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1、1人活体小肠移植受体血清 IL8 与排斥反应相关作者：董光龙王为忠吴国生宋维亮季刚李琦金伯泉 【关键词】活体供者 关键词: 活体供者;小肠/移植; 白细胞介素 8;移植物排斥 摘要: 目的观察我国首例活体部分小肠移植受体围手术期趋化因子 IL-8 的变化及其与移植物缺血再灌注损伤和急性排斥反应的相关性. 方法双抗夹心 ELISA 法测定受体术前及术后 1140d 血清 IL-8 动态水平.结果受体血清 IL-8 水平在术后 1d 显著升高（2.44gL-1vs0.26gL-1） ，且于次日迅速下降（1.70gL-1 ） ，术后 4d 达术前水平.血清 IL-8 的第 2 个高峰出现于术后 67
2、d 发生移植物急性排斥反应时（1.47gL-1 ） ，但高度较第 1 次低，恢复较第 1 次慢，在术后 96d 达术前水平.结论在人活体部分小肠移植中，血清 IL-8 水平与移植物缺血再灌注损伤和急性排斥反应密切相关，可作为重要的小肠移植物急性排斥反应的信号之一. Keywords:livingdonnors;intestine，small/transplantation;interleukin-8;graftrejection Abstract:AIMToinvestigatetheperioperativeserumlev-2elsofIL-8inthefirstcaseofliving-
3、relatedsmallboweltransplantationinChinaandtostudytheinterrelationshipofthechangesinserumIL-8levelwithischemicandreperfusiveinjuryandwiththeacutesmallbowelallograftrejection.METHODSDynamicserumlevelsofIL-8ofrecipientwereanalyzedbyasolid-phasedoubleligandELISAmethodoncepreoperationandseveraltimesdurin
4、g1140dpostoperation.RESULTSRecipientsIL-8serumlevelincreasedon1postoperatiorday（POD） （2.44gL-1vs0.26gL-1） ，de-creasedrapidlythenextday（1.70gL-1） ，andreturnedtothelevelofpreoperationat4POD.Itssecondpeakleveloc-curredon67PODwithacutesmallbowelallograftrejection（1.47gL-1）.Thenitdecreasedslowlyandreturn
5、edtothelevelofpreoperationon96POD.CONCLUSIONInthehu-manliving-relatedsmallboweltransplantation，thereisaclosecorrelationofserumIL-8levelswithischemicandreperfusiveinjuryandwiththeacutesmallbowelallograftre-jection.Itcouldberegardedasoneofthemostimportantsignsofacutesmallbowelallograftrejection. 30 引言
