《新型pde4抑制剂zln91对小鼠内毒素性肺损伤的改善作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《新型pde4抑制剂zln91对小鼠内毒素性肺损伤的改善作用（51页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、浙江大学医学院 硕士学位论文 新型PDE4抑制剂ZL-n-91对小鼠内毒素性肺损伤的改善作用 姓名：汪雪峰 申请学位级别：硕士 专业：药理学 指导教师：陈季强 20080501 浙江大学硕士学位论文 缩略词表 本课题受浙江省自然科学基金项目( z 2 0 4 1 9 8 ) 、浙江省教育厅项目( 2 0 0 6 1 4 1 6 ) 资助 1 浙江大学硕士学位论文 M y D 昭 m y e l o i dd i 虢砌1 t i a t i o nf a c t o r8 8髓样分化因子8 8 N E n e u t r o p h i le l 弱t 弱e中性粒细胞弹性蛋白酶 N F 1 c
2、B n u C l e 盯t r a n s 面p t i o n 胁o H ( B 核转录因子1 c B P D E p h o s p h o d i e s t e m s e 磷酸二酯酶 a n e T i a lp a n i a lp r e s 蛐r co fc 曲o nd i o x i d e 动脉血二氧化碳分压 P a 0 2 a n e I i a lp a n i a lp r c s s u r eo f0 x y g e n 动脉血氧分压 ，1 1 且s T 0 l ll i k er e c 印t o 娼 T 0 l l 样受体 1 飞限at u m o fn e
3、 c r o s i sf a c t o 卜a 肿瘤坏死因子a 本课题受浙江省自然科学基金项目( z 2 0 4 1 9 8 ) 、浙江省教育厅项目( 2 6 1 4 1 6 ) 资助 2 浙江大学硕士学位论文 新型P D E 4 抑制剂Z L - n 9 1 对小鼠内毒素性 肺损伤的改善作用 浙江大学医学院药理学 2 0 0 6 级硕士生汪雪峰 导师陈季强教授 摘要 研究背景： 急性肺损伤( a C u t el u n gi n j u A L I ) ，严重时称之为急性呼吸窘迫综合征 ( a c l l t er c s p i r a t o r yd i s t r e s ss
4、y n d 舳e ，A R D S ) ，是因急性肺水肿和炎症导致的特殊 类型呼吸衰竭综合征，与多种致病因素如肺炎、败血症、急性胰腺炎、药物过量 服用等有关。临床表现为顽固性低氧血症、呼吸频数和呼吸窘迫，胸部x 线显示 双肺弥漫性浸润影，后期多并发多器官功能障碍【。A I 肜A R D S 的死亡率很高， 到目前为止，仍然没有治疗m 和A R D S 的特效药物，因此探索治疗新靶点，寻 找和开发A R D S 治疗新药是研究者的目标。 近来环磷酸腺苷( c A M P ) 、环磷酸鸟苷( c G M P ) 通过对炎症细胞及免疫细胞 的调节参与A I 影A R D S 的发病过程越来越受到重视
5、。凹蝴P 和c G M P 是细胞内重要 的第二信使，与特异性蛋白激酶结合后导致各种底物磷酸化，调节体内的各种病 理生理过程。P D E 是细胞内降解环核苷酸的唯一途径，对调节这类第二信使的细 胞内水平起关键作用。创蝴P 可抑制免疫和炎症细胞的多种功能，在这些细胞中 蝴P 特异性的P D E 4 是主要的P D E 形式，P D E 4 抑制剂能增加C A M P 的水平，且 在各种动物模型中表现出抗炎作用【2 1 。 本实验探讨经典的P D E 4 抑制剂咯利普兰( R o l i p 姗，R O L ) 和新型P D E 4 抑 制剂z L n 9 1 对小鼠内毒素性肺损伤的改善作用，并进
