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1、1Cystatin C 在诊断肾功能损害中的应用及其新进展【关键词】 胱蛋白酶抑制剂 C；肾功能损害；诊断1 肾功能损害的常用测定指标肾小球的主要功能是滤过作用，临床上常用的测定肾小球滤过功能的指标有血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)、血 2 微球蛋白 (2M)和视黄醇结合蛋白(RBP). 这些指标虽然在临床上广泛应用，但它们仍有一定的局限性，且常受一些肾性和肾外因素的影响，如 BUN 在肾小球功能轻度受损时可无变化，且受蛋白质摄入量和体内蛋白质分解代谢的影响；Scr 也不能作为肾脏损害的早期指标，其水平受肌肉量，肉食的摄入量和体内代谢水平的影响；Ccr 是反映
2、肾小球滤过功能的敏感指标，当 Ccr 下降到 80%以下时，Scr 和 BUN 可正常，但肾小管分泌少量肌酐，会使测定结果偏高，在病理状态下其生成速度也会增快，使测定结果不准确. 近年来，同位素标记物清除率的测定方法已被广泛使用，但由于放射缘故，使其临床应用受限. 国外报道较多的有非粒子造影剂 iohexol（碘海醇）血浆清除率测定，其准确性和同位素相当，是目前较理想的方法，但以上方法需要留取尿液，并且价格昂贵，需要一定的仪器设备，难以作为常规测定指标.22 一种新的肾功能测定指标胱蛋白酶抑制剂 C(Cystatin C)Cystatin C 是一种非糖基化的碱性蛋白质，主要分布于细胞外液中，
3、脑脊液中浓度最高，尿中的浓度最低. 它含有 120 个氨基酸，相对分子质量 Mr=13 359，人体所有的有核细胞都可以持续的产生 Cystatin C. 其产量不受其他因素（如年龄、性别、饮食、炎症等）的影响. 肾脏是 Cystatin C 的主要分解代谢器官，低分子量和高等电点（PI=9.3 ）使其能自由的通过肾小球基底膜，而且在近端肾小管几乎全部被重吸收和分解代谢.Cystatin C 是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一种，在肽链C 端有两个二硫键. Cystatin C 基因属看家基因，它在人体组织中能被稳定的表达. Cystatin C 的一些基因型和其基因的多态性与某些肿瘤的发生有关
4、. 因此，Cystatin C 不仅可以作为判断肾小球滤过率(GFR)的分子指标，也可以作为癌症患者潜在的 GFR 的分子指标，并且不受化疗的影响.3Cystatin C 与其他指标的比较Crubb1将 51crEDTA 测定的 GFR 与血清 Cystatin C和 Scr 相比较，其相关系数 r 分别为 0.77 和 0.75. Bokenkamp 等2将菊粉测定的 GFR 与血清 Cystatin C 和 Scr 比较，相关系数3r 分别是 0.88 和 0.72；用碘海醇法测定的 GFR 与血清 Cystatin C和 Scr 比较，相关系数 r 分别是 0.87 和 0.71. 以上
5、研究表明，Cystatin C 与 GFR 比 Scr 与 GFR 有更好的相关性. 李玉林等3用乳胶增强的免疫散射法测 Cystatin C，还分别测了 Scr 和 Ccr，并比较了它们之间的相关性，结果发现血清 Cystatin C 与 Scr 有显著正线性相关（P0.05） ，对 Ccr 异常的患者，Cystatin C 比 Scr 有更显著的符合率. 由此可见，Cystatin C 在诊断肾功能损害上有以下特点：有稳定的生成速度，不受年龄、性别和其他病理状态的影响；能自由地被肾小球滤过；不被肾小管重吸收和分泌.55Cystatin C 的测定方法自从 Price 等8在脑脊液中发现 C
6、ystatin C 后，许多学者致力于寻找一种更快速、更准确的 Cystatin C 测定方法. 1979年 Grubb 等1提出了酶放大免疫扩散法，这种方法比较繁琐，不适用大批量测定. 随后，随着各种免疫方法的不断完善，1993 年Coll 等9提出了酶联免疫吸附法（ELISA） ，ELISA 法是一种定量检测 Cystatin C 的方法，它以包被固相载体的兔特异性多克隆抗体为第一抗体，加入待测血清后，再加入辣根过氧化物酶标记的鼠抗人 Cystatin C 的第二抗体，孵育后加入发光基质底物，450 nm处显色. 该方法大大提高了 Cystatin C 检测的灵敏度，其最低可测限为 0.0
