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1、山东大学 博士学位论文 小儿先天性肾积水粘附分子表达及核素肾动态显像评价肾功能 的研究 姓名：姜立新 申请学位级别：博士 专业：小儿外科 指导教师：郭宗远 20040326 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签日期：丝! 竺! 呈：三2 ) 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关
2、部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 者籼辑 日期：塑兰! 主：当 小儿先天性肾积水粘附分子表达及核素肾动态显像 评价肾功能的研究 专业 博士研究生 博士生导师 中文摘要 小儿外科 姜立新 郭宗远 小儿先天性肾积水是危害儿童健康的泌尿系统常见畸形。随着自然病程 的发展，肾盂积水加重，肾皮质变薄，肾功能逐渐减低，直至消失。病理学 检查见肾小球、肾小管等结构紊乱消失，肾问质代之以丈量的纤维组织。从 正常肾组
3、织到纤维化组织的病理过程中，粘附分子( A M s ) 是否起着重要的 作用? 其中的细胞间粘附分子I ( I C A M 1 ) 、血管细胞粘附分子1 ( V C A M 1 ) 的表达变化与积水肾的病理变化是否相关? I C A M 1 、V C A M 1 的检测能否作 为一种判断肾脏病理损害的一种临床指标? 目前尚未见报道。 小儿先天性肾积水临床上多需要手术治疗。但是目前对于手术治疗的时 机与指征存在争议，其关键因素是患肾功能的判断问题。肾功能的判断也是 术中决定患肾取舍的重要依据。临床上判断肾功能的指标及相关因素很多， 包括：年龄、血清尿素氮( B U N ) 、血清肌酐( S C
4、r ) 、血红蛋白( H b ) 以及 9 9 “T c D T P A 核素肾动态显像检测肾小球滤过率( G F R ) 等。我们对这些指标 及其相关因素进行了研究，通过指标间的对比、相关性分析，以选择评价小 儿先天性肾积水。肾功能的理想指标。 为此，本研究基础部分探讨d J L 先天性肾积水的肾脏病理变化机制，主 要实验方法为酶联免疫吸附技术( E L I S A ) 和免疫组织化学( s P ) 法：临床 部分着重于d , J L 先天性肾积水的肾功能评价，其中以9 9 T c D T P A 核素肾动态 显像为主要评价对象。最终目的是在现有的认识基础上提供新的诊断方法和 治疗途径。 材
5、料与方法 一、基础部分 I 一般资料 E L I S A 法：根据肾脏B 超、C T 及I V P 分度确诊为中、重度小儿先天性 肾积水患儿5 3 例，男3 2 例，女2 l 例。年龄2 8 d 至1 1 岁，平均4 7 个月。其 中重度肾积水1 9 例，中度肾积水3 4 例。单侧者4 8 例，双侧5 例。设对照组 2 0 例，均为普查正常儿童；免疫组织化学( S - P ) 法：疾病组同上，设对照组 9 例，其中4 例重复。肾，2 例为肾外伤，3 例肾胚瘤。 2 标本收集 E L I S A ：所有患几均留取空腹外周血，离心分离血清后置8 0 保存。尿 液取自术中患侧肾盂尿，离心去沉渣后-
6、- 8 06 C 保存。对照组为普查正常几童晨 尿以及空腹血；免疫组织化学( S P ) 法：所有肾积水病例均为肾盂输尿管连 接部狭窄所致，术中取肾皮质标本。对照组中，重复肾病例取其正常肾组织， 肾外伤均为急症手术取正常肾组织，肾胚瘤患者取瘤旁外观正常肾组织。 3 主要仪器和试剂 E L I S A 法：仪器为上海雷勃仪器公司( n e 册oL a b s y s t c m s ) 的M u l t i s k a n M K 3 型酶标仪，波长( 4 5 啦_ 6 3 0 ) n n l 。试剂由法国I n v i l z o 公司提供；免疫 组织化学( S - P ) 法：主要试剂为P
7、o w c r V i s i o n T M 免疫组化检测试剂 ( P o w e r V i s i o n T MT w o S t e pH i s t o s t a i n i n gR e a g e n t ) ，购自北京中山生物技术有限 公司( 美国加州S a n t aC r u zB i o t e c h n o l o g y , I n c 产品) 。 4 ，实验方法 E L I S A 法和免疫组织化学( s P ) 法操作严格按照说明书进行。 5 统计学方法 所有数据录入微机，应用S P S S l 0 0 建数据库进行统计分析，所有分析显 著性水平a = 0
8、0 5 。E H S A 法：组间均数比较先应用单因素方差分析( O n e - W a y A N O V A ) ，若有显著性差异，则用q 检验( S N K 法) 进行两两比较：免疫组 织化学S - P 二步法：将肾积水组病例与正常对照组的阳性细胞数建立数据库， 2 山东大掣嚏士掌位谴文 进行，检验和相关性分析。 二、临床部分 1 一般资料：1 ) 确诊为先天性。肾积水的患儿( 根据肾脏B 超、C T 以及 I V P 分度确诊) 5 6 例6 8 只患肾。其中肾盂输尿管交界处梗阻4 9 人，输尿管 末端梗阻7 人。收治年龄2 6 d 至1 2 岁，平均年龄5 7 4 4 - 3 0 7
