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1、第一节 概 述 第二节 血脂、脂蛋白 及载脂蛋白测定 一、血脂和血浆脂蛋白 自学 二、脂蛋白代谢紊乱 （一）高脂蛋白血症 血脂含量超过正常称为 高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的形式存 在，故也称为高脂蛋白血症。按发病原因分为 两大类。 1.按表型分类 以Fredrickson（1967）分类 法为基础，经WHO（1970）修订的分类系统， 根据血清TC、TG、外观和脂蛋白电泳图谱，将 其分为6型。 第一节 概 述 （1）型高脂蛋白血症 又称高乳糜微粒 血症。是一种常染色体隐性遗传病。由于 LPL缺损或LPL活化因子（ApoC）缺损所 致。婴儿期即可发生，但罕见。其生化检查 特征： 4冷置试验
2、，血清上层为奶油状，下 层清亮。 血清TG，达11mmol/L以上，血清 TC正常或轻度。 血清LPL活性。 血清脂蛋白电泳，CM。 （2）a高脂蛋白血症 又称高-脂蛋白血 症或高胆固醇血症。属常染色体显性遗传，有 明显的家族史。病因LPL受体缺损，杂合子型 发生频率为1/500，纯合子型发生频率为 1/100000。其生化检查特征： 4冷置试验，血清外观清亮透明。 血清TC，15.6mmol/L尤其是LDL- C，TG正常。 血清脂蛋白电泳，-LP。 临床表现，中青年常伴有冠状动脉硬化， 结局为心肌梗塞。 （3）b型高脂蛋白血症 在a型基础上伴有VLDL（高 LDL+VLDL血症），病因不明
3、。其生化检 查特征： 4冷置试验，血清外观清亮或微混 。 血清TC，TG。 血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP 。 （4）型高脂蛋白血症 又称宽-脂蛋 白血症。属常染色体显性遗传病，发病率 1/10000，病因，ApoE异常，与相应受体结 合率。其生化检查特征： 4冷置试验，血清外观混浊，后形 成蜡样黄色薄膜。 血清TC，TG。 血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP ，IDL。融合形成宽区带。 （5）型高脂蛋白血症 又称高前-脂蛋 白血症或家族性高甘油三脂血症。属常染色体 显性遗传病，较常见，我国原发性高脂蛋白血 症中一半属于此型。病因，ApoA2异常。其生 化检查特征： 4冷置试验，血清外
4、观混浊。 血清TG，TC正常或稍。 血清脂蛋白电泳，pre-LP。 临床表现，多见于中年人易发生冠心病。 （6）型高脂蛋白血症 属常染色体 显性遗传病，病因不详，可能由几种遗传 缺陷所致，较罕见。生化检查特征： 4冷置试验，血清上层为奶油状 ，下层混浊。 血清TG，TC。 血清脂蛋白电泳，CM，pre- LP。 2.按是否继发于全身性疾病分类 分 为原发性和继发性高脂血症。常继发于糖 尿病、肝病、肾病、肥胖以及过量饮酒， 成人发病率为3%5%。 3.高脂血症的基因分型法 一部分高 脂血症患者存在单一或多个遗传基因的缺 陷，具有明显的家族聚集性，有明显的遗 传倾向。 （二）低脂蛋白血症 主要有四
5、种类型 1.低LDL血症 是一种常染色体显性遗传病 ，病因ApoB100低下，血浆LDL减少，TC。 2.无LDL血症 罕见的常染色体隐性遗传病 ，病因ApoB100、B48缺损，血浆中无LDL， TC。 3.低HDL血症 病因不详，血清TG，动脉粥 样硬化、冠心病的发病率高。 4.无HDL血症（Tangier病）罕见的常染色体 隐性遗传病，ApoA、A缺损，血浆TC， HDL-C。 血脂测定方法很多，目前临床实验 室基本检验项目有：血清外观分析，TC ，TG，HDL-C，LDL-C测定。进一步 可做HDL亚组分，IDL，Apo（如 ApoA、ApoB100），Lp（a）及脂蛋白 电泳，LPL
6、，LCAT测定，为保证分析 结果的可靠性，标本的采集应在餐后 12h以上。 第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定 一、血清外观分析（血清冷置试验） 混浊 （TG增高） 下层浊（VLDL增高）型 下层清（VLDL正常）型 均匀混浊 （VLDL） TC正常 型 上层奶油样 （CM） TC增高 a型 TC正常 正常人 清亮 （TG正常） TC b，型 空 腹 血 清 测TC 4过夜 测TC 二、血清总胆固醇测定 胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重 要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素 D3胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括FC （1/3）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬 化有密切关系，故胆固醇测
7、定是最常用的实 验室检测项目之一。 TC测定方法很多，约200多种，分为化 学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色 谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。 （一）化学测定法 主要有两类 1.Liberman-Burchard反应 简称L-B反 应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆 烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生 成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。 2.Zak反应 胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱 水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后在Fe3+存在 下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度 较L-B反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂 腐蚀性极大，不能用于自动化分析。 （二）酶法 胆固醇酯 胆
