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1、 11 陕西中医学院附属医院( 陕西咸阳 712083) ; 21 第四军医大学; 31 陕西中医学院 天佛参口服液治疗中晚期恶性肿瘤的 临床与实验研究 孔平孝1 陈光伟1 王希胜1 朱德生2 刘文英2 娄清林2 李新民3 内容提要 目的: 观察天佛参口服液( TFS) 对中晚期恶性肿瘤的临床疗效并探讨其作用机理。方法: 对 用 TFS 治疗的 71 例恶性肿瘤患者按实体瘤疗效标准进行疗效分析, 评定其生存质量、 3 年存活率及免疫功 能的变化。并经实验用集落形成法测定对人胃癌( MGC803) 细胞、 人肝癌( SMMC7721) 细胞、 小鼠乳腺癌 ( EMT6) 细胞肿瘤克隆原细胞的抑制
2、作用和应用以上 3 种肿瘤染料排斥实验测定对肿瘤细胞生长率的影 响。结果: 临床观察 71 例患者总缓解率为 4511% , 有效率为 7118% , 生存质量改善, 机体免疫力增强, 治疗 1、 2 及 3 年的生存率分别为 7815% 、 3815% 及 1018% , 中位生存时间 2412 个月。实验研究表明, TFS 不但 有直接杀伤肿瘤细胞的作用和抑制单个细胞克隆的增殖能力; 并且具有广谱的抗肿瘤作用和一定的量效关 系, 与对照药物比较差异有显著性( P 10 分者为降低, 增加或 减少 115kg 者为增加, 减少 115kg 者为降低, 增加或减少 0105) 。结果 显示经
3、T FS 治疗后淋巴细胞转化率、 E -玫瑰花环形成 率、 NK 细胞活性及 IL -2 活性均有提高( P 0101, P 0105) 。 表 2 51 例患者治疗前后各项免疫指标比较 ( x ? s) 例数 淋巴细胞转 化率( % ) E -玫瑰花 形成率( % ) NK 细胞 活性( % ) IL - 2 活性 ( OD 值) 治前 51 36141? 113536113? 712417153? 11540177? 0102 治后 5148167? 1162*47124? 8132*33121? 1168*1112? 0103* 注: 与治疗前比较, * P 0105, * P 0101
4、 315 随访结果 本组随访患者最短 3个月, 最长 为 36 个月, 平均 1616 个月, 随访率 9115% ( 65/ 71 例) 。治疗后生存 1 年以上者 51 例, 2 年以上者 25 例, 3 年者 7 例, 分别占 7815%, 3815% 和 1018%。中 位生存时间 2412 个月。 316 毒副反应 根据毒副反应评价标准 ( 8) 分为 0 级。TFS 为 0 级, 末梢血象, 心、 肝、 肾等脏器功 能未见异常改变。 实 验 研 究 1 材料和方法 111 细胞 株 人胃癌 MGC803细胞, 人肝癌 SMMC7721细胞, 小鼠乳腺癌 EMT6细胞, 由第四军医
5、大学中心实验室提供。 112 药物 TFS 每毫升含生药 215g, 以 RP - MI1640培养液稀释并将其调至 pH710 712 之间; 阴性 对照药物选用 RPMI1640培养液; 阳性对照药物选用天 仙胶囊( 吉林长白山制药厂生产, 批号为 910714) , 同 样以 RPMI1640培养液将其稀释过滤后提取药液并调 至pH710 712 之间, 同时过滤除菌。将 TFS 做成 6 个稀释度为原液( 215g/ ml) 的 1/ 10 倍、 1/ 100 倍、 1/ 1000 倍、 1/ 10 000 倍、 1/ 100 000 倍, 每个稀释液做 10ml 备用; 天仙胶囊也同
6、时做 6 个稀释度, 取天仙胶 囊12 粒将其溶于 RPMI1640中制备成为 12ml 即为原 液( 215g/ ml) , 再稀释为 1/ 10 倍、 1/ 100 倍、 1/ 1 000 倍、 1/ 10 000倍、 1/ 100 000倍。 113 试剂及设备 Giemsa 染液( 北京化工厂, 批 #428#中国中西医结合杂志 2001年 6 月第 21 卷第 6期 号 780826) , 014% 台盼蓝染液( 上海化学试剂分装厂, Chroma进口分装 85- 91- 05) , 0125% 胰蛋白酶消化 液1DLFco 进口分装( 上海采购站分装) 2, RPMI1640粉 购
