《药物分析-第十一章抗生素类药物的分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药物分析-第十一章抗生素类药物的分析（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、一 概述 1 抗生素 antibiotics 在低微浓度下即可对某些生物 病原微生物 2 分类 内酰胺类 氨基糖苷类 四环素类 大环内酯类 多烯大环类 多肽类 3 来源 生物合成 发酵 化学合成或半合成 4 抗生素的特点 化学纯度较低 活性组分易发生变异 稳定性差 生产工艺复杂 发酵过程不易控 制易受污染 5 抗生素质量分析 采用生物学法与物理化学法 鉴别 理化方法 微生物法 检查 水分 pH值 异常毒性 热原 细菌 内毒素 降压物质等 含量 效价测定 微生物法 与临床疗效吻合 灵敏度高 但 操作复杂费时 理化方法 准确度与专属性较高 且操作简 便 但与临床疗效有偏差 二 内酰胺类 包括青霉素
2、类和头孢菌素类 1 化学结构 青霉素类 6 APA为母核 头孢菌素类 7 ACA为母核 2 主要理化性质 1 酸性 羧基 pKa 2 5 2 8 酸性较强 与碱金属成盐后水溶性好 2 UV 共轭 青霉素类 苯环取代基 头孢菌素类 母核有共轭结构 3 旋光性 有多个手性碳 4 稳定性 内酰胺 干燥条件较稳定 溶液不稳定 青霉素 降解 失效 氧化剂 酸 碱 酶 金属离子 3 鉴别 1 羟肟酸铁反应 内酰胺类 羟肟酸 显色 2 茚三酮反应 氨基 蓝紫色 3 双缩脲反应 内酰胺类 紫色 4 光谱法 UV NMR 5 色谱法 HPLC TLC NH2OH HCl NaOH Fe3 H 茚三酮 碱性酒石酸
3、铜 呈 色 反 应 头孢利定的头孢利定的NMRNMR鉴别法鉴别法 JP14 JP14 取本品50mg溶于0 5ml重水中 测定NMR 光谱时 应显示 3 8 附近 6 9 7 5 7 9 9 0 单峰信号 多重峰信号 多重峰信号 2 3 5强度比 头孢氨苄鉴别的TLC条件 ChP 2000 5mg ml 2 l 硅胶G 0 1mol L枸橼酸液 0 2mol LNa2HPO4 丙酮 120 80 3 0 1 茚三酮 溶液显色 USP 24 25mg ml 5 l 硅胶 醋酸乙酯 水 乙腈 冰 HAc 48 18 14 14 短波长UV光检出 BP 1999 0 4 W V 1 l 硅烷化硅胶H
4、F254 15 4 NH4Ac pH6 2 丙酮 85 15 254nm检出 4 特殊杂质检查 聚合物 有关物质 异构体等 头孢他啶中聚合物测定 色谱条件与系统适用性试验 用葡聚糖凝胶G 10 40 120 m 为填充剂 玻璃柱内径1 3 1 5cm 床体积50 60ml 流动相A为含3 5 硫酸铵的0 01mol L磷酸盐 缓冲液 取磷酸氢二钠2 19g和磷酸二氢钠0 54g 加水 1000ml使溶解 调节pH至7 0 流动相B为0 01 十 二烷基硫酸钠溶液 流速为每分钟1ml 检测波长为 254nm 以流动相A为流动相 用1mg ml蓝色葡聚糖 2000溶液进样200 l进行测定 理论板
5、数应不低于900 拖尾因子在0 75 1 5 对照品溶液以流动相B为流动 相 重复进样200 l 峰面积值的相对标准差应小于 5 0 对照品溶液的制备 取头孢他啶对照品适量 精 密称定 加水制成每1ml中含头孢他啶100 g的 溶液 摇匀 测定法 取本品适量 精密称定 加水制成每1ml 中约含头孢他啶20mg的溶液 立即进样200 l 以流动相A为流动相进行测定 记录色谱图 另取对照品溶液200 l注入液相色谱仪 以流 动相B为流动相 记录色谱图 按外标法计算 本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得过 0 3 头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查 色谱条件与系统适用性试验 测定头孢呋 辛酯的HPL
6、C系统为ODS分析柱 0 2mol L 磷酸二氢铵 甲醇 62 83 为流动相 流 速1ml min 检测波长278 nm 要求头孢呋 辛酯A B异构体之间 头孢呋辛酯A异构 体与头孢呋辛酯 2 异构体之间的分离度应 大于1 5 理论板数按头孢呋辛酯A异构体 峰计算 应不低于1500 异构体 取本品适量 配制成每 1ml中约含0 25mg的甲 醇 流动相 1 1 的溶液 取20 l注入液相色谱 仪 记录色谱图 B异 构体峰的相对保留时间 约为0 85 A异构体峰 的相对保留时间为1 0 供试品色谱图中A异构 体峰的面积与A B异 构体峰的面积和之比应 为0 48 0 55 40 0 20 60
