《南医大微免实验二汇编》由会员分享，可在线阅读，更多相关《南医大微免实验二汇编（23页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验内容 录像 淋转 E花环 介绍 免疫学检测技术 书229 示教 淋转 E花环 单扩 双扩 火箭电泳 操作 对流免疫电泳 玻片凝集 淋巴细胞转化试验 转化百分率正常值为70 左右 分裂相 即染色体型 母细胞 大4 5倍 核质疏松 有1 3个核仁 核周透明区 胞浆有空泡 过渡型 略大 核质略疏松 着色较淡 小淋巴细胞 核质致密 着色深 胞浆少 示教片 E玫瑰花环试验 T细胞表面有绵羊红细胞受体 可在自然情况 下与绵羊红细胞结合 形成E玫瑰花环 由此 可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞 示教片 一 抗原抗体反应的原理 1 基础 抗原决定簇 抗体的互补决定区 2 特点 特异性 可逆性 比例性 阶段性 二
2、 抗原抗体反应的影响因素 1 电解质 2 温度 3 酸碱度 三 抗原或抗体的检测方法 凝集反应 沉淀反应 免疫标记技术 凝集反应 概念 抗原 抗体 凝集团块 直接凝集 颗粒性抗原 抗体 凝集团块 玻片法 试管法 间接凝集 可溶性抗原包被于载体 抗体 凝集团块 反向间接凝集 抗体包被于载体 抗原 凝集团块 协同凝集 抗体结合金葡菌SPA 抗原 凝集团块 沉淀反应 概念 可溶性抗原 抗体 沉淀物 单向琼脂扩散 火箭电泳 抗原定量试验 抗体琼脂板 抗原扩散 自由 定向 双向琼脂扩散 对流免疫电泳 抗原分析 抗原定性试验等 抗原 抗体同时扩散 自由 定向 单向琼脂扩散 单向琼脂扩散试验是一种定量试验
3、将一定量已知抗体混于琼脂中 制板 在适当 位置打孔 将抗原加入孔中扩散 与板中抗体 相遇 在比例合适处呈现白色沉淀环 环的直 径与抗原含量成正比 主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量 单向定量免疫电泳 火箭电泳 将一定量已知抗体混于琼脂中 制板 在板的一端 打一排小孔 加入待检样品 置于阴极端进行电泳 抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥 形沉淀峰 状如火箭 称火箭电泳 沉淀峰的高低 与抗原的浓度成正比 敏感度与单扩相仿 但需时较短 双向琼脂扩散 在琼脂板上打孔 抗原和抗体分别加到相 应孔中 二者自由向四周扩散 在比例合 适处形成沉淀线 若同时含有若干对抗原 抗体系统 可出现多条沉淀
4、线 可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分 对流免疫电泳 w材料 n电泳仪 n缓冲液 n琼脂板1块 2人 打孔器2个 组 n抗AFP血清 已知Ab nAFP阳性血清 阳性Ag n对照阴性血清 阴性Ag n待检血清 标本1 未知Ag 标本2 未知Ag 对流免疫电泳 打孔 金属打孔器打两排孔 抗原孔与抗体孔间距 离为4毫米至5毫米 加样 抗AFP血清加于抗体孔内 病人血清 AFP 阳性血清 阴性对照血清分别加于抗原孔内 电泳 将琼脂板置电泳槽 抗原孔置阴极端 板两 端分别用湿纱布与缓冲液相连 通电30分钟 观察 在相应抗原 抗体孔间出现沉淀线 对流免疫电泳 w方法 打孔 加样 电泳35min AgAbAgAb 4 5mm4 5mm 5mm 5mm 阴性 阳性 标1 阴性 标2 阳性 对流免疫电泳 w结果判定 在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线 直接凝集反应 玻片凝集 w材料 玻片1张 1人 1号 2号菌落 生理盐 水 诊断血清 接种环 w方法 取生理盐水3 4环 菌落1 2环 后加 血清2环 轻摇玻片 1 2分钟后观察 w结果判定 出现乳白色凝集块属阳性反应 玻片扔在后面的玻片缸里 消毒水泡手 生理盐水 1号菌落 生理盐水 1号菌落 诊断血清 实验报告 五张图 淋转 E花环 单扩 双扩 火箭电泳 原理及结果 对流免疫电泳 玻片凝集 结果可用图示
