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1、1星形细胞瘤中 FHIT、PCNA 蛋白表达及意义作者：席峥席焕久 高志安孙梅珍王红云【摘要 】 目的 研究人脑星形细胞瘤中 FHIT、PCNA 蛋白的差异表达，探讨它们之间、它们与病理分级及复发之间的关系。方法 应用免疫组化 SP 法检测了 50 例星形细胞瘤中不同级别的FHIT、PCNA 蛋白的表达水平，以 10 例非肿瘤脑组织作对照。结果 非肿瘤脑组织 FHIT、PCNA 蛋白阳性表达率分别为 100%、0，星形细胞瘤中 FHIT、PCNA 蛋白阳性表达率分别为 40%、86%；尽管在星形细胞瘤中 FHIT、PCNA 蛋白表达总体差异有显著性（P0.05） ，级与 级、级与级间比较差异有
2、显著性（P0.05） ；经统计学分析 FHIT、PCNA 蛋白呈显著负相关（P0.01） ；8 例复发病例中复发前后 FHIT、PCNA 蛋白表达差异有显著性（P0.05） 。结论 星形细胞瘤中 FHIT、PCNA 蛋白表达之间的显著负相关，提示 FHIT 蛋白可能对细胞增殖具有负性调控作用。FHIT、PCNA 蛋白的表达水平可能与星形细胞瘤的病理分级和复发有关，推测 FHIT、PCNA 蛋白的表达可能与星形细胞瘤的肿瘤侵袭性相关。 【关键词】 星形细胞瘤; FHIT 蛋白; PCNA 蛋白2Expression and significance of FHIT and PCNA protei
3、ns in astrocytoma【Abstract】 Objective To study the expression of FHIT and PCNA proteins in human brain astrocytoma; To investigate the relationship between the expression of FHIT and PCNA proteins and pathological grading and recurrence in astrocytoma. Methods Immunohistochemistry staining for FHIT
4、and PCNA proteins were performed in 50 cases of astrocytoma and 10 cases of non-tumor brain tissues. Results The total positive rate of FHIT and PCNA proteins were 100% and 0 in non-tumor brain tissues; and 40% and 86% in astrocytoma respectively; Though total variance of FHIT and PCNA proteins expr
5、ession among tumor grades wasremarkable (P0.05) , the significant differencesstatistically of FHIT and PCNA proteins were observed in grade-grade,;and grade-grade,(P0.05); The expression of FHIT and PCNA proteins in astrocytoma were significantly negative correlated(P0.01), the significant differenc
6、es statistically of FHIT and PCNA 3proteins were observed in 8 cases of recurrence (P0.05). Conclusion In astrocytoma. there are significantly inverse relations between the expression of FHIT and PCNA proteins. It is suggested that FHIT protein may play a role in the negative regulation of cell prol
7、iferation. The expression of FHIT and PCNA proteins in astrocytoma were significantly correlated with pathological grading and relapse likely. Abnormal expression of FHIT and PCNA proteins in astrocytoma may relate to tumor invasive.【Key words】 astrocytoma；FHIT protein；PCNA protein1996 年 Ohta1等人利用外显
8、子捕获法（exon trapping）确定并克隆出 FHIT 基因。该基因定位在 3 号染色体短臂 3p14.2 区域，跨越人类染色体脆性部位 FRA3B，并含有编码组氨酸三联体的功能区，故命名为脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad, FHIT） 。FHIT 基因存在于大多数正常组织中，许多恶性肿瘤存在该基因异常。研究 FHIT 基因在各种肿瘤组织中的改变，确认其是否为抑癌基因是近年来分子肿瘤学研究的热点之一。Ji等2发现用 FHIT 的腺病毒转导的肺癌细胞系有很明显的细胞生长抑制和细胞凋亡的增加。同时，FHIT 蛋白表达增加与细胞增生减4少和凋亡活动增加相一致
