《动物垫料中大肠埃希氏菌O157H7NM检测方法 编制说明-内蒙古》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物垫料中大肠埃希氏菌O157H7NM检测方法 编制说明-内蒙古（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、编制说明项目名称：动物垫料中大肠埃希氏菌O157：H7/NM检测方法 项目编号：内质监标函（2018）154号-109 编制单位：呼和浩特海关 编制时间：2018.6-2019.9 一、 工作简况本标准根据关于下达2018年第一批内蒙古自治区地方标准制修订项目计划的通知内质监标函（2018）154号，本标准是由呼和浩特海关提出并归口，项目计划编号为109。呼和浩特海关牵头成立由相关领域的专业技术人员和具有标准化专业知识的人员组成的标准起草组。起草组在充分调查研究、综合分析和试验验证的基础上，起草标准初稿和编制说明，并广泛征求意见。对意见进行汇总整理，修改完善标准初稿，形成地方标准征求意见稿。第
2、一起草单位：中华人民共和国呼和浩特海关；第二起草单位：二连浩特市疾病预防控制中心；第三起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。主要起草人：赵治国、崔强、郭文丽、延涵、王海艳、陈林军、敖威华、韩祎陟、罗晓平、李军燕。二、标准制定的背景及意义动物垫料与动物关系密切。近年来随着生物科学研究的飞速发展，动物作为其研究中不可缺少的重要组成部分，备受各国政府的重视和科学家的关注。垫料为动物营造舒适的人工环境，进行环境控制的基础条件和必要材料，是对动物产生直接作用和影响的环境因素。动物垫料与动物健康、福利息息相关，同时也对养殖业、动物及其相关科研方面甚至社会经济发展有十分重大的影响。因此，垫料的质量评定与控制十
3、分重要。 我国动物垫料标准化、商品化尚处于初级阶段。欧美等发达国家早已实行垫料商品化生产，有专业的工厂，并且各道工序的质量控制要求非常严格。但我国对动物垫料的研究与应用还处于初级阶段，与垫料相关的文献报道甚少，垫料生产监管环节薄弱，检测标准缺乏。近年来我国政府及畜牧从业人员逐渐认识到动物垫料中存在的问题，开始对垫料质量评价方面的问题进行改进。因此要想使动物的质量管理与国际接轨，动物垫料生产的标准化、商品化就变得至关重要。我国动物垫料标准化和质量管理相对滞后，影响相关行业发展。我国对动物垫料的研究才刚刚起步，现行的国家标准和实验动物相关管理条例中，对动物垫料的标准化规定几乎空白，仅有的资料对于垫
4、料的规定只有：应选用吸湿性好、尘埃少、无异味、无毒性、无油脂的材料；须经消毒、灭菌后方可使用。如此笼统的规定在一定程度上制约了我国动物垫料标准不能紧跟国际标准，同时限制了药品、生物制品、动物等相关产品的出口，还使科研论文将不能被同行接受。因此要想提高相关学科竞争力，就必须加强垫料标准化和质量管理，从动物垫料微生物指标监测入手。我国动物垫料微生物检测标准几乎空白，亟待建立相关标准。近年来，我国政府及从业人员逐渐认识到动物垫料对动物健康及下游产业的重大意义，垫料相关研究报道逐年增多，积累了一定的理论基础。但目前，我国尚未对国内垫料质量建立统一评价体系、风险分析、国家标准及配套法规。其中，垫料中微生
5、物特别是致病微生物的含量对动物健康、福利和产品等影响重大，但目前动物垫料中微生物检测标准属于空白，亟待建立科学完善的动物垫料微生物检测标准，该工作将对国内垫料建立统一 质量评价体系、风险分析及产品标准等有力促进。大肠埃希氏菌O157 ( Escherichia coli O157) 是一种出血性致病性大肠杆菌, 能引起人类出血性腹泻和溶血性尿毒综合征, 其感染已成为世界性公共卫生问题。我国于1987 年首次从出血性结肠炎患者中分离到O157：H7/NM 型大肠埃希氏菌。以后陆续有10 余个省份在市售食品、进口食品、家禽家畜和腹泻病患者中检出该菌。局部地区还发生了流行, 表明该病已逐渐成为威胁人
6、群健康的重要公共卫生问题。如何控制E.coli O157：H7/NM 的感染是目前公共卫生学中的重要课题, 现已证实家畜( 禽) 是E.coli O157：H7/NM公认的宿主动物, 且带菌排菌的时间较长, 经食物传播是E.coliO157：H7/NM的最主要的传播途径, 感染力强, 只要有1 00010 000 个菌从口中进入就会在肠内大量繁殖, 呈食物中毒型暴发。近年来E.coliO157主要的疫情的发生地德国已有16个州发生疫情，确诊病例和疑似病例超过4000人。另外，瑞典、丹麦、荷兰、法国、英国、波兰、奥地利等10多个欧洲国家和美国近期也都出现了上述病例报告，现已造成30多人死亡。E.
