目稳定时的记录作为结果 以防止以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 培养不同微生物往往需要不同培养温度 培养不同微生物往往需要不同培养温度 细菌 细菌 3030 37 37 培养培养1 1 2d2d 放线菌 放线菌 2525 28 28 培养培养5 5 7d7d 霉菌 霉菌 2525 28 28 的温度下培养的温度下培养3 3 4d4d 微生物的培养
16、微生物的培养 与观察与观察 三三 结果分析与评价结果分析与评价 1 1 通过对照实验 若培养物有杂菌污染 通过对照实验 若培养物有杂菌污染 菌落数偏高 若培养物混入其他氮源 则菌落数偏高 若培养物混入其他氮源 则 菌落形态多样 菌落数偏高 难以选择出菌落形态多样 菌落数偏高 难以选择出 分解尿素的微生物 分解尿素的微生物 2 2 提示 选择每个平板上长有提示 选择每个平板上长有30 30030 300个个 菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能 相差悬殊 如相差较大 表示实验不精确相差悬殊 如相差较大 表示实验不精确 四 操作提示四 操作提示 无菌操作无菌操作 做好标记做好标记 规划时间规划时间 五五 课外延伸课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 酚红指示剂 培养某种细菌后 如果酚红指示剂 培养某种细菌后 如果PHPH 升高 指示剂将变红 说明该细菌能够升高 指示剂将变红 说明该细菌能够 分解尿素分解尿素 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体