9、3 。但此基因在肿瘤细胞增殖中的作用，目前国内外相关文献报道十分有限。本文研究 FHIT、PCNA 蛋白表达之间的关系，以及它们与星形细胞瘤各种病理级别和复发的关系，旨在探讨星形细胞瘤的 FHIT 蛋白的表达程度与肿瘤细胞过度增殖之间及复发的关系，为进一步了解星形细胞瘤的生物学特性，判断肿瘤的恶性程度和评估患者预后复发提供参考指标和实验依据。1 资料与方法1.1 一般资料北京市神经外科研究所 19981999 年 6 月期间收治的随访资料完整的 50 例星形细胞瘤患者。级 9 例，级 18 例，级23 例。经手术病理证实,术前均未采取放疗、化疗和免疫治疗。 10例非肿瘤脑组织作为对照。标本经常
10、规处理后 5m 厚度连续切片，行 HE 染色和免疫组化染色。1.2 主要试剂及仪器兔抗人多克隆抗体 FHIT（工作液） ，鼠抗人单克隆抗体PCNA（PC10，工作液） ，SP 试剂盒等均购自北京中山生物技术有限公司。其他为免疫组化常用和必备的试剂和主要仪器。51.3 实验方法常规免疫组化染色过程。细胞浆出现棕黄色颗粒为 FHIT 蛋白表达阳性。参照 Greenspan 等的半定量法对染色强度及阳性细胞百分率进行评分，评分为 13 分判为低表达（减弱或缺失） ，4分判为表达正常4 。细胞核出现棕黄色颗粒为 PCNA 蛋白表达阳性（反应性星形细胞、血管周围淋巴细胞、血管内皮细胞不列入计数） ，用
11、3 个参数的半定量法对染色强度及阳性细胞百分率进行评分，评分3 分为阴性，3 分为阳性5 。1.4 数据处理采用 SPSS 统计软件。计数资料应用 2 检验、Fisher 精确概率法、计量资料比较用 LSD 方差分析，相关用等级相关 (Kendall和 Spearman) 检验。2 结果2.1 FHIT、PCNA 蛋白表达与组别的关系如图 13 所示随着星形细胞瘤的病理级别升高， FHIT 蛋白6的阳性表达率降低, PCNA 蛋白的阳性表达率增高。各级别星形细胞瘤 FHIT、PCNA 蛋白表达与对照组比较具有统计学意义（P0.05） ，级与 级、级与级间具有统计学意义（P0.05） 。 2.2
12、 FHIT 蛋白表达与 PCNA 蛋白表达的关系FHIT 蛋白表达阳性的 20 例中有 15 例同时有 PCNA 蛋白的高表达，而 FHIT 蛋白表达阴性的 30 例中，PCNA 蛋白表达阴性的有 2 例, 经统计学分析（Crosstabulation Correlations）两者呈显著相关性（P0.01） ， r= 0.493(Kendall 检验)，r= 0.563(Spearman检验)，即呈显著负相关。提示 FHIT 蛋白可能具有对细胞增殖的负性调控作用。2.3 星形细胞瘤中 FHIT、 PCNA 蛋白表达与复发的关系8 例复发星形细胞瘤中复发前后 FHIT、 PCNA 蛋白表达情况
13、见表 1。 而未复发的 42 例中 FHIT 蛋白阴性表达为 15 例， PCNA 蛋白阳性表达为 39 例， 结果提示复发后 FHIT 蛋白阳性表达率降低、 PCNA 蛋白阳性表达率增高， 经统计学分析P0.05， 推测 FHIT、 PCNA 蛋白的表达与复发有关。表 1 星形细胞瘤中 FHIT、PCNA 蛋白表达与复发的关系（略）73 讨论星形细胞瘤是常见的中枢神经系统肿瘤，它的病理分级是以肿瘤组织内从高分化到低分化过程的不同阶段人为划分，并以不同级别来估计临床经过及预后。但是，单以形态学为依据的分级标准不够准确、客观，某些交界性的病例难以确切分级；且由于肿瘤本身的异质性，取材部位的不同可
14、能导致诊断上的误差。病理学分级诊断不能完全反映肿瘤的恶性程度，而肿瘤细胞增殖活性则能反映肿瘤的生物学特性及预后6 。Ohta 等1 首次发现一种新的肿瘤抑制基因，即 FHIT 基因，它在肿瘤发生发展中起重要作用。FHIT 基因全长 1.1Mb，包含 FRA3B 脆性位点7 ，编码分子量为 16.8KD 的蛋白质，即FHIT 蛋白。FHIT 基因通过其编码的蛋白质产物参与细胞周期的调节8 。FHIT 蛋白在肿瘤中的作用尚不完全清楚，可能因其蛋白质水解酶活性丧失将导致 Ap3A 或类似物在体内积累，刺激 DNA 聚合酶合成 DNA，使细胞通过细胞周期 G1 期检测点进入 S 期，从而促进细胞增殖而
15、启动细胞的恶性转化过程。同时，Ap3A 水平升高增强了生长信号传导途径，阻断抑制途径或凋亡通道导致肿瘤产生。本文实验结果显示随着星形细胞瘤恶性程度的增加，FHIT 蛋白的阳性表达率降低。经统计学处理星形细胞瘤级与级、级与级8间差异有统计学意义，提示星形细胞瘤中可能存在 FHIT 基因异常或基因表达异常，其异常表达可能与星形细胞瘤的发生发展有关。细胞的增殖失控是恶性肿瘤的重要特征之一9 。PCNA 是真核细胞 DNA 合成必不可少的一种 36kDa 核蛋白，PCNA 的表达和合成与细胞的增殖周期相关。新近研究证实它是 DNA 聚合酶的辅助蛋白，参与细胞增殖过程中 DNA 的合成，它在 G1 期开始增加，S期含量最高，G2 期开始下降，M 期含量最低。对 DNA 复制的调节起着重要作用，其含量和表达程度反映了细胞的增殖状态，其过度表达导致细胞增殖失控，是肿瘤恶性程度的重要指标10 。实验结果显示随着星形细胞瘤恶性程度的增加，PCNA 蛋白的阳性表达率升高。提示细胞在受到各种致癌因素作用后 PCNA 出现过表达，DNA 的合成量增加，细胞增殖活性增高，最终导致癌变，与有关文献报道相似11 。经统计学处理星形细胞瘤 级与级、级与级间差异有统计学意义，表明星形细胞瘤中恶性程度越高，肿瘤细胞的增殖活性越高。提示了 PCNA 蛋白可能与星形细胞瘤的发生发展密切相关。星形细胞瘤的级和级