6、 血浆、血清、尿或胆汁的一些细胞因子水平已被作为同种移植排斥反应和严重缺血再灌注损伤早期诊断的标志1 ，如 IL-1，IL-6，TNF- 等.IL-8 作为一种趋化性细胞因子，是宿主对创伤和感染反应的介质2-4 ，通过受体吸引中性粒细胞到感染或创伤的部位5.在成人呼吸窘迫综合症（adultrespiratorydis-tresssyndrome，ARDS ）的肠相关淋巴组织（ bowel-associatedlymphoidtissue，BALT） ，同种移植物的再灌注损伤，类风湿关节炎，输血溶血和感染的病例，血清中 IL-8 浓度显著升高2，6-8 .在人活体部分小肠移植后用 ELISA 法
7、对 IL-8 的测定没有报道.我院于 1999-05-20 成功地进行了我国首例人活体部分小肠移植术，现已无并发症存活 1a.我们研究了血清 IL-8 浓度与人活体部分小肠移植缺血再灌注损伤和排斥的相关性. 1 对象和方法 1.1 对象男，18 岁. 因肠扭转，肠坏死，于 1998-09 在当地医院行小肠大部切除，残余空肠 40cm，术后每日腹泻 10 余次，均为未消化食物.1999-03-10 入我院，身高 182cm，体质量 35kg，严重营养不良，诊断为短肠综合征.供体，男，44 岁，健康（患者之4父）. 供受体血型均为 O 型，HLA 及 DR 配型均为半相符 .经充分的术前准备，于
8、1999-05-20 行供体末段回肠的异位活体部分小肠移植术. 移植肠动静脉分别与受体肾下腹主动脉和下腔静脉端侧吻合，植入供体肠 150cm.供体肠远侧切缘距回盲部 20cm.受体距回盲部15cm 切断残留空肠，移植肠近端与受体空肠行端端吻合，距移植肠远端 10cm 行残留肠和移植肠端侧吻合，移植肠远端 10cm 旷置造瘘，起观察窗作用.行胃造瘘和空肠造瘘.开放血流后移植肠即转红润，5min 后恢复节段性肠蠕动.手术时间共 10h，热缺血 1min，冷缺血 215min. 受体术前 1d 口服抗免疫排斥药物骁悉（MMF）2g.手术开始，静脉滴注甲基强的松龙 500mg，开放血流时静滴前列腺素E
9、1（PGE1）100g， FK5065mg 及甲基强的松龙 500mg.FK506质量浓度维持在 2535gL-1.免疫排斥监测 :严密观察移植肠造瘘口颜色，记录流出肠液的性质和量.于术后定期行经肠造口内镜检查及粘膜活检9.术后 30d 停用骁悉并逐渐减少其他免疫抑制剂用量. 于术后 60d 出现移植肠造口排出物增多，术后 66d 达1200mL，术后 67d 内镜检查见:移植肠节段性充血，水肿，肠粘膜组织脆，易出血.大量沿肠粘膜皱襞分布之浅表溃疡，少量出血点;肠腔水肿，在镜下呈大量白色反光点.病理学检查提示:病变处局部糜烂，部分上皮萎缩呈矮柱状，杯状细胞变小或消失，固有层普遍水肿，固有层及粘
10、膜层有中性粒细胞、浆细胞及淋巴细胞浸润，血管腔内中性粒细胞增多.临床诊断为急性移植肠排斥反应（Fig1，2）. 处理:5甲基强的松龙 500mg，1 次 d-1，3d ，FK5067mg，2 次 d-1，保持血浓度在 2025gL-1，骁悉 2gd-1，减少肠内营养.术后 70d镜检提示，浅表溃疡已基本愈合，充血，水肿，糜烂已显著减少（Fig3）. 骁悉减量.D-木糖吸收试验:30.7%.术后 82d 镜检已为基本正常肠粘膜. 图 1图 3略 1.2 方法用本校免疫学教研室双抗体夹心法 ELISA 试剂盒检测活体小肠移植患者不同时期血清 IL-8 水平 .采用两株识别 IL-8 分子不同表位的
11、单克隆抗体（mAb） ，分别用作包被 mAb 和制备mAb 酶结合物，并催化底物 ABTS 显色，根据标准 A（OD）值绘制标准曲线，再确定待检标本中 IL-8 的含量 . 2 结果 患者术前 IL-8 质量浓度为 0.26gL-1.术后 1d 出现第 1 个IL-8 血清质量浓度高峰（2.44gL-1） ，此后迅速下降，在术后 4d降至术前水平.而第 2 个 IL-8 血清浓度高峰出现在发生急性排斥反应时（术后 67d） ，但峰值（1.47gL-1 ）较术后第 1 个 IL-8 高峰显著降低，仅为其 60%.排斥反应控制后缓慢下降，在术后 96d 降至术前水平（Fig4）. 63 讨论 小肠
