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1、<p><p>艾滋病哨点监测 样品采集及实验室检测 江苏省疾病预防控制中心 徐晓琴 2012.3.20 依 据 2006.9. 2006.9. 江苏省艾滋病检测工作管理办法江苏省艾滋病检测工作管理办法 2009.9 2009.9 全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范 2011.9 2011.9 丙型肝炎病毒实验室检测技术规范（试行丙型肝炎病毒实验室检测技术规范（试行 ） 艾滋病检测实验室 检测实验室：有资质的HIV检测实验室 应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求 血清学实验室或检测区域应分为清洁区、 半污染区和污染区 掌握原则、灵活运用；发挥
2、资源、联合检 测； 建筑条件是基础、安全意识是关键 样品的采集和处理 为样品制定唯一性编码，保证其唯一性、可溯源性。 应使用专门的样品记录本或登记表记录样品及信息。 采集抗凝血时，建议用EDTA-K2（K3）、枸橼酸钠的 抗凝管，不用肝素抗凝管。 血浆 1500-3000r/min离心15min，吸上层血浆。 血清 室温自然放置1-2h，待血液凝固、血块收缩后 1500-3000r/min离心15min，吸上层血清。 淋巴细胞富集液 1500-3000r/min离心15min，吸取 血浆层下的淋巴细胞富集液。 样品的保存 用于抗体检测的血清或血浆样品，短期（1周）内 进行检测的可存放于28，一
3、周以上应存放于- 20以下。 用于核酸检测的血浆和血细胞样品4天内进行检测 的可存放于4，3个月以内应存放于-20以下， 3个月以上应置于-70以下。 艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及 时送确证实验室，筛查阴性样品，可根据具体需 要决定保存时间。 样品的运送和接收 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况 外一般不运送全血。 血清和血浆样品应在2?8条件下由专人运送。 含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备 的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员 打开，用后的包裹应进行消毒。 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏， 如发现溢漏，对样品管和盛器消毒并做好相应处理
4、。 运送感染性材料必须有记录。 接收样品时应填写样品接收单。 筛查试验呈阳性反应样品的转送 需要核对身份，补充个人信息（如真实姓 名和身份证号码） 采集第二份血样。 样品 + 送检单，送当地艾滋病筛查中心实 验室（或确证实验室）待检。 哨点监测中样品的 采集和处理 哨点样品的采集-抗凝血样品 编码：将调查对象编号标签贴在真空采血 管上 （抗凝管建议使用EDTA抗凝剂）。 样品量：抽取每名调查对象抗凝静脉血5- 8ml。 采样方法：用真空采血器（或一次性注射 器）抽取静脉血至真空采血管中，反复轻 摇混匀（来回轻轻颠倒7-8次）。 哨点样品的分装 样品分装：将血液静置2030分钟或3000转 15
5、分钟离心后用一次性移液管（或加样枪）小 心将血浆均分至3支样品冻存管，1管用于哨点 各指标检测，另2管冻存待用；最好留1管淋巴 细胞富集液 （注意：在24小时内对标本进行 处理以防标本溶血）。 样品编码：所有样品按照性艾中心的统一要求 进行唯一性编码-12位哨点编码。 哨点样品的保存 分装的3管血浆管和1管淋巴细胞富集液或剩 余的血细胞全部冻存于-20度备用。 所有样品至少保存至调查结束后12个月。 保存和运送由专人负责，做好登记，保证生 物安全。 采样中的生物安全 所有的血液、血清、血浆，均应视为有潜在传 染性，都应以安全的方式进行操作。 采血时一定要注意安全，采血用一次性注射器，谨 慎操作
6、，防止发生刺伤皮肤和造成外界污染。 重点关注： n右侧划为污染区，左侧为洁净区 n将针头弃入专用容器内，并将一次性纸垫等放入垃 圾桶，绝对禁止用手卸下针头 哨点监测中的检测 哨点检测 采用匿名无关联（不出具个体检测报告） 或实名有关联（出具个体检测报告）策略 检测HIV抗体、梅毒抗体、 HCV抗体。 哨点检测 HIVHIV抗体、梅毒、抗体、梅毒、HCVHCV抗体检测及感染抗体检测及感染 状态判定状态判定 执行哨点监测工作的实验室必须是依据 江苏省艾滋病检测工作管理办法验收合 格的艾滋病检测实验室。 HIV抗体检测程序 1、初筛：所有样品使用酶免试剂（ELISA-1） 进行筛查，结果阴性者判为阴
7、性，不再进行 复检，结果阳性者进入复检程序。 2、复检：所有初筛阳性的样品使用另一种不同 原理或厂家的酶免试剂(ELISA-2)进行复检， 两次检测结果均呈阳性时，即可判定HIV抗体 阳性，用于监测结果的报告。复检结果如为 阴性，则判为阴性结果。 HIV抗体检测 以监测为目的的检测，所有监测对象均报告HIV 抗体两次ELISA检测结果。 如需将检测结果通知本人，HIV抗体阳性结果的 判断应符合全国艾滋病检测技术规范（2009 年版）相关要求。 如对复检阳性者进行了确诊试验，则同时报告两 次ELISA检测结果和确证实验结果。 HIV抗体检测的要点 根据目的选择检测方法及检测策略。 严格遵守实验室