7、自( USA Sigma) , 按其要求配制 RPMI1640培养液, 其 中含氢离子缓冲剂 HEPES, 购自( USA Sigma) , 最终 使用浓度为 10mmol/ L。CO2培养箱( 购自 USA For - ma scientific) : 超净工作台( 购自苏州净化设备厂) ; 倒 置显微镜( 购自日本 Olympus) ; 离心机( 购自北京医用 设备厂) 。 114 染料排斥法实验步骤 分别取生长良好的 MGC803细胞, SMMC7721细胞, EMT6细胞经胰酶消化 离心, 计数细胞浓度调至 1 104/ ml, 分别加入 25ml 培养液中, 每瓶 4ml, 即每瓶细
8、胞数为 4 104。每种细 胞为 1 组, 而每个药物稀释度为 1 剂量组, 每个剂量组 设对照药物, 每个剂量组为 3 瓶。将每个稀释度的药 物 40ml 分别加入相应各个剂量组的培养液瓶中。在 含 5% CO237e 培养箱中培养 4 天。4 天后分别取各 瓶细胞经胰酶消化后加 RPMI1640吹打均匀, 取细胞悬 液014ml 加 014% 台盼蓝染液 011ml, 室温内作用 5min, 以血细胞计数板计活细胞数, 本染色为活细胞, 死细胞呈蓝色。 115 集落形成法测定药物对肿瘤克隆原细胞抑 制实验方法 分别取 MGC803、 SMMC7721、 EMT6对数 生长期的肿瘤细胞, 经
9、胰酶消化, 离心, 台盼蓝染色计 数, 调至 500 个/ ml 活细胞。取 15ml 培养瓶, 每瓶中 加细胞悬液 2ml, 即 1000 个活细胞, 并分别加不同受 试药物 20Ll 摇匀。在 5% CO237 e 培养箱中培养 7 天。弃培养液, 用 Giemsa 染液染色, 镜下计数含有 50 个细胞以上的集落。 116 观察指标 求出各浓度组的生长率, 绘制实 验组与对照药物组的生长率曲线。生长率= 各实验组 活细胞数/ 对照组活细胞数 100% 。凡超过 50 个细 胞的团块为一个集落, 计算各不同浓度组集落形成率, 并绘制细胞集落形成率曲线。集落形成率= 集落形成 数/ 所接种细
10、胞数 100% 。 2 结果 211 TFS 对细胞生长率的影响 见图 1 3。如 图 1 3 可看出细胞生长率随着 TFS 药物对数浓度的 增加而呈下降趋势, 经统计学处理呈高度负相关( r 值 018 017 之间, P 0101) , 与天仙胶囊组相差显著( P 0105) 。TFS 对 MGC803细胞, SMMC7721细胞, EMT6 细胞半数抑制浓度( LC50) 分别为 4Ll/ ml、 6L l/ ml、 3Ll/ ml, 而对照组药物对上述三种细胞 LC50分别为 6Ll/ ml、 8Ll/ ml、 5L l/ ml。 212 TFS 对肿瘤细胞集落形成的影响 见图 4 6
11、。TFS 具有抑制细胞集落形成的能力, 随着药物 浓度的增加对集落形成抑制率也相应增加, 呈现正相 关, 而与细胞集落形成率呈负相关, 与对照药物相差显 著( P 0105) , 但其 LC50均小于 10Ll/ ml, 提示有进一 步实验的价值。 图 1 MGC803生长曲线 图 2 SMMC7721生长曲线 图 3 EMT6生长曲线 图 4 MGC803细胞集落形成率曲线 图 5 SMMC7721细胞集落形成率曲线 图 6 EMT6细胞集落形成率曲线 #429#中国中西医结合杂志 2001 年 6 月第 21卷第 6 期 讨 论 恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的三大疾病之 一, 由于其病因不清, 早期症状隐匿等, 临床确定诊断 病情多已到中晚期, 外科治疗多不易根除, 且易复发, 特别转移较早, 治疗更为困难。我们根据中医/
