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附录A （资料性附录）梨枯梢病菌PCR检测程序A.1 DNA提取挑取少量分离到的病原菌配制成108CFU/mL悬浮液，1 mL菌悬液按照市售DNA提取试剂盒要求提取DNA。提取后用蛋白/核酸分析仪鉴定DNA质量，当A260/A280比值为1.82.0时，适合于PCR扩增。A.2 引物上游引物（HrcCF）:5-GACGTTTGCACCTGGAAACCG-3；下游引物（HrcCR）:5-GCGGTAGGTAATCAAGGCCAC-3；扩增产物为476 bp。A.3 反应体系见表E.1.反应组成体积，L10PCR buffer525 mm MgCl2325 mm dNTP2引物（20 m）15 U/L Taq DNA聚合酶0.5模板DNA2ddH2O34总体积50A.4 反应条件94变性3 min；进入循环，94变性30 s，62退火30 s，72延伸30 s，30个循环；最后72延伸5 min。如采用市售的试剂盒，按照说明作适当调整。A.5 电泳分析取5 L PCR扩增产物与1 L的6上样缓冲液混合均匀，上样于1.5%琼脂糖凝胶中，80 V电泳1 h，溴化乙锭（EB）染色20 min30 min后，凝胶成像系统中观察，记录观察结果。