8、标准操作程序（SOP）。 注意防止样品间交叉污染。 注意安全防护。 严防张冠李戴。 流程图 容易出现的问题 1、哨点问卷编号在样本传递过程中容易改变和丢失 ：哨点问卷编号送样实验室编号 2、阳性样本信息中，与BED检测密切相关的几个影 响因素缺失较多 （1）是否为已知的HIV感染者（既往感染者） （2）CD4细胞数 （3）是否使用抗病毒药物 （4）是否为AIDS病人 3、填写信息存在不规范和不统一的情况 4、注意阴性人群背景信息的收集 质量控制 样品质控 n所有哨点样品的采集、运输、检测及保存必须严格按照 “全国艾滋病检测技术规范”执行。样品采集时间按照监 测工作要求执行。 n所有哨点新报告的
9、HIV阳性样品，保存在-20以下，按 照要求，由确证中心实验室统一收集，开展BED检测并 将1管寄至国家艾滋病参比中心。 n所有新报告的感染者样品，统一保存在省确证中心实验 室，国家参比室不定期抽检。 试剂质控：试剂的接收、保存、使用各环节 实验质控 质量控制 外部考核及检查 n确证中心实验室每年至少接受二次BED能力验证（PT），通过考核后方 可开始检测。 n参加哨点样品检测的艾滋病检测实验室必须通过HIV-1抗体检测能力验 证考核。 n国家艾滋病参比中心对确证中心实验室不定期进行现场督导检查，核对 新发感染检测样品库、数据库及实验原始记录。 n省CDC对哨点样品的采集、保存、检测及运输，不
10、定期进行现场督导及 检查，核对原始记录，并将结果报给中国CDC。 数据质控 n需要填写的数据内容，严格按照中国疾控性艾中心提供统一的HIV-1新 发感染检测样品信息和结果报表（附件1、2、3、4）。 n须指定专人核对哨点阳性样品和病例报告阳性样品的实验室检测结果及 样品背景信息。 n全国新发感染检测/监测数据的处理，由性艾中心国家参比室和流病室同 时进行核对，确保数据无误。 梅毒检测 1、初筛：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）进 行梅毒特异性抗体检测。 2、复检：采用非特异性快速血浆反应素环状卡 片试验（RPR）方法或梅毒甲苯胺红不加热 血清试验诊断试剂（TRUST）检测ELISA阳 性血清
11、中梅毒反应素。 梅毒检测 ELISA和RPR/TRUST检测操作方 法参照试剂说明书的要求执行。 HCV抗体检测 1、初筛：所有样品使用酶免试剂（ELISA-1） 进行筛查，结果阴性者判为阴性，不再进行复 检，结果阳性者进入复检程序。 2、复检：所有初筛阳性的样品使用另一种不同 原理或厂家的酶免试剂(ELISA-2)进行复检， 两次检测结果均呈阳性时，即可判定HCV抗体 阳性，用于监测结果的报告。复检结果如为阴 性，则判为阴性结果。 HCV疫情监测相关的检测策略 HCV临床诊断筛查检测流程 哨点标本检测指标 所有所有哨点哨点标本均需进行以下检测标本均需进行以下检测 1 1、HIVHIV抗体抗体
12、 2 2、梅毒特异性抗体、梅毒特异性抗体 3、非梅毒螺旋体抗原血清试验 (ELISA(ELISA阳性样品阳性样品) ) 4 4、丙肝抗体、丙肝抗体 HIVHIV抗体阳性的样品需进行抗体阳性的样品需进行BEDBED检测。检测。 部分强戒所部分强戒所HCVHCV抗体阳性样品需送省中心上送国家抗体阳性样品需送省中心上送国家CDCCDC 进行丙肝相关检测。进行丙肝相关检测。 哨点耗材、试剂供应 耗材：各市疾病预防控制中心统一采购、发 放 试剂：由江苏省疾病预防控制中心统一配发 。 哨点检测试剂厂家 品名2011（国家级级哨点）2012（所有哨点） HIV初筛试剂筛试剂 （ELISA）珠海丽丽珠珠海丽丽
13、珠 HIV复检试剂检试剂 （ELISA）北京万泰北京万泰 梅毒初筛试剂筛试剂 （ELISA）珠海丽丽珠珠海丽丽珠 梅毒初筛试剂筛试剂 （TRUST ） 北京万泰北京万泰 丙肝初筛试剂筛试剂 （ELISA）珠海丽丽珠珠海丽丽珠 丙肝复检试剂检试剂 （ELISA）北京万泰北京万泰 哨点检测试剂供应量 HIV抗体初筛ELISA：5盒（96人份/盒）/点 HIV抗体复检ELISA：1盒（96人份/盒）/点 梅毒抗体初筛ELISA：5盒（96人份/盒）/点 梅毒复检TRUST：1盒（120人份/盒）/点 HCV抗体初筛ELISA：5盒（96人份/盒）/点 HCV抗体复检ELISA：1盒（96人份/盒）/
14、点， 吸毒点2盒（96人份/盒）/点 HIV抗体快检试剂 ： MSM国家级哨点，每个点补充200人 份雅培快检试剂 2012年第一批全省检测试剂使用说 明 公安司法筛查：HIV抗体 新创ELISA 哨点检测 ： VCT： HIV抗体-新创ELISA HIV抗体快速-雅培 MSM干预-100人份快检试剂/市 美沙酮： HIV抗体-新创ELISA HCV抗体-万泰ELISA 梅毒-万泰ELISATRUST 尿吗啡艾康 意外和事故处理 发生意外事故时，应立即进行紧急处 理并报告。 确定消毒处理的程序。 质量控制 哨点检测工作中的质量控制按日常检测工作 中的要求执行。 省疾病预防控制中心、各市疾病预防控制中 心共同承担检测方面的质量控制及督导工作 。 两点建议 哨点监测中的阳性样品需进行个案诊断时 必须重新采样，核实清楚信息，双份样品 送检。 日常工作中发现的HIV抗体阳性的个案， 在做第一次随访时建议再次采集一份血标 本，送实验室筛检。 谢 谢！ </p></p>
