《浙科版选修1第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》ppt课件5.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《浙科版选修1第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》ppt课件5.ppt（53页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 微生物 microorganism 结构简单 形体微小的单细胞 多细胞或 没有细胞结构的低等生物 例 酵母 霉菌 细菌 放线菌 病毒和 小型原生动物等等 微生物的利用 抗生素 酒 腐乳 污水治理 历史小资料 19世纪中期 关系到法国经济命脉的 酿造业曾一度遭受毁灭性的打击 在生产 过程中 出现了葡萄酒变酸 变味的怪事 经过一番研究 法国科学家巴斯德发现 导致生产失败的根源在于发酵物中混入 了杂菌 保持培养物纯净 保证无杂菌污染很 重要 大肠杆菌的培养与分离 一 大肠杆菌 E coli 兼性厌氧的肠道内的共生菌群 合成维生素B和维生素K 供机体利用 产生大肠杆菌素 抑制肠道致病菌 和腐生菌滋生
2、 革兰氏阴性菌 作为一种工程菌 在基因工程技术中被广泛采用 例 大规模生产治疗糖尿病的药物 胰岛素 培养基 culture media 按照微生物对营养物质的不同需求 配制 出的供其生长繁殖的营养基质 提供微生物生长的条件 合适的温度 25 37 合适的pH 细菌 6 5 7 5 中性偏碱 真菌 5 0 6 0 中性偏酸 营养成分 含有碳源 氮源 生长因子 水 和无机盐 关微生物营养物质的叙述中 正确的是关微生物营养物质的叙述中 正确的是 A A 是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B B 凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C C 除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无
3、机物只提供无机盐 D D 无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 D D LB培养基的配方 培养基成分各成分的量 蛋白胨0 5g 酵母提取物0 25g NaCl0 5g H2O加至50ml 固体培养基的配制 每50ml 液体培养基添加1g 琼脂 琼脂 红藻中提取的多糖 在98 以上熔化 44 以 下凝固 常温下凝结成有弹性的凝胶 凝固剂 标准 培养基 类型 配制特点主要应用 物理 性质 固体培 养基 加入琼脂较多 菌种分离 鉴定 计数 半固体 培养基 加入琼脂较少菌种保存 液体 培养基 不加入琼脂 工业生产 连 续培养 化学 组成 合成 培养基 由已知成分配制而成 培养 基成分明确 菌种分类
4、 鉴 定 天然 培养基 由天然成分配制而成 培养 基成分不明确 工业生 产降 低成本 目的 用途 鉴别 培养基 添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别 选择 培养基 添加 或缺少 某种化学成 分 菌种的分离 培养基种类 培养基 培养液 是由人工方法配制 而成的 专供微生物生长繁殖使用的混 合营养液 1 按物理状态分 固体培养基和液体培养 基 半固体培养基 2 按功能分 选择培养基和鉴别培养基 3 按成分分 天然培养基和合成培养基 1 培养基的类型 固体培养基 菌落 液体培养基 表面生长均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基 无动力 有动力 弥散 4 培养基的用途 液体培养基 增菌 工业生产 固体培养
5、基 纯化 分离 鉴定 活菌计数 保藏菌种 半固体培养基 动力检测 培养基的分类 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 选择培养基 抑制不需要的微生物生长 酵母菌 霉菌 青霉素 金黄色葡萄球菌 高浓度食盐 鉴别培养基 大肠杆菌 伊红 美蓝培养基 物理性质 培养基用途 下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A A 防止杂菌污染防止杂菌污染 B B 消灭杂菌消灭杂菌 C C 培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D D 灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前 B B 无菌技术 获得纯净培养物的关键是防止 外来杂菌的入侵 无菌技术围绕着 如何避免杂菌的污染
6、展开 1 消毒 利用化学或物理方法 杀死大部份致病微生 物的过程 消毒与灭菌 2 灭菌 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最 普通也是最重要的技术 以化学剂或物理方法消灭所有微生物 包括 所有细菌的繁殖体 芽孢 霉菌及病毒 而达到 完全无菌的过程 消毒的方法 1 100 煮沸5 6min 2 巴氏消毒法 70 75 下煮30min或 80 下煮15min 3 用75 酒精 新洁尔灭等进行皮肤消毒 4 氯气消毒水源 5 紫外线消毒 灭菌的方法 1 灼烧灭菌 2 干热灭菌 160 170 下加热1 2h 3 高压蒸汽灭菌 100kPa 121 下 维持15 30min 高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法
