《kupffer细胞在大鼠原位肝移植免疫耐受中的作用机制》由会员分享，可在线阅读，更多相关《kupffer细胞在大鼠原位肝移植免疫耐受中的作用机制（110页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、四川大学 博士学位论文 Kupffer细胞在大鼠原位肝移植免疫耐受中的作用机制 姓名：向春华 申请学位级别：博士 专业：外科学（普外） 指导教师：严律南 20040503 四川大学临床医学博士专业学位论文 K u p f f e r 细胞在大鼠原位肝移植免 疫耐受 中的作用机制 导师严律南 教授 研究生向春华 摘要 目的1 、 建立Wi s t a r , S D大鼠原位肝移植动物模型， 观察从Wi s t a r - S D 大鼠肝移植后移植肝脏能否产生免疫排斥反应，以及 S D - S D大鼠 肝移 植后能 否产生免疫耐受。 2 、 在r - 述模型的 基础上， 加一以 氯化 L ( G
2、d c 1 3 ) 阻断供肝枯否氏 细胞( K u p f f e r c e 1 1 ,K C ) 吞噬功能组， 测定各组肝脏功能， 肝脏细胞间粘附分子 ( C A MS ) ，细胞因子，C D 1 4的表达，以了解 K C 的功能状态是否对C A Ms 的表达， 及细胞因子的分泌有影响。 3 、 从上述 各组肝移植，分离移植肝K C ，与S D来源脾淋巴细胞混合培养， 观察处 于各组功能状态下的K C在体外对脾淋巴细胞的影响。通过以上三部分 实验，试图探索K C在大鼠原位肝移植免疫耐受中的作用机制。 方 法1 、 按“ 二袖套法” 建立大鼠 原位肝移植模型， 将大鼠 分为三组: 急性排斥反
3、应组 ( W i s t a r - S D ) ，免疫耐受组( S D - S D ) ， G d c 1 3组( 于移 植前2 4 小时 用G d c 1 3 1 O m g / k g 经尾静 脉注入 供者 大鼠 体内以 阻断 供肝K C 吞噬功能) 。各组于术后5 - 7 天杀死， 取血及肝脏标本。全自 动化生化分 析仪测定肝功情况; E L I S A测定受鼠 血浆中T N F - a 、 T G F - 0 ， 、 I L - 1 0 的 变化; 观察肝组织病理变化; 免疫组化法测量肝组织中C A M s , C D 1 4 的 表达情况: T U N E L法测门脉区淋巴细胞凋亡
4、情况。以探索K C在活体中 对肝移植免疫反应的作用机制。 2 、同上 述方法建立大鼠原位肝移植， 分 四川大学临床医学博士专业学位论文 组相同:急性排斥组，免疫耐受组， G d c 1 3 组。于 肝移植术后5 - 7 天时， 无菌取移植肝，分离各组移植肝K C ，并分离S D来源大鼠脾淋巴细胞， 将K C与脾淋巴细胞混合培养7 2 小时， M T T 法观察K C对脾淋巴细胞的 增殖作用;双荧光标记后流式细胞仪测量混合培养后脾淋巴细胞中 C D 4 , C D 8 的数量。 探讨各组K C 在离体状态下对脾淋巴 细胞的作用。 结果1 、 在未用免疫抑制剂的情况下， S D - S D大鼠原位
5、肝移植后能产 生免疫耐受， 其 1 周存活率为1 0 0 %， 病理检查显示: 肝组织形态改变轻 微，肝细胞和肝血窦内皮细胞部分变性肿胀，个别肝细胞坏死，肝血窦 轻度扩张充血，汇管区可见少量淋巴细胞浸润，整个肝小叶结构基本正 常。肝功能损害较轻，7 天左右基本恢复到正常。而Wi s t a r - S D大鼠原 位肝移植，肝组织病理改变明显，表现为肝细胞变性严重，有部分灶状 及桥状坏死，内皮细胞肿胀明显，肝血窦显著扩张，明显充血，汇管区 大量炎性细胞浸润， 胆管上皮细胞肿胀， 变性脱落， 肝小叶结构不清晰。 肝脏功能损害进行性加重，一周存活率为6 0 %，一般生存5 - 1 1 天。达到 B
6、a n f f 急性排斥反应标准的中、重度水平。2 、在急排组及 G d c 1 3组，肝 脏C A MS 表达均较强， 免疫耐受组为最低; 在急排组和G d c 1 3 组的T N F - a 增高明显， 尤以G d c 1 3 组为最高， 而T G F - 0 , I L - 1 0 较免疫耐受组为低; 免疫耐受组汇管区浸润淋巴细胞凋亡所占比例最高， 而G d c 1 3 组为最低。 提示 K C吞噬功能抑制后，降低了其 T G F - 0 , I L - 1 0的表达， 但不影响 T N F - a的表达。提示，K C可能主要通过表达下调免疫反应的细胞因子 如T G F - 0 、 I
7、L - 1 0 等， 而在肝移植免疫耐受中 起作用。 3 、 从各组移植肝 中分离出的 K C与 S D来源脾淋巴细胞混合培养后，对脾淋巴细胞中 C D 4 , C D 8 十 的增殖作用有差别。急排组和G d c 1 3 组K C对S D来源脾淋 巴细胞都有刺激增殖作用，而免疫耐受组 K C对淋巴细胞增殖影响不明 显。 G d c 1 3 组K C 对C D 8 + 的作用更为明显， 使本组C D 4 / C D 8 十 比 例降 低， 四川大学临床医学博士专业学位论文 而免疫耐受组 C D 4 / C D 8 比 例较大，显示 C D 8 所占比 例下降。提示， K C可通过影响C D 4
8、 , C D 8 的活化增殖，尤其是下调C D 8 而发挥其调 节免疫的功能。 结 论 1 , Wi s t a r - S D大鼠 之间的原位肝移植可产生中、 重度的免疫排 斥反应， 而S D -S D大鼠间的原位肝移植是一种免疫耐受组合。 2 、 在肝 移植急性排斥反应中， K C对淋巴细胞的激活不通过上调C A MS 来实现， 而主要通过增加起上调免疫作用的细胞因子如T N F - a的表达来实现的。 K C在肝移植免疫耐受的作用， 主要通过增加下调免疫作用的细胞因子的 表达来实现的。 3 、在体外， 激活的K C对C D 4 , C D 8 淋巴细胞都有刺 激增殖的作用，在免疫耐受形成