9、 岁。男4 5 人， 女1 1 人。单侧4 4 人，双侧1 2 人。左侧2 8 人，右侧1 6 人。正常对照7 人； 2 ) 确诊为新生儿肾积水的患儿1 5 例。男1 2 例，女3 例。双侧3 例，单侧1 2 例。1 8 只患肾1 2 只正常肾。其中肾盂输尿管交界处梗阻1 1 例，输尿管末段 梗阻2 例，后尿道瓣膜2 例。收治年龄5 d 至3 6 d 。手术1 3 例，随访9 例。 2 检测方法：1 ) 美国产G EM I L L E N N M 双探头S P E C T 仪，配低能 高分辨平行孔准直器，经静脉“弹丸式”注射蜘1 T c D T P A ，同时摄像。第一 时相以1 帧2 秒连续
10、摄取3 0 帧，第二时相以1 帧分连续摄取2 0 帧，1 小时 后采集延迟相。计算机采用G a t e s 法测定G F R 。2 ) 同期常规采血检测受试者 的H b 、B U N 、S C r 。记录受试者的年龄。 3 统计学处理：1 ) 采用S P S S 8 0 统计软件将正常及积水各组G F R 分别 与H b B U N 、S C r 以及年龄进行相关分析。2 ) 各组之间G F R 进行D u n n e t t t 检验。 结果 一、基础部分 一1 E L I S A 法 1 中、重度小儿先天性肾积水血清s l C A M 1 、s V C A M 1 水平与对照组结 果：s
11、l C A M 1 正常对照组为( 5 9 4 8 3 4 - 1 0 7 9 9 ) n g m l ，中度积水组为 ( 7 1 7 3 9 - a ：1 0 2 3 3 ) n g m l ，重度积水组为( 7 7 0 4 5 4 - 1 2 2 9 2 ) n g m l ，中、重度肾积 水患儿s l C A M 1 水平明显高于正常对照组( P O 0 5 ) ：中、重度积水组之间s l C A M 一1 、 s V C A M 1 水平无显著性差异( ，O 0 5 ) 。 2 中、重度d , J h 先天性肾积水尿液u I C A M 1 、u V C A M 1 水平与对照组结 璺
12、耋奎竺堡室兰堡丝叁 果：u C A M 一1 在对照组、中度积水组、重度积水组检测结果分别为一5 7 a ：5 2 4 、 n g r r a 、( 1 0 2 8 ：t = 5 8 2 ) n r n l 、( 1 0 8 0 a ：6 4 5 ) n g m lu V C A M 1 三组结果分别为 ( 1 8 5 0 - 士3 3 7 ) n g m l 、0 8 5 5 4 3 1 6 ) n g m l 、0 8 6 1 a ：2 8 5 ) n g m l 。显示疾病组尿液 u l C A M - 1 、u V C A M 一1 与正常对照组之间均无显著性差异( ， 0 0 5 )
13、 。 3 冲、重度小儿先天性肾积水血清及尿液中I C A M 一1 、V C A M 1 水平的相 关性分析结果：s l C A M 1 与l l I C A M 1 检测结果之间无相关性( 户0 1 7 2 ，P 0 0 5 ) ；s V C A M - 1 与u V C A M l 、s l C A M 一1 与s V C A M 1 检测值之间均无相 关性( r = 0 3 3 7 ，0 2 9 9 ；尸 0 0 5 ) 。 - - ) 免疫组织化学( S - P ) 法 1 I C A M l 在中、重度小儿先天性肾积水以及正常肾组织的表达：正常对 照肾组织中，肾小球、包氏囊壁层上皮细
14、胞、肾小管、肾小管间质均可见 I C A M 一1 轻度表达；中、重度d , J L 先天性肾积水肾组织中，以上部位的表达 明显增强，统计学上二者有显著性差异妒 0 。0 5 ) 。 3 肾积水肾组织以及对照组I C A M 1 和V C A M 一1 表达的相关性分析：中、 重度, b J L 先天性肾积水肾组织以及对照组I C A M - 1 和V C A M - 1 表达的相关性 结果显示，I C A M - 1 和V C A M 1 无论在积水组还是在对照组都无相关性( r = O 3 4 一0 2 5 ：0 0 5 ) 。 二、临床部分 1 ，J 、儿先天性肾积水各组肾功能的观察：正
15、常组蜘T c D T P A 核素肾动态 显像双肾总O F R 值为( 1 0 3 5 7 士1 8 3 7 ) m l m i n ，分肾相对肾功能( 4 8 8 6 + 5 1 6 ) ； 轻度积水组双肾总G F R 值为( 9 8 9 4 士1 6 6 7 ) m l m i n , 患肾相对肾功f 毙( 4 s 5 9 + 9 5 7 ( P O 0 5 ) ：中度积水组双肾总G F R 值为( 7 3 4 4 士1 0 5 0 ) m l m i n ，患肾相 4 当塞奎璧堡室矍些望查 对肾功自g ( 3 6 8 4 9 4 3 ) ( P 0 0 5 ) ；重度积水组双肾总G F
16、R 值为( 6 2 8 3 士 1 0 3 6 ) m l m i n ，患肾相对肾功自g ( 2 1 3 5 4 - 7 3 9 ) ( P O 0 5 ) ：中度积水组患肾G F R 值为( 1 8 7 5 * 5 4 9 ) m l m i n , 患肾相对肾功能( 3 8 9 1 4 - _ 8 7 0 ) ( P ( 0 0 5 ) ：重度积水组患肾G F R 值为 ( 1 2 0 1 + 4 4 5 ) m l m i n ，患肾相对肾功能( 2 9 2 3 7 ，3 7 ) ( P 0 0 1 ) 。以上结果显 示：与正常肾功能比较，中、重度新生儿肾积水肾功能下降有显著性意义， 轻度新生儿肾积水肾功能下降无显著性意义。 3 4
