抗氧化剂对新生大鼠高氧脑损伤的防治作用

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1、温州医学院 硕士学位论文 抗氧化剂对新生大鼠高氧脑损伤的防治作用 姓名：孟卫霞 申请学位级别：硕士 专业：儿科（新生儿） 指导教师：钱燕;林莲莲 20080501 温州医学院硕士学位论文 抗氧化剂对新生大鼠高氧脑损伤的防治作用 研究生：孟卫霞 导师：钱燕主任，林莲莲教授，陈超教授 温州医学院，温州，浙江3 2 5 0 0 3 中又捅要 目的l 、探讨持续吸入高浓度氧造成新生大鼠脑损伤的机制； 2 、探讨并比较抗氧化剂丹参7 6 4 3 和S O D 对高氧损伤后新生大鼠脑的保护作 用。 方法1 、模型和分组新生S p r a g u e - D a w l e y 大鼠出生6 h 内即置于0

2、2 浓度9 0 的自制氧舱中，随机分为6 大组，分别为高氧对照组、空气对照组、S O D 预 防组、S O D 治疗组、丹参预防组、丹参治疗组。其中预防组又分为7 d 预防组 和1 4 d 预防组( 前者是指持续吸入高氧满7 d 即处死取标本，后者是指持续吸 入高氧满1 4 d 后处死) 。调整各组新生大鼠数目，每组在8 1 6 只之间。据 F e l d e r h o f f m u e s e r 【1 J 的报道，生后3 7 d 是新生鼠脑最易受高氧损伤的时 期，故将l - - 7 d 用药组称为预防组，7 1 4 d 用药组作为治疗组。给药方法为 每日清晨7 时给药一次，高氧对照组与

3、空气对照分别于生后相同的时间段腹 腔注射等量的生理盐水。用药剂量：丹参为4 0 m g k g d ，S O D 为2 0 0 0U k g d 。 2 、标本采集与检测每天记录新生大鼠的成活率、体重及状态。高氧对照 组、空气对照组分别在生后满3 d 、7 d 、1 4 d ，余下4 大组分别在生后满7 d 、1 4 d ， 予t 0 水合氯醛腹腔麻醉后，取出脑组织，立即置于4 多聚甲醛固定液中， 常规石蜡包埋，取海马水平做冠状切片，厚度为5I lm ，用于H E 染色、免疫组 化和T U N E L 检测并计算凋亡指数( 甜) 。记录部分脑组织湿重与经冷冻干燥 后干重，以计算脑湿干重比值。

4、结果1 、存活率、体重、脑湿重干重比值4 组高氧对照组的存活率、体重均低 于对应的空气对照组，其中高氧预防对照组1 4 d 和高氧治疗对照组1 4 d 差异显 著( P O 0 5 ) 。从进入高氧7 d 后，大鼠脑湿重干重比则明显高于对应的空 气对照组( P O 0 1 ) ，表明高氧造成新生大鼠脑水肿。经S O D 和7 6 4 3 干 预后的大鼠生存率、体重较高氧对照组有所上升，其脑湿重干重比值显著降 低，尤其以7 6 4 3 预防组7 d 和S O D 治疗组1 4 d 作用显著( P S O D 预防 1 4 d 组 S O D 治疗1 4 d 组 丹参治疗1 4 d 组，与V E

5、G F 表达的高低顺序刚好相反。 5 、V E G F 表达情况与凋亡指数问关系将参与本次实验的所有药物干预组 和7 d 、1 4 d 的高氧对照组大鼠共7 7 只( 即不包括所有的空气对照组和3 d 的 高氧对照组) ，分别按V E G F 表达阳性( 3 9 只) 和阴性( 3 8 只) 分为二组来统 计凋亡指数，可以看出V E G F 表达阳性组凋亡指数为1 6 7 9 1 2 1 3 ( ) 较低， V E G F 表达阴性组凋亡指数为3 9 3 9 2 0 0 9 ( ) 则较高，且差异有统计学意义 ( 尺O 0 1 ) 。 结论l 、持续吸入高氧( 9 0 0 2 ) 3 7 d

6、后大鼠生存率、体重有所下降，脑湿重 干重比值和脑神经细胞凋亡指数显著上升，提示高氧可以造成新生鼠脑损伤。 2 、使用抗氧化剂丹参7 6 4 3 和S O D 后大鼠生存率、体重有所上升，脑神经 温州医学院硕士学位论文 细胞凋亡指数显著下降，提示它们对高氧脑损伤有一定的保护作用。 3 、V E G F 表达的降低可能参与了高氧造成新生鼠脑损伤的过程。 4 、7 6 4 3 的神经保护的一种机制可能是通过上调脑组织中V E G F 的表达来抑制 脑神经细胞凋亡，从而发挥保护作用的。 5 、7 6 4 3 的神经保护作用大于S 0 1 ) ，且重点体现在预防作用上。 关键词细胞凋亡；V E G F