12、含有大量的淋巴组织，属高免疫源性器官.因此，小肠移植后常发生强烈的排斥反应，出现发热、恶心、呕吐、腹痛、肠造口排出量增加等.通过造口的内镜检查可见粘膜充血、水肿、肠壁变脆、糜烂和溃疡形成及肠蠕动消失等，特别是溃疡形成意味着排斥反应已开始.病理学改变因病变程度不同而异，但内镜下钳区取的粘膜组织不能全面反映排斥情况，且不具有特征性，确定排斥反应诊断须获取肠壁全层组织10.因此，结合内镜和病理学的血清学诊断研究十分重要. 图 4略 趋化因子是将白细胞吸引到炎症局部的重要介质.IL-8 作为中性粒细胞特异的趋化因子11 ，可由多种细胞产生，包括单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞和表皮细胞等.IL
13、-8 的生物学活性主要有:趋化和激活中性粒细胞.IL-8 的这种效应无种族特异性;趋化嗜碱性粒细胞，并刺激其释放组胺，与速发型超敏反应有关.此外，还可刺激 GM-CSF 或 IL-5 预处理的嗜酸性粒细胞的脱颗粒作用;趋化 T 细胞.可趋化部分静止的 CD 4+或 CD8+T 细胞，且这种作用需单核细胞同时存在.IL-8 还可趋化 IL-2 活化的 NK 细胞 ;IL-8 是角化细胞的复合促有丝分裂原，也7是黑色素瘤细胞的自分泌生长因子.移植物排斥时特征性的细胞浸润主要包含单核细胞/巨噬细胞和 T 淋巴细胞，所有这些细胞均分泌IL-8.但 IL-8 与移植物缺血再灌注损伤和移植排斥的相关性仍存
14、在不同的实验和临床研究结果.一些实验和临床研究提示 1，12 ，在大鼠原位肝移植研究中，血清 IL-8 质量浓度在重度（ACI-LEW）及中度（ BN-LEW）排斥反应和再灌注损伤时显著升高; 在人肝移植中发现，IL-6 和 IL-8 的水平在早期移植物功能不佳的患者持续升高，提出系列测定围手术期这些细胞因子对于监测移植物功能是有用的.而在另一些实验和临床研究结果中13-16 ，用免疫组化和 ELISA 法在肾移植物研究中显示:虽然局部、血清及尿中IL-8 在大多数显示急性排斥反应患者的样本中测到，且在抗排斥反应治疗后显著降低，但患者尿 IL-8 水平在全部尿路感染（ UTI）患者中同样显著升
15、高而在抗细菌治疗后降低，表明 UTI 或（和）排斥反应患者的细胞因子在各组患者无显著不同，提示局部、血清或尿IL-8 水平的升高对肾移植急性细胞排斥的诊断并不肯定;在原位肝移植（OLTx）患者其血清 IL-8 在急性排斥、细菌感染和 CMV 感染时均显示 IL-8 质量浓度的显著升高，提示其对 OLTx 时排斥反应的诊断亦无特异性. 我们的研究显示，IL-8 升高的第 1 个高峰在小肠移植术后 1d，这与移植物的冷缺血时间较长及再灌注损伤相关（术中热缺血1min，冷缺血 215min） 17，18. 这种 IL-8 的升高在 2d 开始迅速下降，于术后 4d 达术前水平 .第 2 个高峰出现在
16、术后 67d，即出8现急性排斥反应的当天，IL-8 质量浓度较缺血再灌注损伤所致的高峰低，但下降速度缓慢，在控制排斥反应后 17d 才达术前水平.由于本例活体小肠移植患者未发生感染，故无法了解感染时可能发生的IL-8 的变化. 结合文献，由于局部缺血再灌注损伤和移植物发生排斥反应时发生嗜中性粒细胞的局部募集和浸润，同时 IL-8 是嗜中性粒细胞的趋化因子，因此我们认为，在人活体小肠移植中，血清 IL-8水平的显著升高与缺血再灌注损伤和急性排斥反应密切相关，可作为重要的预警性指标，但要作为诊断急性排斥反应的特异性确切指标还应结合造瘘口活检. 参考文献: 1YagihashiA，ZouXM，HirataK，AsanumaK，TsurrumaT，MatunoT，YamaguchiH，YamashiroK ，KoideS ，TerimotoK.EvaluationofserumIL-8concentrati