7、为湿热灭菌法 其优点有三 1 湿热灭菌时菌体蛋白容易变性 2 湿热穿透力强 3 水蒸汽变成水时可放出大量热增强杀菌 效果 因此 它是效果最好的灭菌方法 灭菌锅 检查水位 设定高压温度及时间 121 20min 放入待灭菌物品 加热 并打开放气阀排 冷空气 关闭放气阀继续升温升压 待温度降低至80 以下开 盖 取出物品烘干 无菌技术操作要点 1 实验操作空间 操作者的衣着和手 2 微生物培养的器皿用具和培养基等 3 为避免周围环境中的微生物的污染 实验操作 应在 进行 4 实验操作时 应避免已经灭菌处理的材料用具 与周围的物品相接触 清洁和消毒 灭菌 酒精灯火焰附近 微生物实验室培养的基本操作程
8、序 培养基配制 器具和培养基灭菌 倒平板 微生物接种 斜面 液体 恒温箱中培养 分离纯化 液体 平板划线 培养 菌种的保存 斜面 准备 阶段 培养 阶段 称量 蛋白胨酵母提取物 NaCl 液体LB培养基的配方 培养基成分各成分的量 蛋白胨0 5g 酵母提取物0 25g NaCl0 5g H2O加至50ml 固体LB培养基 每100ml 液体LB培养基中加入2g琼脂 摇匀 灭 菌 灭菌 培养皿壁上 不能沾有培 养皿 否则 容易污染 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养基 的温度 答 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时 就
9、可 以进行倒平板了 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 答 通过灼烧灭菌 防止瓶口的微生物 污染培养基 3 进行恒温培养时 为什么要将平板倒置 答 恒温培养时 培养基的水分会以水蒸气的 形式蒸发 倒放培养皿会是水蒸气凝结成水滴留 在盖上 如果正放培养皿 则水分形成的水滴回 落到培养基的表面并且散开 如果培养皿已形成 菌落 则菌落中的菌会随水扩散 菌落相互影响 很难再分成单菌落 达不到分离的目的 因此 恒温培养时 培养皿必须倒置 小结 1 什么是微生物 有哪些应用 2 培养基的基本营养成分及其配制方法 3 无菌技术 消毒和灭菌 高压蒸汽灭菌法 4 微生物培养的基本程序 倒平板技术 微生物在自然
10、界中呈混杂状态存 在 要获得所需菌种 必须从中进行分离 在保藏菌种时不慎污染时也需予以分离 怎样纯化分离我们需要的大肠杆菌呢 怎样确保大规模培养繁殖起来的细菌是 一个纯种群体呢 菌落 单个细菌细胞在固体培养基上培养10 20小时后 会繁殖成许多个细菌细胞 这 些细胞紧紧聚集在一起 形成菌落 每一个细菌产生一个菌落 不同细菌的菌落形态的区别体现在大小 形态 隆 起 边缘 表面状况 质地 颜色 透明度等方 面 将待分离样品进行一定的稀释 并使微生物的细胞尽量以分散状态存在 然后使其长成一个个纯种单菌落 大肠肝菌的分离 微生物的接种技术 将一种微生物移接到另一灭菌培养基上的过程 例如 将液体培养基中
11、的大肠杆菌接种到固体培养基上 以便于进行分离 微生物的分离技术 稀释 涂布分离法 平板划线分离法 稀释法 平板划线分离法 一旦划破 会造成划线不均匀 难 以达到分离单菌落的目的 二是存留在划破处的单个细胞无法 形成规矩的菌落 菌落会沿着划破 处生长 会形成一个条状的菌落 1 为什么在操作的第一步以及每次划线之 前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然 需要灼烧接种环吗 为什么 答 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能 存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 使下一次划线时 接种环上的 菌种直接来源于上次划线的末端 从而通过划线次数的 增
12、加 使每次划线时菌种的数目逐渐减少 以便得到菌 落 划线结束后灼烧接种环 能及时杀死接种环上残 留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再 进行划线 答 以免接种环温度太高 杀死菌种 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么 总是从上一次划线的末端开始划线 答 划线后 线条末端细菌的数目比线条起始 处要少 每次从上一次划线的末端开始 能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 3 进行恒温培养时 为什么要将平板倒置 答 恒温培养时 培养基中的水分会以水蒸 气的形式蒸发 如果正放培养皿 则水分形成的 水滴会落如培养基表面且扩散开 若培养基中一 行成菌落 则菌落中的菌会随水扩散开 菌落间 相互影响 很难再分离成单菌落 答不到分离目 的 因此 倒置培养皿可以防止皿盖上的水珠 落入培养基 造成污染 涂布分离法 菌种的保存 1 临时保藏 接种到固体斜面培 养基 菌落长成后 置于4 冰箱保存 2 长期保存 甘油冷冻管藏法
