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1、实验五实验五 酵母的显微镜直接计数酵母的显微镜直接计数 1 1 目的要求目的要求 1 了解血球计数板的结构及计数原 理 2 掌握使用血球计数板进行微生物 计数的方法 2 2 实验原理实验原理 测定微生物数量方法很多 通常采用的有显 微镜直接计数法 平板计数法和光电比浊计数法 显微镜直接计数法 将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具 有确定面积和容积的载玻片上 又称血球计数板 于显微镜下直接计数的一种简便 快速 直观 的方法 3 3 血球计数板的构造血球计数板的构造 4 4 血球计数板的计算方法血球计数板的计算方法 血球计数板上刻有一长宽各为1毫米的方形大格 其体积 为0 1mm3 计数板有两种
2、刻度 一种是每大格分为16个 中格 而每中格又分25个小格 每大格为16 25小格 400小格 而另一种 则是每大格分为25个中格 而每 中格又分为16个小格 则每大格为25 16 400小格 计 数板上的标识为XB K25 计数时 如果使用16格 25格规格的计数室 要按 对角线位 取左上 右上 左下 右下4个中格 即100 个小格 的酵母菌数 如果使用25 格 16格规格的计数 室除了取其4个对角方位外 还需再数中央的一个中格 即 80个小方格 的酵母菌数 6 当遇到位于大格线上的酵母菌 一般只计数大方格的 上方和左方线上的酵母细胞 或只计数下方和右方线上的 酵母细胞 5 5 计数公式计数
3、公式 1 16 25的血球计数板计算公式 酵母细胞数 ml 100小格内酵母细胞个数 100 400 10000 稀释倍数 2 25x16的血球计数板计算公式 酵母细胞数 ml 80小格内酵母细胞个数 80 400 10000 稀释倍数 6 6 实验器材实验器材 显微镜 血球计数板 酵母菌液 盖玻 片 吸管 吸水纸 7 7 操作步骤操作步骤 1 镜检计数室 先检查计数板是否有破损 然后对计数板 进行镜检 若有污物 则用自来水冲洗 用电吹风吹 干后才能进行计数 并在显微镜下看清计数板结构 2 加 样 品 在血球计数板上盖上盖玻片 用滴管将摇匀 的酵母菌液由盖玻片边的小槽滴一小滴 不宜过多 让菌液
4、自行进入计数室 一般计数室均能充满菌液 注意不可有气泡产生 3 计 数 静置几分钟后将血球计数板置于载物台上 先用低倍镜找到计数室的位置 再换高倍镜计数 25 个中格的取计数板四角和中间位置的五个中方格计菌 数 重复计2 3次 取其平均值 按公式计算每毫升酵 母菌液中菌体的个数 4 清洗血球计数板 计数后将血球计数板用自来水冲洗干 净 勿用硬物刷 吹干后镜检 若不干净 则必须重 复洗涤干净为止 8 8 注意事项注意事项 1 加样时先摇匀菌液 计数室中不可有气泡产生 2 菌液浓度以每小格有5 10个菌体为宜 3 计数时 格线上的菌体只计左上或右下 4 如遇酵母出芽 芽体大小达到母细胞一半及以上时作为2 个菌体计算 5 清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗 在水龙头上用水注 清洗 直到洗净为止 9 9 结果记录结果记录 第一个 中格 第二个 中格 第三个 中格 第四个 中格 第五个 中格 第一次 测 定 第二次 测 定 第三次 测 定 平 均 1010 思思 考考 题题 1 直接计数法的原理与优缺点 2 影响本实验结果的误差来源并提出改进措施 1111 按要求完成实验报告按要求完成实验报告 值日生做好值日工作值日生做好值日工作 1212 1313