7、2 nmol/L，分析时间需要 4.5 h. 1995 年 Bowers 等10提出的粒子增强比浊法使 Cystatin C 测定更上了一个台阶，其分析时间缩短到 10 min，在浓度为 1.5 mg/L 时，其精确度为批内平均 CV=2.6%，批间平均 CV=6.6%，在浓度为 5.8 mg/L 时，批内平均 CV=0.9%，批间平均 CV=3.2%. 最近，德灵公司又提出了乳胶增强的散射免疫比浊法测 Cystatin C，它是以多克隆兔抗体为基础的改良免疫比浊分析法，它以人尿中纯的 Cystatin C 定标，血清和肝素抗凝血浆均可用，整个分析过程只需要 6 min，测定范围为 0.874
8、.63 mg/L，在浓度为 0.257.90 mg/L 范围内，批内CV1.8%，批间 CV1.8%. 在整个测定范围内，理论值与实际值有良好的相关性.66Cystatin C 的临床应用新进展6.1Cystatin C 在淀粉样蛋白沉积性血管病(HCCAA)病因学研究中的应用遗传性 Cystatin C HCCAA 是一种常染色体显性遗传病，由于脑动脉内淀粉状蛋白纤维沉积，引起颅内反复出血，导致中风、精神错乱、甚至死亡. HCCAA 的发病机制至今还不是十分清楚. 最近有研究发现，HCCAA 的发病与 Cystatin C 的基因突变紧密相关. Asgeirsson 等11 测定 HCCAA
9、 患者脑脊液中 Cystatin C水平并与健康人对照发现，HCCAA 患者脑脊液中 Cystatin C 浓度仅为健康人的 1/3，从 HCCAA 患者中分离出单核细胞进行体外培养发现，HCCAA 患者单核细胞分泌 Cystatin C 的能力远远低于健康对照，但其细胞内 Cystatin C mRNA 的转录活性并没有受限，初步估计 HCCAA 是由于 Cystatin C 突变株分泌减少，甚至不分泌，从而在细胞内积聚，形成淀粉状纤维丝. 通过对 Cystatin C 突变株基因型分析发现，Cystatin C 的基因突变发生在第 68 个氨基酸上，由谷氨酸取代了原来的亮氨酸. 进一步研究
10、发现， Cystatin C 突变株不仅由 Leu 变为 Gln，且其 N 端有 10 个氨基酸被截断，这可能是脑动脉内淀粉状纤维丝沉积的又一个因素，还需要进一步研究.6.2Cystatin C 在胸膜疾病病因学研究中的应用引起胸膜疾病导致胸腔积液的原因很多，急性或慢性肾病造成肾功能损害是发生胸膜疾病的一个主要因素，有研究表明，尿毒症患者往往因体液免7疫和细胞免疫减弱，导致胸膜性肺炎. 长期作腹膜透析和血液透析的患者也会发生各种胸膜疾病. 但究其发病根源，却没有一种更快速敏感的指标，Cystatin C 是最近才发现的一种新颖的胸膜疾病病因学诊断指标.Wolfgang 等12测定 47 例患者
11、（其中 17 例肾功能损害、11 例肝硬化、8 例充血性心衰、6 例转移癌、其他为不明原因的胸水）胸水和血液中的 Cystatin C，B2M ，磷酸盐、肌酐以及总蛋白，并计算血清 Cystatin C/胸水 Cystatin C 值. 结果发现，仅在肾功能损害的患者组中，Cystatin C 与胸水 Cystatin C 浓度接近，其比值约为 1.0，其他组中，若血清 Cystatin C 高，胸水Cystatin C 就比较低，胸水 Cystatin C 高，血清 Cystatin C 则比较低. 该发现第一次由 Wolfgang 等12 报道，其研究还有待深入.6.3Cystatin C
12、 在动脉硬化和大动脉瘤病因学研究中的应用人类动脉硬化和腹部大动脉瘤的发病机制来源于弹性薄层的分解，弹性半胱氨酸蛋白酶 S 和 K，它们在动脉弹性蛋白损害部位超量表达 . Shiraishi 等13 研究发现，动脉硬化和大动脉瘤患者体内缺乏Cystatin C，并且通过 B 超发现，腹部动脉瘤直径越大，血清Cystatin C 浓度越低. 体外实验发现，细胞分裂刺激血管平滑肌细胞分泌组织蛋白酶，但是 TGFbeta 治疗，诱导 Cystatin C 分泌时，组织蛋白酶弹性作用受阻. 这些表明动脉硬化和腹部大动脉瘤是由于半胱氨酸蛋白酶和 Cystatin C 不平衡最终导致 Cystatin C 缺乏.86.4Cystatin C 的其他应用 Filer 等14 发现哮喘患者血清Cystatin C 浓度明显升高，提示 Cystatin C 可能与哮喘的发病机制有关，甲基强的松可