7、 0302010 时间 min 峰高 mAU 6 5 4 3 2 1 13 954 11 919 2 401 有关物质 取本品适量 精密称定 加流动相制成每1ml 中约含0 2mg的溶液 作为供试品溶液 精密 量取适量 加流动相制成每1ml中约含6 g的溶 液 作为对照溶液 取对照溶液20 l注入液相 色谱仪 调节仪器灵敏度 使主成分峰高约为 记录仪满量程的10 再取供试品溶液和对照 品溶液各20 l 分别注入液相色谱仪 记录色 谱图至主峰保留时间的2 5倍 供试品溶液如显 杂质峰 量取各杂质峰面积的和 不得大于对 照溶液主峰的面积 5 含量测定 1 碘量法 ChP2000 原理 青霉素与头孢
8、菌素本身不与碘反 应 但其碱性降解产物可消耗碘 青霉素族 头孢菌素族 NaOH 水解 4I2 H 8I I2 2Na2S2O3 2NaI Na2S4O6 定量过量 剩余 反应分两步进行 水解反应 按化学计算量进行 氧化 还原反应 无定量关系 受温度 pH值和时间等因素影响 应严格控制反应 条件并采用标准品平行对照测定 空白试验 因样品中杂质会消耗碘 故应作空白 试验 空白试验与经典空白试验不同 加入样品 不加碱 其余试剂 醋酸 盐缓冲液 碘液 硫代硫酸钠 都加 试验条件 I2氧化 弱酸性 pH4 5 碱 I2 IO3 I 酸 某些药物与碘生成复盐沉淀 温度 24 26 温度 38 时未水解 的
9、供试品亦消耗碘 反应时间 20分 钟 20分钟后 耗碘量随 时间的变化较小 特点 灵敏度高 样品 碘 1 8 反应条件 实验操作要求高 含量 1份含量 V对 V对空 V样 V样空 加试剂次序 反应时间 滴定速度相同 含量 对照品 V样空 V样 W对 V对空 V对 W样 2 电位配位滴定法 汞量法 原理 青霉素不与汞盐反应 其碱性降解产物可与 Hg2 络和 Hg 2R SH RS 2Hg 2H 方法说明 a 空白试验与碘量法类似 加样品 不加NaOH b 与碘量法相比 汞量法不需对照试验 3 酸碱滴定法 4 硫醇汞盐法 青霉素 青霉烯酸硫醇汞盐 5 羟肟酸比色法 内酰胺类 红色 6 HPLC法
10、应用广泛 咪唑 HgCl2 max 324 345nm NH2OHH Fe3 阿莫西林克拉维酸钾片 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钠7 8g 加水900 ml溶解 用 磷酸或10mol L氢氧化钠溶液调节pH值至4 4 0 1 加水稀释 至1000ml 甲醇 95 5 为流动相 流速为0 7ml min 检测波长 为220nm 阿莫西林峰与克拉维酸峰的分离度应大于3 5 测定法 取本品10片 置1000ml量瓶中 加水适量 振摇使溶 解 加水稀释至刻度 摇匀 精密量取10ml 置50ml量瓶中 加水稀释至刻度 摇匀 滤过 取续滤液10 l注
11、入液相色 谱仪 记录色谱图 另取阿莫西林对照品与克拉维酸对照品 各适量 加水溶解 制成每1ml中含阿莫西林0 5mg和克拉维 酸0 25mg的混合溶液 同法测定 按外标法以峰面积分别计 算供试品中C16H19N3O5S和C8H9NO5的含量 三 氨基糖苷类 1 化学结构 链霉素 都是以氨基环醇与氨基糖缩合而成的苷 分子结构中都含有多羟基 均为碱性抗生素 2 性质 1 碱性 氨基 临床应用其硫酸盐 2 溶解度 氨基 羟基 水溶性 3 旋光性 糖 多个手性碳 4 稳定性 苷 强酸 碱条件均可水解 3 鉴别 1 茚三酮反应 具羟基胺类 氨基酸性质 链霉素 水和茚三酮 蓝紫色 2 N 甲基葡萄糖胺 E
12、lson Morgan 反应 链霉素 N 甲基葡萄糖胺 红色 水解 对二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮 OH 3 麦芽酚 Maltol 反应 链霉糖特有 链霉素 麦芽酚 紫红色 OH 重排 Fe3 8 羟基喹啉 NaOBr 或 萘酚 OH 水解 4 坂口 Sakaguchi 反应 链霉胍特有 链霉素 链霉胍 橙红 5 硫酸盐反应 4 检查 1 链霉素中链霉素B的检查 来源 发酵中产生 BP 薄层色谱法 杂质对照品法 2 庆大霉素C 组分测定 系统适用性试验 色谱柱 ODS 流动相 H2O HAc MeOH配制的庚烷磺酸 钠溶液 0 2M 必要时调节甲醇的含量 检测波长 330nm 邻苯二甲醛柱前衍生 要求 NC2 2000 C2a峰和C2峰的分离度应 符合要求 重复进样RSD 2 0 5 含量 微生物法 HPLC法等 四 四环素类 1 化学结构 2 性质 1 两性 OH 酸性 N CH3 2 碱性 与酸 碱均可成盐 临床多用盐酸盐 2 旋光性 3 UV和荧光 4 与金属离子络合 酚羟基 烯醇基与Ca2 Mg2 络合显色 5 稳定性 易发生异构化 降解等反应 性质不稳定 弱酸性 pH2 6 A环C 4异构化 差向四环素 酸性 pH 2 C环脱水 脱水四环素 碱性 C环开环 形成内酯 异四环素 AA pH2 0 6 0 差向异构体 DDDCBBCBC 脱水四环素类 异四环素 OH