6、一步探索其作用机制。 目的： 研究经典P D E 4 抑制剂咯利普兰和新型P D E 4 抑制剂z L n 9 1 对小鼠内毒素 性肺损伤的改善作用及机制。 本课题受浙江省自然科学基金项目( z 2 0 4 1 9 8 ) 、浙江省教育厅项目( 2 0 0 6 1 4 1 6 ) 资助 3 浙江大学硕士学位论文 方法： 一、咯利普兰对小鼠急性肺损伤的改善作用 脂多糖( 凹S ) 3 0m g k 9 1 气管内滴入诱导小鼠急性肺损伤。设正常对照组、 模型组、咯利普兰( O 1m 舀0 3m g 和1 Om g k 9 1 ，i p ) 组和地塞米松( O 5m g k 舀1 ， i p ) 组
7、，给药6 h 后处死小鼠。常规细胞形态学方法检测支气管肺泡灌洗液( B A I 固 中性粒细胞数目，观察肺湿重干重( W D ) 比值和肺组织病理的改变，考马斯亮 兰法测定B A IF 中总蛋白含量，髓过氧化物酶( M P O ) 活性测定试剂盒测定肺组织 匀浆中M P O 活性，E u S A 法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子仅( T N F - 0 【) 含量，高 效液相层析( H P 的法测定肺组织匀浆中环腺苷酸磷酸二酯酶( c A M P P D E ) 和磷 酸二酯酶4 ( P D E 4 ) 活性。 二、新药Z L - n 9 1 对小鼠急性肺损伤的改善作用 脂多糖( S ) 3 m
8、 g k 酉1 气管内滴入诱导小鼠急性肺损伤。设正常对照组、模 型组、新型P D E 4 抑制剂z L n 9 1 ( 0 3 g ，1 O “g ，3 O 昭k 9 1 ，i p ) 组、地塞米松( O 5 m g k 9 1 ，i p ) 组、经典P D E 4 抑制剂咯利普兰( 1 Om g k 9 1 ，i p ) 组。常规细胞形态 学方法检测支气管肺泡灌洗液( B A IF ) 中性粒细胞数目，观察肺湿重干重( W D ) 比值和肺组织病理的改变，考马斯亮兰法测定B A I ，F 中总蛋白含量，髓过氧化物 酶( M P O ) 活性测定试剂盒测定肺组织匀浆中M P O 活性，E U
9、S A 法测定肺组织匀浆 中肿瘤坏死因子O 【( T N F I D c ) 含量，高效液相层析( H P L C ) 法测定肺组织匀浆中环腺 苷酸磷酸二酯酶( c A M P P D E ) 和磷酸二酯酶4 ( P D E 4 ) 活性，血气分析测定动脉血 氧分压( a n 嘶a lp a n i a lp f e s s u r eo f0 x y g e n ，P 。0 2 ) 、动脉血二氧化碳分压( a n e r i a l p a r t i a lp r e s s u r eo fc a r b 曲d i o x i d e ，P a C 0 2 ) 、动脉血P H 值等指标，
10、采用R o b i c h a u dA 【3 l 等的方法，观察并记录各用药组对其麻醉作用持续时间即翻正反射恢复时间的影 响，来评价Z I ，n 9 1 的致呕反应。 结果： 一、咯利普兰对小鼠急性肺损伤的改善作用 小鼠气道内滴入I J P S6h 后，B A I F 中的白细胞总数和中性粒细胞数目迅速 上升，与对照组比较分别增加了3 2 倍和1 0 9 倍p 0 0 1 ) ；模型组肺湿重干重 ( w D ) 比值明显升高p 0 0 1 ) ；肺组织病理切片可见肺血管、气道周围有大量 本课题受浙江省自然科学基金项目( z 2 0 4 1 9 8 ) 、浙江省教育厅项目( 2 0 0 6 】
