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1、血液及血液成分的制备保存 徐医附院王浩 血液常识 血液组成正常人血液容量与体重密切相关 一般为体重的8 9 其中血浆占55 60 血细胞占40 45 血浆中绝大多数为水分 占91 92 其中固体成分只占8 9 固体成分中 主要是蛋白质 如白蛋白 球蛋白和各种凝血因子 其他为少量无机盐类和有机物质 血细胞则包括红细胞 白细胞和血小板 一 血液及血液制备的概述 血液成分制备的概述将采出来的全血 用物理方法分离成体积小 纯度高 临床疗效好 不良反应少的单一血液成分的技术称为血液成分制备 如红细胞 血小板 血浆等的血液成分的制备 狭义的血液成分制备血细胞成分 新鲜冰冻血浆 冷沉淀等广义的血液成分制备血
2、浆衍生物 plasmaderivatives 血浆蛋白制品或血液制品白蛋白 免疫球蛋白 凝血因子浓缩物等 成分输血是现代输血医学发展的重要里程碑 二 全血的制备和保存 全血制备全血 将一定量的血液采集到含有保养液的采血袋所制成的血液制剂 即包括血细胞和血浆的所有成分 国际上一般以450毫升全血为1单位 我国则以200毫升为1单位 穿刺部位的选择应选择无损伤 炎症 皮疹 皮癣 疤痕的皮肤区域为穿刺部位 上肢肘部清晰可见 粗大 充盈饱满 弹性好 较固定 不易滑动的静脉 常选择的静脉主要有肘正中静脉 贵要静脉等 穿刺部位消毒用无菌棉拭蘸取适量使用浓度消毒剂 以穿刺点为中心 自内向外螺旋式旋转涂拭 消
3、毒面积不小于6cm 8cm 作用1 3min 宜消毒2 3遍 不应触摸已消毒的皮肤 不应靠近已消毒的皮肤讲话 热合 分段热合血袋导管 以供交叉配血 血型复查和血液标本保存使用 血袋应保留注满全血的导管至少20cm 在热合过程中不应用力牵拉或扭转导管 待焊极松开1 2秒后方可取出已封口的导 应检查热合部位 如有渗漏 则重新热合 并评估对血液无菌性的影响 热合分离针头 将其放置在利器盒内 献血后注意事项的告知 1应当印制献血后注意事项 并将其发给每位献血者 2献血后注意事项主要有 1 穿刺点上的敷料应保留至少4小时 2 多补充水分 食用易消化的食物和水果 避免饮酒 保证充足的睡眠 3 献血后24小
4、时内不剧烈运动 高空作业和过度疲劳 4 工作人员的联系方式 如果存在献血前没有如实告知的可能影响血液安全的高危行为 或者献血后感觉明显不适或异常 请其及时联系工作人员 血液保存全血采集后应尽快在合适的温度下保存血站内采血血液应及时储存至4 2 在采血车或采血屋 采出的血液要按一定条件进行储存和运输 一般情况下 在采血后2小时内 应将血液快速冷却到22 2 并在此条件运输 库存血发往临床用血等处 温度应在2 10 最长运输时间不应超过24小时 全血的保存 需解决的问题 血液凝固 红细胞溶血放氧能力下降 抗凝剂 红细胞营养代谢抗溶血剂改善放氧保存容器 血液抗凝剂 枸橼酸钠 肝素 EDTA 2Na
5、原理 Ca 抗凝血酶 Ca 应用 实验室检测血液标本的抗凝及外科体外循环手术的抗凝 实验室检测血液标本的抗凝 全血及血液成分保存的抗凝剂 葡萄糖的在血液中浓度应为0 5 l 以0 5 为宜 葡萄糖用于维持红细胞代谢 氧化功能 延长红细胞的保存时间 枸橼酸可防止高压灭菌葡萄糖的氧化反应 提供红细胞的能量代谢葡萄糖 枸橼酸 枸橼酸钠 葡萄糖 提高ATP水平和活性的另一办法就是在保存液中加入少量腺嘌呤 可以促进ATP的生物合成 有利于红细胞活性的维持 腺嘌呤 磷酸腺苷 AMP 磷酸化 ATP 提供红细胞的能量代谢 腺嘌呤 目前国际上使用较多的是甘露醇 它的用量很小 一般在1 以下 抗溶血剂 血液保存