8、固醇 脂肪酸 胆固醇 O2 胆烷-4-烯-3酮 H2O2 H2O2 4AAP 酚 红色亚胺醌 H2O CEH ChOD POD 试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活 性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活CEH，表面活性剂 促进胆固醇从脂蛋白中释放。 酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合 于自动化分析，但也存在有一些不足，CEH对胆固 醇水解不完全，表面活性剂影响CEH活性，黄疸血 清中过高的胆红素可还原H2O2使结果偏低。 【参考范围】3.105.70mmol/L 【临床意义】血清TC含量受年龄、性别 、饮食和运动等因素的影响。20岁以上随 年龄而，70岁以后则有下降趋势。20 40岁阶段男性高
9、于女性，但女性绝经后则高 于男性。城市人群高于农村人群，与饮食 和运动有关。脑力劳动者高于体力劳动者 。 病理性高胆固醇血症 原发性高胆固醇 血症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲 状腺功能减退。 病理性低胆固醇血症 严重贫血、甲亢 、营养不良。 三、血清甘油三脂测定 TG是有一分子甘油与三分子脂肪酸 组成的化合物，主要存在于VLDL和CM中 ，临床化学中往往以测定甘油代表TG的含 量。TG的测定方法很多，如气相色谱法、 高效液相色谱法、红外分光光度法。但上 述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般 只用于研究工作中。临床实验室主要用化 学法和酶法。 （一）化学法 基本步骤可归纳为四步 1.提取：
10、甘油三脂的提取 采用合适的溶 剂，使脂蛋白变性提取TG，同时去除干扰物质 (磷脂、游离甘油、葡萄糖等),常用方法有： （1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭 土）吸附。 （2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。 （3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提， 免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替 正壬烷。应用较广。 2.皂化：甘油三脂的水解 一般都采 用KOH乙醇或KOH异丙醇溶液，60， 515min可使TG完全水解。 3.氧化：甘油的氧化 最常用的氧化 剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成 甲醛、甲酸。反应受-磷酸甘油、葡萄糖 、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此 类物质的干扰。 4.显色：显色测
11、定甲醛。常用方法 有： （1）甲醛与变色酸（4.5-二羟-2.7-萘 二磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色 化合物。（570nm） （2）甲醛与乙酰丙酮在氨的存在下 缩合成黄色的3.5-二乙酰-1.4-二氢-2.6-二 甲基吡啶。（420nm） （二）酶法 常用的有： 1.磷酸甘油氧化酶法（GK-GPOD-POD法） TG H2O 甘油 FA 甘油 ATP 3-磷酸甘油 ADP 3-磷酸甘油 O2 磷酸二羟丙酮 H2O2 H2O2 4-AAP 酚 红色亚胺醌 H2O 试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽， 胆红素、维生素C可消耗H2O2使结果偏低。 LPL GK GPOD POD 2.乳酸脱氢酶法（
12、GK-PK-LDH 法） TG H2O 甘油 FA 甘油 ATP 3-磷酸甘油 ADP ADP 磷酸烯醇式丙酮酸 ATP 丙酮酸 丙酮酸 NADHH+ 乳酸 NAD+ 3.甘油氧化酶法 第一步消除血清中原有的甘油： LPL GPOD PK LDH 游离甘油 O2 甘油醛 H2O2 GlyOD H2O2 EMAE 无色物质 EMAE称N-乙基-N-（3-甲基）-N-乙酰乙二 胺。是一种还原剂，灵敏度比酚高。第二步测定 甘油三脂水解释放的甘油： TG H2O 甘油 FA 甘油 O2 甘油醛 H2O2 H2O2 4-AAP EMAE 有色化合物 POD GlyOD LPL POD 【参考范围】0.561.70mmol/L 【临床意义】血清TG一般随年龄增长而 升高，体重超标者往往偏高。 1.病理性增高 原发性高脂蛋白血症、 肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、妊 娠后期。 2.病理性降低 甲亢、肾上腺皮质功能 减退、严重肝功能损伤。 四、血清（浆）脂蛋白测定 （一）血清脂蛋白电泳 临床实验室常用的支持介质有醋酸纤 维薄膜和琼脂糖凝胶。 1. 血清脂蛋白醋酸纤维薄膜电泳 以醋 酸
