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1、作者:王A 回 中国药科大学硕士毕业论文 摘要 燕窝是金丝燕( C o l l o c a l i a ) 用唾液与 少量羽毛混合粘接所筑成的巢窝， 多产于东南亚等国家。 燕窝分为三大类: 宫燕、 毛燕和血燕。 燕窝传统上被 看作名贵滋补品和高级宴席佳肴， 富含蛋白 质、 糖类和矿物质， 其主要成分 是唾液酸糖蛋白。 我国每年进口 燕窝及其制品以 亿元计。 由于燕窝价格昂 贵， 国内外一些不法商人利用掺假燕窝及其制品牟取暴利， 使消费者蒙受巨大损 失。 掺假物一般是价廉的银耳、砂爆猪皮、明胶、 琼脂和蛋清等。 燕窝的鉴 定历来沿用简单的物化方法或经验方法，如观察表面特征、溶涨性、泡沫、 染色、
2、 灼烧现象等， 需多种方法同时使用以提高可信度， 而无专属的定性定 量测定方法。 本论文在燕窝的唾液糖蛋白 寡糖链成分分析的基础上， 建立了 燕窝中四 种醛糖 ( 半乳糖、 甘露糖、 N 一 乙酞葡萄糖和N 一 乙酞半乳糖) 的G C 和H P L C 分析检测方法和酮糖 ( 唾液酸) 的分析检测方法。 所建立的单糖图谱均具有 很强的特征性， 直观性和一致性，不仅能够鉴别燕窝的真伪，还能对燕窝中 的单糖含量进行定量测定。 ( 一)半乳糖、甘露糖、N 一 乙酞葡萄糖和N 一 乙酞半乳糖的G C 和H P L C 分析 本论文应用两种方法测定了燕窝中四 种醛糖的摩尔比， 探讨并改进了单 糖的衍生化
3、方法， 比较了其优缺点。 其中毛细管气相色谱法应用硫酸甲醇解、 乙酞化的方法， 首先将样品中寡糖链解离为单糖的甲基糖昔， 再乙酞化使之 转化为四乙酞基甲毗喃糖， 避免了多重峰的产生， 测定了 燕窝中四 种单糖的 摩尔比， 但操作比较繁琐。 而高效液相色谱法采用三氟乙酸水解，1 一苯基 - 3 一 甲基一 5 一 毗哇琳酮 ( P M P )甲醇溶液衍生化方法，对燕窝中的四种醛糖进 作者:王慧 回 中国药科大学硕士毕业论文 行了分离分析。 此方法具有分辨率好、 灵敏度高、 操作简便等特点， 不仅可 以测定燕窝中单糖的摩尔比， 还可以对燕窝中各单糖进行含量测定和高灵敏 度检测。以上两种方法也都为真
4、假燕窝的鉴别提供了一种行之有效的方法。 ( 二)唾液酸的分析 燕窝中另外一种主要的单糖 ( 唾液酸) 属于酮糖， 无法使用上述两种衍 生化法对其进行分析。 本论文建 立了唾液酸的H P L C - U V 测定方法。 采用较 温和的水解条件 ( 0 . 5 m o 1 / 1 硫酸氢钠溶液) ， 以 邻苯二氨盐酸盐为衍生化试 剂， 8 0 水浴中加热4 0 m i n ，灵 敏快速方便地测定了 燕窝中的唾液酸，并系 统地完成了方法学研究。 ( 三)本人在研究生期间做的一些其它工作 采用顶空毛细管气相色谱法， H P - 5柱 ( 3 0 m X 0 . 5 3 m m X 5 ij 耐， 氢火
5、 焰离子化检测器 ( F 工 D ) ,程序升温的方法 ， 测定了 原料药尼麦角林中7 种 残留溶剂甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、二氯甲烷、 三乙胺和甲苯的含量。 经方 法学验证，该方法灵敏度、准确度均达到有机溶剂残留量的检测要求。 制定了抗癌平丸的质量标准。 采用H P L C法测定了异嗦皮吮的 含量， 并鉴别了 抗癌平丸中的脂蟾毒配基。 测得异嚓皮吮的 线性范围为 0 .2 0 3 6 u g - 2 .0 3 6 u g : 含量为0 .3 平均回收 率为9 7 .9 3 % , R S D 为 2 2 % ( n = 5 ) 。方法准确、简单、专属性强，能有效地控制抗癌平丸的质 量。 作者:
6、王1 回 中国药科大学硕士毕业论又 Ab s t r a c t E d i b l e b i r d s n e s t ( E B N ) i s e s s e n t i a l l y w o v e n b y C o l l o c a l i a fr o m g e l a t i n o u s s t r a n d s o f i t s s a l i v a m i x e d w i t h m i n o r f e a t h e r s .T r a d i t i o n a l l y ,E B N h a s b e e n c o n s i d
7、e r e d n o u r i s h i n g a n d a b o o s t e r o f h e a l t h f o r t h e s i c k a n d a g i n g . E B N c o n t a i n s p le n t y o f p r o t e i n ,c a r b o h y d r a t e a n d h e x o s a m i n e . E B N i s s o e x p e n s i v e t h a t s o m e f a k e E B N i s s o l d o n th e m a r k e
8、 t .T h e r e w a s n o p r e v i o u s d e t e c t i o n m e t h o d a v a i l a b l e t o t e s t E B N s p e c i f i c a l l y . E m p i r i c a l m e a s u r e s s u c h a s v i s u a l e x a m i n a t i o n ,b u rni n g t e s t s , a n d c o l o u r i n g c h e c k s h a v e b e e n p r e v i o
