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1、1机采血小板悬液在保存过程中凝血因子、生物活性的变化作者：杨江存，李凤琴，李芒会，任健康 【摘要 】 为了研究机采血小板悬液 22 振荡保存不同时间的凝血因子、生物活性的变化，采用 SYSMEX CA-1500 型全自动血凝仪对用 CS-3000plus 血细胞分离机采集的 18 份血小板悬液于22振荡保存条件下，测定 0、12、24、48、72 、96、120 小时 7 个时间段的 FC 和 FC 的活性。结果表明： 机采血小板FC 在 0 时活性为（ 100.5144.02）%，保存 12-120 小时，其活性衰减了 10%-40%；FC 在 0 时活性为（120.9320.50）%，保存
2、 24-120 小时，其活性衰减了 10%-35%。结论： 机采血小板悬液于 22振荡保存时凝血因子、 仍保持有较高的生物学活性。 【关键词】 机采血小板Biological Activities of the Coagulation Factor 、 in Platelet Concentrates Collected by Platelet Apheresis During 2PreservationAbstract The study was to explore the change of coagulation factor and activities in the platele
3、t suspension collected by platelet apheresis during storage at 22. 18 samples of platelet concentrates were collected by the cs-3000 plus and stored at 22 and then FC，FC activities were detected at 0，12，24，48 ，72，96，120 hours respectively by SYSMEX CA-1500. The results showed that FC activity was (1
4、00.51+44.02)% at 0 hour，and then decreased dramatically to 10%-40% of primary level from 12 to 120 hours，while FC activity was (120.9320.50)% at 0 hour and decreased to 10%-35% of primary level from 24 to 120 hours. In conclusion，F and F in the platelet concentrates stored at 22 could keep their bio
5、logical activities at physilogically high levels.Key words plateletapheresis；coagulation factors；F，；近年来，随着成分输血的普及与推广，各种血液成分，特别是血小板的临床用量不断上升，而用血小板分离机采集的血小板悬液以3纯度高、副作用小等优势而受到临床青睐。血小板临床输注是治疗和预防出血性疾病的主要手段，目前国内外以研究机采血小板的功效为主，而对血小板悬液中参与凝血功能的凝血因子活性改变的研究较少。由于血小板与凝血因子是止血的主要成分，观察血小板悬液中不同储存时间的凝血因子的变化对指导临床治疗、选择
6、血液成分具有现实意义。本研究选择凝血因子、为观察指标研究凝血因子的变化，现报道如下。材料和方法主要仪器和试剂SYSMEX CA-1500 型全自动血凝仪，标准血浆（LOT 502585B） 、活化部分凝血活酶时间（APTT ）试剂（LOT 527170） 、乏凝血因子血浆（LOT 503816C） 、乏凝血因子血浆（LOT 500889） ，试剂均为 Dade Behring 公司生产。机采血小板制备用 CS-3000plus 血细胞分离机采集血小板，操作按照收集血小板程序说明书进行。ACD-A 抗凝剂和全血比例 111，处理血量3 500 ml，时间不超过 2 小时，将获得的血小板悬液置入
7、22 血小4板水平振荡保存箱中保存。取样方法将机采后的血小板悬液水平振荡 1 小时，使其充分混匀，然后抽取 50 ml 血小板悬液注入另一无菌血小板储存袋内，22 振荡保存，并于 0、12、24、48、72、96 和 120 小时 7 个时间点抽取血样 0.5 ml 注入 1.0 ml 离心管内，-30冷冻保存。测定时置37迅速将其融化，2 小时内测定完毕。凝血因子测定方法测定严格按照 SYSMEX CA-1500 全自动血凝分析仪操作说明书和试剂要求进行。采用凝结光学检测法原理，对不同的检测项目利用不同稀释度标准血浆凝结时间与相应的凝血因子活性率，取对数后标绘于对数图上，绘制成标准曲线，然后
8、测定受检者血浆凝结时间与相应因子活性率所获数据按内插法带入回归方程，计算受检者血浆中凝血因子活性水平。观察指标是 FC、FC 的活性。FC 及 F C 衰减率的计算见文献1 ，其计算公式为：衰减率= （某时间段因子活性0 时间段因子5活性 /0 时间段因子活性）100%统计学处理所测数据用 xSD 表示，采用配对资料 t 检验。结 果机采血小板悬液不同储存时间凝血因子、活性的变化结果见表 1。0 时 FC 为（100.5144.02）%，存放 12 小时衰减 12%，24 小时衰减 33%，120 小时衰减 44%，12 小时以后各时间点与 0 小时比较， P0.05；0 时 FC 活性为（1
