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1、罗氏HE4试剂性能评估综述 中山大学附属肿瘤医院刘万里 内容 罗氏HE4检测原理Elecsys HE4SFDA注册研究概况Elecsys HE4性能评估Elecsys HE4性能小结 内容 罗氏HE4检测原理Elecsys HE4SFDA注册研究概况Elecsys HE4性能评估Elecsys HE4性能小结 标记免疫电化学发光检测 ECL IA Technology E ElectroC ChemoL LuminescenceI ImmunoA Assay方法 仪器 试剂三位一体的特定自动化分析 系统解决了大规模样本检测稳定 高效 快速等问题 是医学超微量分析的一次战略性革命 RocheHE
2、4检测试剂设计双抗体夹心一步法 原理 双抗体夹心法检测时间 18分钟1st孵育 分钟10 L血样 生物素标记HE4特异性单克隆抗体 钌标记HE4特异性单克隆抗体 形成抗原抗体复合物2nd孵育 分钟加入链酶亲和素包被的磁珠 通过生物素和链酶亲和素反应 形成复合物检测 反应复合物送入测量池 磁珠结合至电极表面 未结合的反应物通过ProCell清除通过对电极增加电压触发化学发光光电子释放 后者通过光电倍增管检测 RocheHE4检测试剂设计HE4检测原理 生物素标记的HE4单克隆抗体 待检样本中的HE4 10 L 钌标记的HE4单克隆抗体 链酶亲和素包被的磁珠 进行检测 9min 9min Roch
3、eHE4试剂成分试剂 工作溶液 M 包被链酶亲和素的微粒 透明盖 1瓶 6 5mL 包被链霉亲和素的微粒0 72mg mL 防腐剂R1 生物素化抗人HE4抗体 灰盖 1瓶 10mL 生物素化单克隆抗HE4抗体 小鼠 0 75mg L 磷酸盐缓冲液100mmol L pH值6 5 防腐剂R2 钌复合物标记的抗人HE4抗体 黑盖 1瓶 10mL 钌复合物标记的单克隆抗HE4抗体 小鼠 1 5mg L 磷酸盐缓冲液100mmol L pH值7 4 防腐剂 RocheHE4试剂成分需要的材料 卵巢癌肿瘤标志物提供HE4和CA125检测的厂家 罗氏所有免疫平台均可以同时提供CA125和HE4的检测 内容
4、 罗氏HE4检测原理Elecsys HE4SFDA注册研究概况Elecsys HE4性能评估Elecsys HE4性能小结 Elecsys HE4SFDA注册研究研究概况 研究时间 2011 1 2011 6研究中心中国医学科学院肿瘤医院浙江大学医学院附属妇产科医院华中科技大学同济医学院附属同济医院山西省肿瘤医院 Elecsys HE4SFDA注册研究 研究目的一 与康乃格公司HE4 酶联免疫法 进行比对检测 评价试验结果研究目的二 盆腔肿块患有卵巢癌风险的评估 ElecsysHE4和Elecsys125II联合检测计算ROMA指数 评估风险高低研究目的三 血清 血浆对比试验 验证不同类型样本
5、结果的一致性 Elecsys HE4SFDA注册研究结果共入组1487例样本 Elecsys HE4SFDA注册研究结果各研究中心不精密度结果 选取中 低浓度的样品各一份 分别检测10次 计算CV值 Elecsys HE4SFDA注册研究结果各研究中心质控结果良好 Elecsys HE4SFDA注册研究结果与参与试剂有良好的一致性 y 1 0942x 2 7976相关系数r 0 949回归系数R2 0 8997 Elecsys HE4SFDA注册研究结果ROMA指数可将盆腔肿块患者进行风险分级 绝经前 PI 12 0 2 38 LN HE4 0 0626 LN CA125 绝经后 PI 8 0
