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1、课题1微生物的实验室培养 专题2 微生物的培养与应用 微生物的种类 病毒细菌放线菌真菌原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 微生物基础知识 阅读课文回答以下问题 1 什么是培养基 它包括哪些类型 2 培养基一般都含有哪些营养物质 此外还要满足哪些要求 一 基础知识 一 培养基 培养基 培养液 是由人工方法配制而成的 专供微生物生长繁殖使用的混合营养液 1 按物理状态来分 培养基可分为固体培养基 半固体培养基和液体培养基 其中固体培养基用于菌种分离 鉴定菌落等 2 按功能来分 可分为选择培养基和鉴别培养基 3 按成分来分 可分为天然培养基和合成培养基 1 培养基的类型和用途 选择培养
2、基 加入青霉素的培养基 分离酵母菌 霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤 次黄嘌呤和胸腺嘧啶加入核苷的培养基 分离杂交瘤细胞 根据细胞生存所需物质的种类和数量 用人工方法模拟合成的 合成培养基主要成分是氨基酸 维生素 碳水化合物 无机盐和其它一些辅助物质 优点 标准化生产 组分和含量相对固定 成本低缺点 缺少某些成分 不能完全满足体外细胞生长需要 合成培养基 天然培养基有血清 血浆 和组织提取液 如鸡胚和牛胚浸液 优点 营养成分丰富 培
3、养效果好缺点 来源受限 成分复杂 影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析 易发生支原体污染 天然培养基 血清中含有 多种蛋白质 白蛋白 球蛋白 铁蛋白等 多种金属离子 激素 促贴附物质 如纤粘蛋白 冷析球蛋白 胶原等 各种生长因子 转移蛋白 不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存 要想使细胞生长和繁殖 还需补充一定量的天然培养基 如血清 液体培养基 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 固体培养基 菌落 菌苔 2 培养基的成分及其作用 水 构成微生物的结构物质 参与生命活动 碳源 提供碳元素的营养物质 用于构建微生物细胞的物质和一些代谢产物 氮源 提供氮元素的营养物质 主要用于合成蛋白质 核酸
4、以及含氮的代谢产物 无机盐 组成重要的化合物 维持细胞渗透压和酸碱度 另外还需要满足微生物生长对pH 特殊营养物质 例如 生长因子 即细菌生长必需 而自身不能合成的化合物 如维生素 某些氨基酸 嘌呤 嘧啶 以及氧气 二氧化碳 渗透压等的要求 二 无菌技术 1 无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中 所有防止杂菌污染的方法 无论是随后将要学到的倒平板 平板划线操作 还是平板稀释涂布法 其操作中的每一步都需要做到 无菌 即防止杂菌污染 只有熟练 规范地进行无菌操作 才可能成功地培养微生物 消毒定义 利用化学或物理方法 杀死大部份致病微生物的过程 区分为高程度消毒 High levelDi
5、sinfection 中程度消毒 Intermediate levelDisinfection 低程度消毒 Low levelDisinfection 三种方式 2 消毒与灭菌的概念及两者的区别 2 灭菌的定义 以化学剂或物理方法消灭所有微生物 包括所有细菌的繁殖体 芽孢 霉菌及病毒 而达到完全无菌之过程 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术 1 煮沸消毒法 100 煮沸5 6min2 巴氏消毒法 70 75 下煮30min或80 下煮15min3 化学药剂消毒法 用75 酒精 新洁尔灭等进行皮肤消毒 氯气消毒水源4 紫外线消毒 1 消毒的方法 3 常用的消毒与灭菌的方法 1
6、 灼烧灭菌2 干热灭菌 160 170 下加热1 2h 3 高压蒸气灭菌 100kPa 121 下维持15 30min 2 灭菌的方法 三 实验操作 1 制备牛肉膏蛋白胨培养基 用于培养细菌 1 计算 称量2 溶化3 调pH pH7 64 过滤 这一步可以省去 5 分装 分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上 以免沾污棉塞而引起污染 分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜 6 加塞7 包扎 操作步骤 8 灭菌 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中 塞上棉花塞 包上牛皮纸 再放入高压蒸气灭菌锅 在压力为100kPa 温度为121 灭菌15 30min 将培养皿用旧报纸包裹 放入干热
7、灭菌箱内 在160 170 下灭菌2h 9 倒平板 待培养基冷却到50 左右时 在酒精灯附近倒平板 倒平板操作见课本 2d后观察平板 无杂菌污染才可用来接种 10 无菌检查 将灭菌的培养基放入37 的温室中培养24 48小时 以检查灭菌是否彻底 倒平板技术 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养基的温度 问题讨论 答 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时 就可以进行倒平板了 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 答 通过灼烧灭菌 防止瓶口的微生物污染培养基 3 平板冷凝后 为什么要将平板倒置 4 在倒平板的过程中 如果不小
