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1、 基因定点突变技术定点突变定点窍变是指通过林合酶链式反应(PBB等方法向目的DM&片段(可以是基因组,也可以是质粒中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化,包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高BMR所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。定点突变的目的“基因定点的宋变是指按照设计的要求,使基因的特定序列发生插入、删除、置换和重排等变异。-体外定占突变技木是研咒蛋白质结构和功能Z间关系的有力工*蛋白质的结构决定其功能对菪个已知基因的特定碱基进行定点改变,缺失或者插入,可以改变对应的氮基酸序列和蛎白质结构和功能,改造酶的不同活性或者动力学特性。定点突
2、破的方法“寡核苷酸介导的基因突变指用含有突变碱基的寡聚核苷酸片断作为引物,在聚合酶的作用下肢动DNA分子进行复制。*盒弋安取是利用一段人工合成的含基因突变序列的寡核苷酸片段,取代野生型基因中的相应序列。“PCR介导的基因窍变寡核苷酸介导的定点突变.寡聚核苷酸定点诱变技术是由加拿大芜生物化学家鹃帕a卧SImiith发明寡核苷酸定点突变基本原理*合成一段寡联脱氧核糖核苷酸作为引物,使其与带有目的基因完全互补。*合成的寡核苷酸引物除短的错配区外,与目的基因完全互补。*然后用DNA棣合酶使寡核苷酸引物延伸,完成单链DNA的复制。E睾砦藿生的双链DN虬一条链为野生型亲代链,另一条为突变型*痔获得的双联分
3、子通过转导入宿主细胞,并筛选出突变体其中基因已被定向修改g】。“将待突变的目的基因插入Mu3噬菌体载体荪赘删上,制备单链DNA“将合成的寡核酸片段与单链模板退火,在DNA聚酗DNA迪接鹄DNA聚合的作用下W&txl6r八、_突变体的筛选:寝核东:“酸探针杂交筛选法合成互补的双链DNA)炮ECJ)盒式突变*1985年Wells提出的一种基因修饰技术一盒式突变。*盒式突变:用一段人工合成具有突变序列的DNA片段,取代野生型基因中的相应序列。*然而,并非所有变异区附近都能找到合适的限制位点,如霞蔫藿言限制位点,就要用寡核苷酸指导的定位诱变引入目仁尾。EA工fiymMH/iR运大anantb奂atvutitmEDN卿risowesnattaPCR介导的定点突变*在最初所建立的PCR方法中就可看出只要引物带有错配碱基便可使PCR交物的未端引入突变。但是诱变部分并不总在DNA的中间部分进行诱变。*目前采用重组PCR迹行定位诱变,可以在DNA片段的任意部位产生定位突变。