9、20.9320.50）%，12 小时衰减 0.68%，24 小时衰减13%，120 小时衰减 35%，24 小时以后各时间点与 0 小时比较，P0.05。Table 1. Activity changes of F and F in platelet apheresis concentrate during storage periods （略）不同血型机采血小板悬液 F、F活性比较结果见表 2。O 型献血员 FC 为（61.6319.21 ）% ，而A 型和 B 型均值均在 120%以上，说明 O 型 F：C 较其他血型低。Table 2. Comparison between F and
10、F in platelet apheresis concentrate of different blood groups (略)6讨 论血小板与凝血因子是止血的重要成份，在止血、凝血的过程中，既发挥各自的独特作用，又有相互之间多重促进作用，共同完成凝血的全过程2 。机采血小板在治疗与预防出血性疾病中因纯度高（2.51011/ 袋） 、副作用小受到临床欢迎。资料显示，血小板的寿命为 9-12 天3 。血小板由于有易黏附、聚集的特性，因而对其悬液的保存有一定的条件要求，只有在 22水平振荡的条件下血小板的破坏才能减少，F的体外半减期 8-12 小时是全血 ACD保养液 4储存条件检测的数据 4
11、，而 22水平振荡的条件下F的衰减情况如何未见有研究报道。由于血小板与凝血因子的密切关系，研究高纯度血小板在 22水平摇动保存条件下凝血因子 和不同时间段的活性变化，能为指导临床应用血小板及补充凝血因子提供理论依据。本研究显示，血小板悬液于 22水平振荡保存条件下 F 活性衰减情况为：12 小时衰减 12%、24 小时衰减 33%，120 小时衰减44%，与全血 4保存条件下半减期为 8-12 小时结果不相符。这说明，血小板悬液 22水平振荡保存条件下凝血因子 具有较高的凝血活性；而 FC 衰减情况为：12 小时衰减 0.68%，24 小时衰减13%，120 小时衰减 35%，这证明血小板悬液
12、 22 水平振荡保存7条件下凝血因子活性同样有衰减。本研究显示，机采血小板悬液 0 时 FC 活性为（100.5144.02）%，FC 为（120.9320.50）% ，与正常全血分离血浆测试值相同5 ，均值在参考值 70%-150%范围之内，但也有 3 例小于 70%，这可能是个体差异所致，也就是说机器采集的血浆对 FC 和 FC 无影响，这和文献6结果一致。机采血小板悬液临床输注，主要应用于防治血小板减少导致的临床出血。近几年研究结果表明，血小板与凝血因子有着重要的相互关系，血小板表面的膜磷脂酰丝氨酸的外露及血小板膜糖蛋白的存在，成为许多凝血因子激活的场所，为凝血因子、 V 提供了结合活化
13、的平台，进一步放大了凝血因子的活性，促进了凝血过程7 。本研究资料显示，机采血小板悬液 22振动条件下，FC 和 FC 活性与全血分离的新鲜冷冻血浆融化后 4 保存 24 小时活性5相比，具有较高的活性，这是否由于血小板 颗粒含有丰富的纤维蛋白原、因子与因子等多种凝血因子，在血小板活化时释放的结果8或是血小板具有分泌保护 FC 和 FC的物质，有待进一步研究。本研究同时对 18 例机采血小板的 FC 和 FC 活性根据不同血型进行比较，发现 FC 活性在 O 型献血者中只有8（61.6319.21）%，而 A 型和 B 型均值均在 120%以上，说明 O型 FC 较其他血型低，这与文献9 一致
14、；而 FC 活性在各血型间基本无差异。本研究因例数较少，未对资料进行统计学处理，有待扩大例数验证。综上所述，机采血小板悬液在 22振荡保存条件下，不仅可使血小板保持良好集聚活性和止血功效，而且可使 FC 和 FC有较高的生物学活性，这样使临床输注机采血小板悬液以补充血小板时，同时也补充了高活性的凝血因子，从而达到临床止血的目的。【参考文献】1 胡丽华，曹奎杰，陈汉华等.库存全血凝血因子改变的研究. 临床血液学杂志，2000 ；13:21-222 王兆钺. 血小板与凝血因子的相互作用及意义. 中华血液学杂志，2003；25 ：187-1893 杨成民，李家增，季阳. 基础输血学. 北京：中国科学
15、技术出版社，2001：115-11894 柏乃庆. 血液保存 .上海：上海科学技术出版社 . 1981：253-2535 杨江存，李芒会，于青等. 新鲜冰冻血浆融化后不同放置时间凝血因子的变化. 中国输血杂志，2005 ； 3：211-2126 吴征，周静宇，蔡莉. 单采新鲜冰冻血浆含量监测结果分析.临床输血与检验，2003；5：57-587Ahmad SS，London FS，Walsh PN. The assembly of the factor X-activating complex on activated platelets. J Thromb Heamost，2003；1: 48-598 Heemskerrk JW，Bevers EM，Lindhout T. Platelet activation and blood coagulation. Thromb Haemost，2002；88:186-1939Kraaijenhagen RA，Anker PS，Koopman MM，et al. High plasma concentration of factor C: a major risk factor for venous thromboembolism. Blood，1998；Suppl 1: 501a