6、液 ACD保养液 枸櫞酸盐 葡萄糖 枸橼酸 pH5 0321天 CPD保养液 枸櫞酸盐 葡萄糖 枸橼酸 磷酸盐 pH5 6321天 CPDA保养液 枸櫞酸盐 葡萄糖 枸橼酸 磷酸盐 腺嘌呤 pH5 6335天 加入磷酸盐 加入腺嘌呤 可提高PH使2 3 DPG下降速度减慢 可以促进ATP的合成 利于红细胞活性的维持 表1各种血液保存液配方成分 全血保存温度控制在4 2 保存液CPDCPDA 11 血小板4 保存24小时丧失50 活性 保存48小时更为显著 72小时虽形态正常但已失去止血功能 2 中性粒细胞4 保存4 8小时丧失大部分功能 24小时丧失全部功能 3 因子4 保存24小时活性丧失5
7、0 因子 保存3天丧失活性可达50 全血并不全 因此国内外把全血作为制备各种血液成分的原料 全血的保存特点 三 血液成分的分离制备 原理血液成分制备的原则是采用手工或血细胞分离机方法将全血中的各种血液成分制备成体积小 浓度高 纯度好的统一规格的有效治疗成分 人体血液经过抗凝处理后称为全血 全血离心后主要分为三层 自上而下依次为血浆层 白膜层和红细胞层 血浆层主要包含血浆 水 蛋白质 盐类和各种离子等 白膜层主要包括富含血小板区 富含淋巴细胞区 富含单核细胞区和富含粒细胞区 这些有形细胞比重接近 因此聚集在白膜层 红细胞层可简单分为年轻红细胞和正常红细胞 由于二者处于红细胞的不同生长时期 因此比
8、重略有差别 根据全血离心后分层的原理 利用各种血液成分相对密度 体积等不同 通过离心 过滤的方法可以将各层中不同的血液成分分离 制备成成分血 这样就可以合理利用血液资源 满足患者对不同成分血的需求 提高治疗效果 手工法制备手工法制备血液成分主要是用单袋或多联袋采集血液 置于大容量冷冻离心机内离心 在无菌条件下进行分浆 获得不同的成分 不同的血液成分离心时 要通过相对离心力 g 和离心机半径 cm 从离心机中轴点到离心筒内底部的距离 换算出每分钟离心转数 离心机的每分钟转数 离心时间直接影响各种成分的分离效果 必须定期给与校正 1 应用塑料联袋采集血液 使血液成分可以在密闭无菌的条件下进行分离
9、血袋依照用途不同 可分为单联袋 二联袋 三联袋 四联袋以及双二联袋等 这些是用三通管并联起来 其规格分为采血200 400ml不等 另一种是上下串联起来的多联袋 称为底 顶式血袋 在我国很少使用 2 根据血液成分的不同比重 选择不同的相对离心力进行离心 分离出不同的成分最早的持续性离心装置是在1877年瑞典医生Carl研究的手柄式乳烙分离器 1881年在美国获得专利 后来 运用这种原理制造的离心机用于石油工业清除不纯的润滑油中的颗粒 在核燃料工业中处理铀同位素中的固体和液体废物 1950年美国科学家Cohn在哈佛大学首先发明了持续性血液分离机分离血液成分 这些装置都是根据不同成分的密度来设置的
10、 3 血液成分手工制备的注意事项 制备新鲜冰冻血浆时 保养液为CPDCP2DCPDA 1的血液应该在8小时之内分离并速冻 保养液为ACD的血液应在6小时之内分离并速冻 第二节红细胞的制备和保存 红细胞制剂是由全血去除部分血浆制备而成 从200ML全血制备的各种红细胞制品为1U 一 浓缩红细胞 概念浓缩红细胞也称为压积红细胞或少浆血 是将采集的全血大部分的血浆在全封闭的条件下分离后剩余的部分所制成的红细胞成分血 可以在全血有效保存期内任何时间分离出部分血浆制备而成 一般用二联袋采集的全血制备浓缩红细胞 制备 1 用二联袋采集1单位或2单位全血于主袋内 2 将全血在4 2 离心 离心3400 g
11、离心7分钟 沉淀红细胞 3 取出离心后全血 将部分血浆分入空的转移袋内 4 用热合机切断塑料袋间的连接管 制备成浓缩红细胞 浓缩红细胞的保存保存在4 2 保存液CPDACD B保存期21天CPDA 1保存液为35天 二 悬浮红细胞 概念悬浮红细胞又称添加剂红细胞 将全血中的大部分 90 血浆在全封闭的条件下分离后并向剩余物中加入红细胞添加液制成的红细胞成分 制备 单袋制备法用单个塑料袋采集血液 离心后在无菌条件下与空塑料袋相连接 把上层血浆分离移入空袋 将等量的保存液加入红细胞内充分混匀 单袋制备方法要求严格的制备环境 整体环境达万级净化 局部操作空间达百级净化 联袋制备法 全血采集于多联袋的