6、9 1 04 LN HE4 0 732 LN CA125 582例样本被正确分入高 低风险组 注 风险指数PI PredictiveIndex LN为自然对数 内容 罗氏HE4检测原理Elecsys HE4SFDA注册研究概况Elecsys HE4性能评估Elecsys HE4性能小结 病例报告 患者 女 45岁 B超检查发现卵巢肿块 罗氏试剂电化学发光法检测血清HE4浓度 结果为136pmol L 如何判断这患者HE4结果是否异常 临床判断HE4检测结果应考虑的问题 参考值HE4实验室检测误差样本检测前误差 标本采集影响标本保存的影响干扰物质的影响人生理变异治疗措施的干扰 药物 其他疾病的干
7、扰 三组各年龄段HE4浓度比较 a均值 标准差pmol l 例数 青年组 45岁 中年组 45 59岁 老年组 60岁 LSD检验 经随机区组设计方差分析 1 参考值 HE4在不同观察组间的差异 OC组 不同年龄的HE4 良性病变组 不同年龄的HE4 健康对照组组 不同年龄的HE4 年龄因素对HE4浓度的影响 HE4在各年龄组参考值的设定和诊断价值评估 所有病例的ROC曲线 青年组的ROC曲线 HE4在各年龄组参考值的设定和诊断价值评估 中年组的ROC曲线 老年组的ROC曲线 2 实验室检测误差 日间精密度 罗氏 日间精密度 验证 在三个研究中心进行的重复性检测的结果 不精密度 CV 低值 4
8、4 3 CV 2 1 高值 1317 CV 1 9 2 实验室检测误差 初步结论 实验室检测误差 5 样本检测前误差 血清 血浆 EDTA 肝素 样品保存 24h内 血清血浆 血清24h内检测 HE4无显著性差异 样本检测前误差 干扰物质影响 罗氏 药物的影响 罗氏 回收率均 10 结论 上述浓度下的干扰物质和药物对HE4检测无显著影响 样本检测前误差 对HE4浓度分别在65pmol L和155pmol L进行检测 判断与乳清酸性蛋白家族其他成员的交叉反应性Elafin 弹性蛋白酶特异性抑制剂SLPI 分泌性白细胞蛋白酶抑制剂 干扰物质的影响 交叉反应 罗氏 结论 交叉反应对HE4结果的影响可
9、忽略不计 样本检测前误差 HE4生理变异的影响 n 2 初步结论 HE4个体日间变异度 10 样本检测前误差 肺部疾病的影响 肾功不良的影响 结论 肺部疾病 尤其是肾衰显著影响HE4水平 总结 1 HE4的参考值需按年龄段设定2 HE4实验室检测误差 5 2 HE4个体日间变异度约10 3 肺部疾病和肾衰HE4水平显著升高4 其他样品前检测影响因素对HE4的影响不显著5 HE4结果超过参考值上限20 判断为异常 对高于正常参考限但未大于20 的患者 应连续追踪观察 患者HE4结果的初步判断 患者 女 45岁 B超检查发现卵巢肿块 罗氏试剂电化学发光法检测血清HE4浓度 结果为136pmol L
10、肾功正常 无肺部疾病病理诊断 卵巢癌 实验室检测误差约136x5 6 8个体变异 36x10 13 6预计该患者HE4的结果为115 6 156 4范围内该年龄组参考限为80pmol L 结论 该患者HE4异常增高 内容 罗氏HE4检测原理Elecsys HE4SFDA注册研究概况Elecsys HE4性能评估Elecsys HE4性能小结 Elecsys HE4性能参数小结 Elecsys HE4来自巴塞罗纳Dr Molina的评价 ElecsysHE4提供准确的方法学检测 并拥有优秀的精密度 临床表现 显示与其他方法有良好的一致性 HE4是卵巢癌高灵敏度和特异性的优秀标志物 与卵巢癌的分期明确相关 结果稳定可靠 操作简单 结果精确 Elecsys HE4结论 整个检测范围均呈现优秀的精密度所需样本量低血清和血浆均适用一管血同时检测HE4和CA125两项指标溯源至HE4EIAFujirebio临床相关的Cut off值具有良好的有效性临床研究数据适用于良性疾病 卵巢癌的监测和风险评估 谢谢
