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1、湖南师范大学“国家大学生创新性实验计划”项目申请表 2007-2008 年 1 学期项目名称利用转基因斑马鱼研究人RMND5A基因的心脏功能个人申请 团队申请 团队名称RMND5A基因心脏功能研究小组申请经费20000元起止时间2007 年 11 月 至 2008 年 11 月申请人或团队姓名潘旭明王沁陈晓胡雪晴蔡娟年级2005级2005级2005级2005级2005级专业生物基地生物基地生物基地生物基地生物基地联系人陈晓所在院、专业生科院生物基地联系电话13467619157EmailC导师吴秀山职务/职称院长/教授联系电话8872780EmailX计划时数100建议学分2(每人)主体设备斑
2、马鱼养殖系统注射仪显微镜离心机消耗材料经费预算种类斑马鱼饲料DNA试剂盒核酸内切酶原位杂交试剂盒抗体其他试剂测序用量2公斤1个4种1个4种10种10次经费（元）100150015002500800045001900总计（元）20000申请理由（包括自身具备的知识条件：自己的特长、兴趣等）我们团队的每一个成员都对生命科学充满着浓厚的兴趣，总以极大的热情去探索未知的生命之谜。经过两年多的专业学习，我们对生命科学的基础知识有了一定的了解，对其各个领域也有所涉猎。怀着对心脏发育的共同兴趣，我们组建了RMND5A基因心脏功能研究小组，经过大家的仔细思考研究，吴秀山教授的悉心指导，我们决定借助心脏发育实验
3、室利用转基因斑马鱼研究人的RMND5A基因。作为生物基地专业的学生，我们已经具备遗传学、分子生物学、发育学等方面的基本知识，并掌握了相关的基本实验操作技术。五位成员皆能吃苦耐劳，意志坚强，品学兼优，善于思考，有创新意识。其中两人曾分别获专业一等和二等奖学金，四人有多种学生干部经历，有较强的分析问题、处理问题的能力和沟通协调能力。一人在心脏发育实验室已经做过三个多月的前期准备工作，并已熟练掌握质粒载体构建，原位杂交，免疫共沉淀等实验方法和技巧。一人曾在中科院生物物理所感染与免疫中心，学习过基础实验方法，基本功扎实。总之，团队构建合理，人员之间经过长期共同实习，配合默契，具备了一定的科学研究能力。
4、我们所研究的RMND5A基因是一个功能未知的新基因，主要在心脏和骨骼肌中表达，这个实验室在前期曾采用RNA干扰技术，抑制该基因表达，使得斑马鱼围心腔扩大。我们计划建立一个该基因的转基因斑马鱼稳定系，来研究其功能，此方法将会在该基因的进一步研究上有很大优势。经过前期准备，目前实验室已具备我们开展研究所需的RMND5A基因，cmlc2心脏启动子，plres2-egfp质粒载体。项目创新点及方案设计项目创新点：1 RMND5A作为人类一个新基因，主要在心脏与骨骼肌中表达，可能与心脏发育相关，而目前还没有对它的功能进行专门的研究。2 首次利用斑马鱼作为模式动物研究RMND5A这个基因的功能。3 该研究
5、有可能从生物整体水平上，阐明该基因在心脏中的功能。利用转基因斑马鱼研究人RMND5A基因的功能基本方案：1 插入心脏启动子cmlc2于plres2-egfp质粒载体，构建重组质粒。2 将RMND5A基因插入重组质粒多克隆位点，连入载体。3 将cmlc2-RMND5A-ires-egfp质粒片段切下，纯化回收。4 将前一步所得片段注入二细胞期或四细胞期的斑马鱼受精卵中，制备转基因个体。5 观察筛选具有绿色荧光蛋白的个体。6 筛选纯合体后代。7 检测心脏解剖结构等相关指标。8 分析试验数据得出结论。（详细附后）预期成果1成功构建重组质粒，并使用cmlc2-RMND5A-ires-egfp质粒片断，构建转基因斑马鱼稳定系，为进一步相关研究打下基础。2通过检测转基因斑马鱼稳定系，证明RMND5A基因与心脏发育的重要关系，探讨该基因的心脏功能，进一步弄清心脏发育机制，为心脏病的治疗做出贡献。3团队的每一成员都能通过这次活动，巩固专业知识，提高实验技能，培养创新能力和科研素质。实验室意 见 主任签字： 年 月 日导师意见签名： 年 月 日学 院工作组意 见 签字盖章： 年 月 日学校意见签名盖章： 年 月 日