12、主袋内 与抗凝剂充分混匀后 在6 8小时内制备 1 采血后的多联袋在大容量冷冻离心机内离心 离心力一般为3400 g 温度控制在4 2 离心7分钟 2 轻轻取出离心后的血袋悬挂于分离支架上或放于分浆夹内 将上层不含血细胞的血浆分入空的转移袋内 注意不可把血细胞分入血浆中 3 把多联袋末袋中的保存液加入主袋浓缩红细胞内 使红细胞与保养液充分混匀 血细胞比容为0 50 0 65 4 用高频热合机切断塑料袋间的连接管 封闭红细胞袋上的所有管道 制成悬浮红细胞 保存 保存在4 2 保存液 红细胞添加液SAG 生理盐水 腺嘌呤 葡萄糖 SAGM 生理盐水 腺嘌呤 葡萄糖 甘露醇 MAP 甘露醇 腺嘌呤
13、磷酸盐 可保存35天AS 1AS 3AS 5可保存42天 三 少白细胞的红细胞 概念浓缩少白细胞红细胞悬浮少白细胞红细胞 白细胞与输血反应的相关性经研究证实 大多数患者 因输血或受孕 体内产生白细胞抗体 这些抗体大部分属于人类白细胞抗原 HLA 系统的同种抗体 当再度输入含有白细胞的全血或其他血液成分时 有可能产生免疫性发热反应等输血副作用 血制品中白细胞数量与输血副作用的相关性 制备方法 从全血和浓缩红细胞内去除白细胞的方法很多 其效果依据方法不同而异 表4去除红细胞中白细胞的方法 离心白膜法 简单 经济 易于操作 将全血采集于三联袋主袋内 分离出上层血浆至末袋内 然后挤白膜层和白膜层下1
14、1 5cm的红细胞至空转移袋内 白膜层及白膜层下含有大部分白细胞 血小板和部分红细胞 为了提高白细胞去除率 可将末袋的血浆注入主袋 重复离心 最后可制成少白细胞的红细胞 滤器过滤法 由于高分子工业的发展 促进了输血器材的改革 各种不同功能的滤器相继问世 主要包括两大类 第一代是用纤维或泡沫制成的柱状过滤器 第二代为聚酯或塑料为材料孔径20 40微米的网状过滤器 第三代过滤器以聚酯纤维无纺布作高效滤芯材料 不仅具有高效的白细胞去除率还有选择性作用 既有去除浓缩红细胞中白细胞和血小板作用 还能从浓缩血小板中去除白细胞 保存 第三代白细胞滤器减除白细胞可达99 一般可使白细胞降至1 0 106 1
15、0 105 袋 红细胞的回收率大于90 血小板大于85 保存在4 2 保存液 红细胞添加液SAG 生理盐水 腺嘌呤 葡萄糖 SAGM 生理盐水 腺嘌呤 葡萄糖 甘露醇 MAP 甘露醇 腺嘌呤 磷酸盐 可保存35天AS 1AS 3AS 5可保存42天 四 洗涤红细胞 概念洗涤红细胞是采用物理方式在无菌条件小 将保存期内浓缩红细胞或悬浮红细胞等制剂用生理盐水洗涤 去除绝大部分非红细胞成分 并将红细胞悬浮在生理盐水中即为洗涤红细胞 洗涤红细胞血浆清除率为 98 白细胞清除率 80 红细胞的回收率 70 封闭式三联盐水袋洗涤法三联盐水袋为三个容积350 400ml单袋用塑料管道相连的密闭无菌 无热源系
16、统 每袋内装有200ml注射用生理盐水 主袋连接穿刺针头一个 三个袋子之间用塑料夹子夹住 彼此不相连 制备 1 保存期内悬浮红细胞 浓缩红细胞或全血均可以用作洗涤红细胞的原料细胞 如已在4 冰箱保存 洗涤前从冰箱内取出置室温30 60分钟 2 将三联袋盐水袋主袋上的针头插入红细胞袋的进针座内 把主袋内200ml盐水加入红细胞袋内 充分混匀后 倒流入三联袋主袋内 3 4个袋子分别装于2个离心套筒中 一侧为血袋与空袋 另一侧为两个盐水袋 平衡后 对称放入离心机内 在22 2 以4500 g的离心力离心3分钟 4 离心后将装有血液的血袋悬挂于支架上 把上清和白膜分入空袋内 热合切断与废液相连的塑料管 弃去废液袋5 重复2 3 4 步骤 依次洗涤红细胞3次 6 洗涤红细胞制品在三联袋的末袋内 将与末袋相连的塑料管内充满红细胞 分段热合留样本 用以临床鉴定血型和交叉配血 开放式洗涤法 如无三联盐水袋装置 可以用普通医用生理盐水 在百级超净台内连接洗涤或用无菌连接装置在普通工作间连接洗涤 1 同封闭式洗涤法中1 的要求 2 在超净台上用无菌操作将生理盐水加入被洗涤的红细胞袋内 混匀 3 在22 2