9、 u s l y u s e d .T h e r e i s n o s p e c i f i c m e t h o d s t o t e s t r e a l a n d f a k e E B N . T h i s a r t i c l e e s t a b l i s h s E B N d e t e c t i o n me t h o d t h a t i s b a s e d o n t h e i d e n t i fi c a t i o n o f E B N o l i g o s a c c h a r i d e c h a i n c o m
10、p o s i t i o n .G C a n d H P L C w e r e u s e d t o d e t e c t f o u r m o n o s a c c h a r i d e s ( D - Ma n n o s e , D - G a l a t o s e , N - a c e t y l - g a l a c t o s a m i n e , N - a c e t y l - g l u c o s a m i n e ) . H P L C w as u s e d t o d e t e c t s i a l i c a c i d ( N -
11、 A c e t y l n e u r a m i n i c a c i d ) . T h e c h r o m a t o g r a m i s i n t u i t i o n i s t i c a n d c h r a c t e r i s t i c .T h e m e t h o d s c a n b e u s e d t o i d e n t f y r e a l a n d f a k e E B N a n d d e t e r mi n e t h e c o n t e n t s o f mo n o s a c c h a r i d e
12、s i n E B N. 1 T h e a n a l y s i s o f f o u r a l d i t o l m o n o s a c c h a r i d e s c o n s t i t u t e i n E B N. T h i s a r t i c l e e s t a b l i s h s GC a n d HP L C me t h o d s t o d e t e r mi n e f o u r mo n o s a c c h a r i d e s a n d c o m p a r e s t h e t w o m e t h o d s
13、 .Me t h a n o l y s i s a n d a c e t y l i z a t i o n w e r e u s e d i n G C . F i r s t , E B N o l i g o s a c c h a r i d e c h a i n s w e r e h y d r o l y z e d i n t o m e t h y l - i n d i c a n , t h e n d e r i v a t e d i n t o t e t r a c e t y l - m e t h y - p y r a n o s e . f o u
14、 r m o n o s a c c h a r i d e s i n E B N w e r e d e t e r mi n a t e d q u a l i t a t i v e l y a n d q u a n t i t a t i v e l y , b u t t h e G C m e t h o d w a s a l i tt l e 作者:王i tr .1a 中国药科大学硕士毕业论文 f u s s y . I n t h e H P L C m e t h o d , t h e s a m p l e w a s h y d r o l y z e d fi
15、s rt ly b y 2 m o l / L t r i fl u o r o a c e t i c ， t h e n d e r i v a t e d b y 1 - p h e n y l - 3 - m e t h y l - 5 - p y r a z o l o n e ( P MP ) . F o u r m o n o s a c c h a r i d e s c o u l d b e s e p e r a t e d c o m p l e t e l y .T h e m e t h o d h a s t h e c h a r a c t e r i s t
16、 i c o f g o o d s e p e r a t i o n ,h i g h s e n s i t i v it y a n d c o n v e n i e n t o p e r a t i o n . 2 T h e a n a l y s i s o f s i a l i c a c i d i n E B N . T h e E B N g l y e o p r o t e i n s w e r e h y d r o l y z e d i n m i l d a c i d ( 0 . 5 mo l / L N a H S 0 4 ) a n d d e r i v a t e d w i t h c - p h e n y - l e n e d i a m i n e 2 H C 1 ( 2 0 m g / m l O F D i n 0 .2 5 m o l / L N a H S O 4 ) a t 8 0 0C f o r 4 0 m i n . T h e O P