9、时，K C对C D 8 的抑制更为明显，如果 K C功能受抑制， 则 C D 8 的比例明显增加。可能K C ! 能通过降低C D 8 的增殖而在免疫耐受中起作用。 关 键词:原 位肝移植; K u p f f e r 细胞; 免疫耐受; C A M s ; 细胞因 子; 淋 巴细胞:增殖;大鼠 四川大学临床医学博士专业学位论文 T h e f u n c t i o n o f K u p f f e r c e l l i n t h e t o l e r a n c e o f o r t h o t o p i c li v e r t r a n s p l a n t a t i
10、 o n i n r a t s Tu t o rYa n L u n a n P r o f e s s o r P o s t g r a d u a t eX i a n g C h u n h u a Abs t r a c t O b j e c t i v e : 1 .T o b u i l d t h e m o d e l o f o r t h o t o p i c l i v e r t r a n s p la n t a t i o n ( O L T ) i n r a t s ,t h e Wi s t a r t o S D r a t s g r o u p
11、 w e r e t o o b s e r v e t h e a c u t e r e j e c t i o n a ft e r t h e t r a n s p l a n t , S D t o S D w e r e t o o b s e r v e t h e i m m u n e t o l e r a n c e , w e a l s o b u i l d a t h i r d gr o u p b y p r e t r e a t m e n t o f Wi s t a r r a t s w i t h G a d o l i n i u m c h
12、l o r i d e ( G d c 1 3 ) ,w h i c h c a n b l o c k p h a g o c y t o s i s o f K u p f f e r c e l l s ( K C ) o f t h e d o n o r li v e r . 2 .D e t e c t i n g t h e c e l l a d h e s i o n m o l e c u l e s ( C A Ms ) a n d C D 1 4 e x p r e s s e s a n d l y m p h o c y t e s a p o p t o s i
13、s i n t h e gra ft s t i s s u e s , m e a s u r i n g t h e l e v e l s o f T N F - a ， T G F - 0 ， I L - 1 0 i n t h e p la s m o f r e c i p i e n t r a t s , li v e r f u n c t i o n s i s a l s o m e as u r e d . 3 .I s o l a t i n g th e K C fr o m t h e gr a ft s ,i s o l a t i n g s p l e e
14、n l y m p h o c y t e s fr o m t h e S D r a t s . c o - c u l t u r e t h e K C a n d ly m p h o c y t e s , t h e n , d e t e c t t h e p r o l i f e r a t e r a t e s o f t h e l y m p h o c y t e s . B y a l l t h e s e e x p e r i me n t s ,w e w a n t t o e l u c i d a t e t h e f u n c t i o
15、n s o f K C i n t h e i n d u c t i o n o f t o l e r a n c e o f l i v e r t r a n s p l a n t a t i o n i n r a t s Me t h o d s : l .O r t h o t o p i c l i v e r t r a n s p l a n t a t io n i n r a t s w a s p e r f o r m e d b y t h e t w o c u f f s m e t h o d .T h e r a t s w e r e r a n d
16、o m l y d iv i d e d i n t o 3 gro u p s : gr o u p A , Wi s t a r - S D t o o b s e r v e t h e a c u t e r e j e c t i o n ; gro u p B , S D - S D t o o b s e r v e t h e 四川大学临床医学博士专业学位论文 im m u n e t o l e r a n c e ; a n d g r o u p C ,p r e t r e a t m e n t o f Wi s ta r r a t s w i t h G d c l 3 ( 1 0 m g / m l ) v i a t h e t a i l v e i n 2 4 h b e f o r e l i v e r h a r v e s t in g .5 o r 7 d a y s a ft e r t h e