7、coliO157感染是一种人畜共患病。凡是体内染有该菌的人及带菌家畜、家禽等都可传播。如牛肉、奶制品的污染大多来自带菌牛；带菌动物在其活动范围内也可通过排泄的粪便污染。由E.coliO157引起的食物中毒已造成数十亿美元的损失。因此对家畜( 禽) 及畜禽产品中E.coli O157：H7/NM的检验, 将有助于控制食物源致病菌的污染, 为人类健康提供服务。动物垫料中E.coli O157：H7/NM对动物的危害极大。动物垫料E.coli O157：H7/NM是影响动物健康和动物实验结果的国际公认的重要环境因素之一，因此动物垫料中E.coli O157：H7/NM的检测十分重要。E.coli O
8、157：H7/NM常寄居在人和动物的消化道，感染后的主要症状正是出血性腹泻，引起人和动物的出血性腹泻和肠炎，严重者可伴发溶血尿毒综合征，病原随粪便排出体外，E.coli O157：H7/NM在37环境条件下可耐受5小时，耐低温，能在冰箱等低温条件下长期生存；在自然界的水中可存活数周至数月，其广泛分布在水和土壤中。当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时，成为条件致病菌而引起疾病，不但能通过污染食物导致人的食物中毒，而且还能引起家畜、家禽及其他动物发生急性、慢性或隐性感染，对动物造成很大的威胁。近年由E.coli O157：H7/NM大肠埃希氏菌引起的暴发流行日趋增多, 其较高的死亡率引起重视。随着流
9、行病学调查深入, 在不同宿主动物中发现了E.coli O157：H7/NM的存在, 在北美和欧洲, 健康牛和病牛的粪便带菌率从不足1 %10 %, 其它动物如羊、鸡、猪、兔、鹅、马、鹿、海鸥等动物亦是该菌的贮存宿主。动物体内排出的E.coli O157：H7/NM，也可能污染食物导致人的食物中毒。因此检测垫料中E.coli O157：H7/NM成为重中之重。建立动物垫料E.coli O157：H7/NM检测标准，保障动物健康急不可待。动物垫料与动物粪便直接接触，容易滋生细菌，尤其是肠道致病微生物，致使垫料被E.coli O157：H7/NM污染，从而威胁动物的健康与福利，并且对养殖业的发展与国
10、际间动物及产品贸易带来巨大的影响，甚至威胁到人类社会的生产与生活。对于动物垫料E.coli O157：H7/NM检测标准几乎空白，还没有统一的标准和方法，所以建立动物垫料E.coli O157：H7/NM检测标准已刻不容缓。本实验室具有多年微生物检测的经验，本方法的开发和应用，在检测技术方面填补我区的空白、弥补了自治区没有现行标准的不足，能够使动物垫料中E.coli O157：H7/NM的检测更加高效、准确、安全。本方法的开发和应用将会使我区在动物垫料中E.coli O157：H7/NM的检测先进性方面达到国内领先水平，为我区动物垫料质量安全管理部门更快更好的管控提供可靠保障。因此，加强动物垫
11、料中E.coli O157：H7/NM的检测对确保全区农业持续、健康发展具有重要的现实意义。三、主要起草过程2018.06-2018.08 地标前期基础工作：收集动物垫料样本，查阅E.coli O157：H7/NM资料，检索E.coli O157：H7/NM检测的相关文献及标准。2018.09-2019.09 前期实验条件的摸索：包括前处理方法的优化、对照，不同垫料中E.coli O157：H7/NM的检出率，最终确定实验方案，编写编制说明。2019.10-2019.11 验证单位进行验证。2019.12 编写地标并定初稿。四、现行法律、法规和强制性标准的关系本标准遵循GB/T 1.1-200