8、心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 这个平板还能用来培养微生物吗 为什么 答 平板冷凝后 皿盖上会凝结水珠 凝固后的培养基表面的湿度也比较高 将平板倒置 既可以使培养基表面的水分更好地挥发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 答 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 因此最好不要用这个平板培养微生物 2 纯化大肠杆菌 接种方法有 平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作 将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面 在数次画线后 可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体 这就是菌落 微生物的接种技术 问题讨论 1 为什么在操作
9、的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 答 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 使下一次划线时 接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端 从而通过划线次数的增加 使每次划线时菌种的数目逐渐减少 以便得到菌落 划线结束后灼烧接种环 能及时杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再进行划线 答 以免接种环温度太高 杀死菌种 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 答 划
10、线后 线条末端细菌的数目比线条起始处要少 每次从上一次划线的末端开始 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求 想一想 第2步应如何进行无菌操作 应从操作的各个细节保证 无菌 例如 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯火焰周围等等 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 菌种的保存 1 临时保藏 接种到固体斜面培养基 菌落长成后置于4 冰箱保存 2 长期保存 甘油冷冻管藏法 四 课题成果评价 一 培养基的制作是否合格如果未接
11、种的培养基在恒温箱中保温1 2d后无菌落生长 说明培养基的制备是成功的 否则需要重新制备 二 接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色 形状 大小基本一致 并符合大肠杆菌菌落的特点 则说明接种操作是符合要求的 如果培养基上出现了其他菌落 则说明接种过程中 无菌操作还未达到要求 需要分析原因 再次练习 三 是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同 及时观察记录的同学会发现这一点 并能观察到其他一些细微的变化 这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯 本课题知识小结 典例解析 例1 关微生物营养物质的叙述中 正确的是A 是碳源的物质不可能
12、同时是氮源B 凡碳源都提供能量C 除水以外的无机物只提供无机盐D 无机氮源也能提供能量 解析 不同的微生物 所需营养物质有较大差别 要针对微生物的具体情况分析 对于A B选项 它的表达是不完整的 有的碳源只能是碳源 如二氧化碳 有的碳源可同时是氮源 如NH4HCO3 有的碳源同时是能源 如葡萄糖 有的碳源同时是氮源 也是能源 如蛋白胨 对于C选项 除水以外的无机物种类繁多 功能也多样 如二氧化碳 可作为自养型微生物的碳源 NaHCO3 可作为自养型微生物的碳源和无机盐 而NaCl则只能提供无机盐 对于D选项 无机氮源提供能量的情况还是存在的 如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源 答案 D 例2
13、下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A 防止杂菌污染B 消灭杂菌C 培养基和发酵设备都必须灭菌D 灭菌必须在接种前 B 解析 灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节 A说的是灭菌的目的 因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种 整个发酵过程不能混入其他微生物 杂菌 所以是正确的 B是错误的 因为灭菌的目的是防止杂菌污染 但实际操作中不可能只消灭杂菌 而是消灭全部微生物 C是正确的 因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌 发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的 灭菌必须在接种前 如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死 3 若除去成分 加入 CH2O 该培养基可用于培养 4 表中营养成分共有类 5 不论何种培养基 在各种成分都溶化后分装前 要进行的是 6 右表中各成分重量确定的原则是 7 若右表培养基用于菌种鉴定 应该增加的成分是 固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂 或凝固剂