7、；高氧症；脑损伤；抗氧化剂 4 温州医学院硕士学位论文 T h eP r e v e n t i v ea n dT h e r a p e u t i cE f f e c t so fA n t i o x i d a n t so n H y p e r o x i aB r a i nI n j u r yi nN e o n a t a lR a t s P o s t g r a d u a t e ：M e n gW e i x i a U n d e rt h ed i r e c t i o no f ：Q i a nY a h ，L i nL i a n l i a n ，

8、C h e nC h a o W e n z h o uM e d i c a lC o l l e g e ，W e n z h o u ，Z h e j i a n g3 2 5 0 0 3 A b s t r a c t O b j e c t i v e l 、T o s t u d yt h em e c h a n i s mo fh y p e r o x i cb r a i ni n j u r y 2 、T os t u d ya n dc o m p a r et h ep r e v e n t i v ea n d t h e r a p e u t i ce f f

9、 e c t so fs u p e r - o x i d ed i s m u t a s e ( S O D ) a n dt h ee x t r a c to fc o m p o u n dS a l v i aM i l t i o r r h i z a ( 7 6 4 - 3 ) o n h y p e r o x i a b r a i ni n j u r yi nn e o n a t a lr a t s M e t h o dl 、M o d e la n dg r o u pP u tS p r a g u e - D a w l e yn e o n a t a

10、 lr a t si n t os e l f - m a d e o x y g e nb o xw i t h i nh i g h c o n c e n t r a t i o no x y g e n ( 9 0 0 2 ) i n6h o u r sa f t e rb i r t ht oe s t a b l i s h t h eh y p e r o x i cb r a i ni n j u r ym o d e l R a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t oS O Di n t e r v e n t i o n

11、g r o u p ，7 6 4 3i n t e r v e n t i o ng r o u p ，h y p e r o x i ag r o u pa n da i rc o n t r o lg r o u p T h e nt h r e e g r o u p sw e r ed i v i d e di n t ot h r e es u bg r o u p sr e s p e c t i v e l y ：p r e v e n t i o ng r o u pI ：i n t e r f e r e d w i t hd r u ga te x p e r i m e

12、n tl - 7 da n dt h es a m p l e sw e no b t a i n e da t7 t hd a y ；p r e v e n t i o n g r o u pI I ：i n t e r f e r e dw i t hd m ga te x p e r i m e n tl 一7 da n dt h es a m p l e sw e no b t a i n e da t14 t h d a y ；t r e a t m e n tg r o u p ：i n t e r f e r e dw i t h d r u ga te x p e r i m

13、e n t7 1 4 da n dt h es a m p l e sw e r e o b t a i n e da t14 t hd a y D o s eo fd r u g sb yi n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o n ：S O D ：2 0 0 0 U k g 。d ：7 6 4 3 ： 4 0 m g k g d ：h y p e r o x i ag r o u pa n da i rc o n t r o lg r o u pr e c e i v e dn o r m a ls a l i n eo ft h es a

14、m e d o s e 2 、D e t e c t i o no fi n d e xR a t s s u r v i v a lr a t e ，s t a t ea n db o d yw e i g h tw e r er e c o r d e d d a i l y A f t e r3 d ，7 d ，1 4 do fe x p o s i t i o n ，a n i m a l sw e n 鼢c r i f i c e da n dt h eb r a i nt i s s u eW a S t a k e no u t ，f i x e db y4 p a r a f

15、o r m a l d e h y d e T h e nb r a i n sw e ne m b e d d e di np a r a f f i na n d s e c t i o n e do n5 1 x mt h i c k U s et h eH - Es t a i n i n gt oo b s e r v et h en e u r o n a ld e g e n e r a t i o n ； V E G Fe x p r e s s i o nw a sm e a s u r e db ym e a n so fi m m u n o h i s t o c h

16、e m i s t r y T h e s p e c i f i c p o s i t i v eo rn e g a t i v eb a n d so fV E G F i nl i g h tm i c r o s c o p ew e r ec o u n t e d W ed e t e r m i n e dt h e e x t e n to fa p o p t o s i st a k i n gp l a c ei nt h eb r a i no fn e o n a t a lr a t se x p o s e dt o 9 0 h y p e r o x i a u s i n g t e r m i n a l d e o x y r i b o n u c l e o t i d e