12、9 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写和GB/T 20001.4-2015 标准编写规则 第4部分：试验方法标准的规则编写。还参照相关国家标准编写指南的要求。在编制本标准的过程中参考了以下标准：ISO 16654:2017 Microbiology Of Food And Animal Feeding Stuffs - Horizontal Method For The Detection Of Escherichia Coli O 157、 AOAC Official Method 996.10 Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O1
13、57：H7、BAM:EnumerationofEscherichiacoliandtheColiformBacteria、美国FDA细菌学分析手册第八版（BAM） E.coli O157：H7、GB 14925-2010实验动物环境及设施、GB 4789.6-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验、 GB 4789.36-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157：H7/NM检验、GB/T 22429-2008 食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157及单核细胞增生李斯特菌的快速筛选检验 酶联免疫法、SNT 0973-2010 进出口肉、肉
14、制品及其他食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7检测方法、江苏省DB32/T 2599-2013 畜禽肠出血性大肠杆菌O157:H7 的检测；综合参考了国内外与E.coli O157：H7检测相关的检测标准，力求该标准能够高效准确的检测垫料中E.coli O157：H7，同时兼顾标准的广泛应用。本标准完全符合现行法律法规和强制性标准规定，不存在任何与现行法律法规和强制性标准相违背之处。相关强制性标准2项：GB 14925-2010 实验动物 环境及设施，本标准规定了实验动物及动物实验设备和环境的技术要求及检测方法，同时规定了垫料、饮水和笼具的原则要求。但针对垫料该标准仅规定了“垫料的材质应符合动
15、物的健康和福利要求，应满足吸湿性好、尘埃少、无异味、无毒性、无油脂、耐高温、耐高压等条件；垫料必须经灭菌处理后方可使用” 。本地标适用于垫料中E.coli O157：H7/NM检测，明确规定了不同类别垫料取样方法，标准中E.coli O157：H7/NM鉴定过程增加了新的鉴定手段，确保检测结果更加准确。5、 主要内容及检测方法的确定5.1 取样方法的确定及优化根据动物垫料的物理性状将其分为颗粒状/粉末状垫料和平面状垫料，针对不同性状的垫料采取不同的取样方法。5.1.1 颗粒状或粉末垫料样品取样方法国内外食品和饲料中霉菌检测法中常用的取样方法为称取法，本标准中针对颗粒状或粉末垫料样品（木屑、玉米芯、秸秆、纸屑等）参考通用做法采用称取25 g的方法进行取样。5.1.2 平面垫料样品取样方法针对平面垫料（胶垫、托盘等）采用表面涂抹取样法，无菌操作将涂抹25 cm2-100 cm2平面样品的棉拭子置入装有 25 mL-100 mL mEC+n肉汤中，混匀作为原液。5.2 培养基的选择5.2.1 选择性增菌培养基国内外标准和资料中用到的预增菌稀释液主要有：改良EC肉汤(mEC+n)、灭菌生理盐水、添加新生霉素的肉汤（EC）、胰酪胨大豆肉汤（TSB）、通用前增菌肉汤（UPB）和营养肉汤（NB）等。其中，改
