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1、 等电聚焦电泳IlsoelectricFocusingElectrophoresis,IEFE一、IEFE定义IEFE一种利用具有pH梯度的支持介质分离等点质的电泳技术。B不同的虾白各种蛋白质各自都有一个等电一特殊的pH环境中,在电场中不会迁移。等电聚焦就是蛋白质分子呈电q点,在在电泳介质中放入h性,戟伙厂烃心郎压,当通以直流电时,两性电解质即形成一个加的pH梯度,在此阳极到阴极逐步质即移动到或聚焦3于其相当的等电点位置上,也就是说被焦电泳。精焦于一个狭的区体系中,不同的蛋增带中,电泳技术中的等电点聚焦也称为精命e人IEFE的特点(一)优点目.国2分辨率高(精密度可达0.01pH单位),灵敏度
2、高(最低检出量达0.1ng)。电泳区带相当狭窄。目3.重复性好。(二)缺点目1.要求用无盐溶液,而在无盐溶液中蛋目2.样品中的成分在pI不溶或发质可能发生沉淀。必须停留在其pl,不适用生变性的蛋质。分辨率较不连续PAGE更高,特别适合于分离分子量相同而电荷不同的生物大分子。靥三、IEFE的基本原理蛋白质分子在不同pH下的解离状态NH3+NH3+NHP一国P一河P一21一入、八八、CooHCoOo-CO0-堤嗲pH一plpH一plpHpll“在电泳介质中放入载体两性电解质,当通入直流电时,两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度,正极附近是低pH区,负极附近是高pH区。一p口一Lph电1一一一plpH=pl一一pbpln丁口DC蛋自质分子在负极端蛋自质分子在正极端蛋白质样品中各组分聚焦成区带10