11、4 】6 ) 资助 4 浙江大学硕士学位论文 中性粒细胞浸润；附中蛋白含量明显升高，与对照组比较增加了1 5 倍 俨 O 0 1 ) ；肺组织匀浆M P O 活性和耵噼始量显著增加，与对照组比较分别增 加了1 7 倍和2 O 倍沪 0 0 1 ) ；肺组织中c A M P P D E 及P D E 4 的活性明显升高， 与对照组比较分别增加了3 4 倍和3 0 倍( P 0 0 1 ) 。腹腔注射R O L ( 0 1m 岛0 3m g 和1 0m g k 百1 ) 能够剂量依赖性的降低B 6 衄中自细胞及中性粒细胞的数目 ( P O 0 5 ) ；R O L ( O 1m 舀0 3m g 和
12、1 0m g k 9 1 ) 可降低小鼠肺湿重干重 ( W D ) 比值，0 3m g k 蛋1 与模型组相比即有显著性差异C P 0 0 1 ) ；R O L 各组肺 病变均较模型组减轻，气道周围及肺组织间隙中性粒细胞明显减少，肺水肿明显 减轻；R O L 各组B 蛆J 中蛋白明显减少，1 0m g k 蛋1 即能显著降低B A I F 中蛋 白含量C P 0 0 1 ) ；R O L 能显著降低M P O 水平，0 3m g k 岔1 即有显著性差异 护 0 0 1 ) ，呈剂量依赖性降低n 眼0 【水平p 0 0 5 ) ；R O L 可以抑制肺组织中 C A M P P D E 及P
13、D E 4 的活性的升高，O 3m g k 百1 能显著抑制c A M P P D E 的活性 ( P 0 0 1 ) ，1 0m g k 9 1 能显著抑制P D E 4 的活性( P 0 0 1 ) 。 二、新药Z L - n 9 1 对小鼠急性肺损伤的改善作用 小鼠气道内滴入L P S6h 后，B A I F 中的白细胞总数和中性粒细胞数目迅速 上升，与对照组比较分别增加了2 8 6 倍和6 1 6 倍C P 0 0 1 ) ；模型组肺湿重干重 ( W D ) 比值明显升高C P 0 0 1 ) ；肺组织病理切片可见肺血管、气道周围有大量中 性粒细胞浸润；B 舢L F 中蛋白含量明显升高
14、，与对照组比较增加了1 3 5 倍 C P O 0 1 ) ；肺组织匀浆M P O 活性和n 师始量显著增加，与对照组比较分别增 加了1 5 1 倍和2 2 3 倍( P 0 0 1 ) ；肺组织中c A M P P D E 及P D E 4 的活性明显升高， 与对照组比较分别增加了2 7 7 倍和1 9 5 倍( P 0 0 1 ) ；模型组小鼠外周血动脉血 P H 值、动脉血氧分压( a n e r i a lp a I t i a lp r e s s u r eo fo x y g e n ，P 。0 2 ) 、动脉血二氧化碳 分压( a n e r i a lp a J t i a
15、lp r e s s u r co fc a r b o nd i o x i d e ，P a C 0 2 ) 等各项指标较正常对照组有 明显变化，其中P H 值和P 。0 2 较正常组有显著下降，但在统计学上无显著性差异， P 。C 0 2 方面，模型组较正常组有显著上升，在统计学上有显著性差异C P 0 0 1 ) ； 腹腔注射z I 广n 9 l ( 0 3 陷1 O “g ，3 O 鸭k 9 1 ) 能够剂量依赖性的降低B A IF 中自 细胞及中性粒细胞的数目( P O 0 5 ) ；Z I 广n 9 1 各剂量组能明显降低肺W D 比值， 但与模型组相比无显著性差异，R O L
16、和D x M 能显著降低肺W D 比值( P O 0 5 ) ； z L n 9 1 各组肺病变均较模型组减轻，气道周围及肺组织间隙中性粒细胞明显减 本课题受浙江省自然科学基金项目( z 2 0 4 1 9 8 ) 、浙江省教育厅项目( 2 0 0 6 1 4 1 6 ) 资助 5 浙江大学硕士学位论文 少，肺水肿明显减轻；z I 广n 9 1 各剂量组显著降低B A I F 中蛋白，z I 广n 一9 10 3 昭k 茁1 即有显著性差异( P 0 0 5 ) ；Z I 广n - 9 10 3 峙1 O 昭和3 0 昭k 蓄1 各剂量 组呈剂量依赖性的降低肺组织中M P O 活性，同时也能显著降低n 师o 冰平； z L
