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1、免疫测定室内质控血清的应用 张 瑞 卫生部临床检验中心 免疫测定用室内质控血清的调整 随着临床实验室检验水平的不断提 高和检测试剂质量的不断改进 原有的室 内质控物已经不能满足室内质控工作的需 要 因此部中心对免疫测定用室内质控血 清的含量进行了调整 同时改进了包装 2 针对的检测项目 HBsAg 抗HCV 抗HIV 梅毒螺旋体抗体 提供不同含量的质控物是为了实验室根据不同试 剂的检测值选择合适的质控物 使质控物的检测 值 S CO值 在1 5 4之间 3 HBsAg质控血清定值的调整 HBsAg定值单位改变 2004年 WHO研制了第二代HBsAg标准物质 并将 定值单位从ng ml改为IU
2、 ml 现1IU ml 0 5ng ml 定值 调整前 定值 调整后 调整原因 0 2IU ml用于一些灵敏度较高的 试剂0 5IU ml 0 5ng ml1IU ml 1ng ml 2IU ml 2ng ml 4IU ml 5ng ml 浓度较高 1万ng ml 钩状效应 4 HBsAg室内质控品的选用 定值适用试剂 0 2IU mlMurex 生物梅里埃试剂 0 5IU ml Ortho Bio Rad试剂 雅培i2000和 Axsym检测系统和配套试剂 1IU ml 国产试剂盒 万泰 新创 科华 血站和医院用 2IU ml 国产试剂盒 万泰 新创 科华 医院用 4IU ml 国产试剂盒
3、万泰 新创 科华 医院用 5 抗HCV质控血清定值的调整及选用 定值 调整前 定值 调整后 适用试剂 1NCU ml 国产试剂盒 万泰 新创 科华 丽珠 和 DiaSorin的试剂 1NCU ml2NCU mlMurex Ortho等试剂 2NCU ml 4NCU ml 雅培i2000和Axsym检测系 统和配套试剂 现1NCU ml 0 5NCU ml 6 抗HIV质控血清定值的调整及选用 定值 调整前 定值 调整后 适用试剂 1NCU ml 国产试剂盒 万泰 新创 科华 丽珠 1NCU ml2NCU mlBio Rad等试剂 2NCU ml 4NCU ml进口试剂及配套仪器 4NCU ml
4、8NCU ml进口试剂及配套仪器 现1NCU ml 0 5NCU ml 1NCU ml的确定 参考国际单位定值方法 采用5种或以上试剂盒 结果 63 的试剂盒 按泊松分布计算 检测结果为阳性的值为1NCU ml 7 梅毒螺旋体抗体定值的调整及选用 定值 调整前 定值 调整后 适用试剂 1NCU ml 特异 国产试剂盒 2NCU ml 特异 国产试剂盒 2NCU ml 特异 4NCU ml 特异 进口试剂及 或配套仪器 2NCU ml 非特异 2NCU ml 非特异 RPR TRUST 现1NCU ml 0 25NCU ml 8 注意事项 室内质控物仅用于相应项目的室内质 量控制 不能用于阴阳性
5、结果的判断 定值质控物不适合评价试剂盒整体性 能是否合格 但可用于试剂的批内 批 间变异和测定下限的评价质检 如果 需要对试剂进行比较评价和全面质检 请选用相应项目的临床考核血清盘 9 临床考核血清盘 项目 规格支数 套 HBsAg0 5ml 支40 抗HCV0 25ml 支40 梅毒螺旋体抗体 0 5ml 支40 10 HBsAg血清盘 l灵敏度 l特异性 lHBsAg变异的检测能力 如G145R等 lHook效应导致的假阴性 11 样本 编号 含量 IU ml A S CO B S CO C S CO D S CO E S CO 16 80 20 40 49 57 3 28 101 00
6、70 49 814 9 10 200000040 837 636 227 124 1 16约160000040 043 941 047 135 0 8阴性 20 91 50 40 70 7 19阴性 9 47 719 20 40 4 27阴性 16 60 30 80 50 6 360 5 1 01 61 62 97 38 5 370 5 1 01 11 33 03 86 8 38约0 20 60 81 82 43 9 390 2 0 50 20 60 91 13 0 HBsAg血清盘 12 抗HCV血清盘 l不同试剂厂家的ELISA试剂盒所用包被抗原的差异 目前抗HCV检测ELISA试剂盒均采
7、用HCV的基因工程或合成多肽 抗原 核心区 NS3 NS4和NS5等 包被固相 以间接法进行 测定 上述HCV抗原的组合 来源及用量等方面的差异而造成 检测结果不一致 l抗HCV ELISA出现假阳性的主要原因有 1 类风湿因子 RF 的干扰 2 高免疫球蛋白血症 3 标本中超氧化物歧化酶 SOD 的干扰 4 用于固相包被的HCV基因工程抗原不纯 13 抗HCV血清盘 样本 编号 ABCDEFG RIBA NS4NS3CNS5 281 221 870 650 780 770 67 0 3 337 8311 96 324 286 24 760 62 340 920 680 610 841 140
8、 65 0 3 356 414 111 862 992 812 040 34 381 62 061 860 681 682 051 38 152 42 0 820 550 65 0 5 0 5 0 5 14 检测方法 1 检测非特异性抗体 使用类脂质抗 原的血清学试验 RPR TRUST 2 检测特异性抗体 使用密螺旋体抗 原的血清学试验 FTA ABS TPHA TPPA ELISA WB 梅毒螺旋体抗体血清盘 15 梅毒螺旋体抗体血清盘 TP14TP17TP45TP47EUIgMEUIgG A OD值值 B C OD值值 D OD值值 RP R 胶体金 1 0 090 7363 19927
9、 353 7763 604 4 0 3350 964 04127 612 1692 006 7 0 2561 120 65431 241 2150 978 23 0 2251 133 94830 241 8971 367 33 0 1600 082 1 329 0 90 0 027 0 662 Hook效应 16 原倍1 101 201 401 801 160 13 3572 9462 0991 4280 9360 490 42 2772 2561 9701 6151 0600 603 71 7033 0662 9383 0233 1252 289 232 3603 0892 8842 975
10、2 2581 481 梅毒螺旋体抗体血清盘 1 4 7 23号血清稀释结果显示存在hook效应 17 IgM抗体漏检 梅毒螺旋体抗体血清盘 TP14TP17TP45TP47 EUIg M EUIgG A OD值值 B C OD值值 D OD值值 RPR胶体金 1 0 090 7363 19927 353 7763 604 4 0 3350 964 04127 612 1692 006 7 0 2561 120 65431 241 2150 978 23 0 2251 133 94830 241 8971 367 33 0 1600 082 1 329 0 90 0 027 0 662 18 使用方法 质控血清都经过灭活处理 但仍应按照有潜在生物传 染性样本对待 HBsAg 抗HCV 抗HIV 梅毒螺旋体抗体的质控血清加 样时按待测病人原始样本对待 依照试剂盒说明书进 行操作 实验室收到血清后应将血清保存在 18 以下 保质期 为1年 使用时将血清在室温复融 应注意待血清完全 融化后平衡至室温并充分混匀 复融后的血清如果当 日未使用完且无污染 可保存在2 8 限1周内用完 避免反复冻融和重新分装质控血清样本 19 谢 谢 20
