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1、分类号：S813.1单位代码： 10335 密级：学号： 10717007 博士学位论文 中文论文题目中文论文题目：龙胆草与高良姜龙胆草与高良姜对能量代谢相关基因表对能量代谢相关基因表 达影响的研究达影响的研究 英文论文题目：英文论文题目： StudyStudyStudyStudy ofofofof gentianagentianagentianagentiana scabrascabrascabrascabra andandandand alpiniaalpiniaalpiniaalpinia galangalgalangalgalangalgalangaleffecteffecteffec
2、teffectonononongenesgenesgenesgenesexpressionexpressionexpressionexpression relatedrelatedrelatedrelated withwithwithwith e e e energynergynergynergy metabolismmetabolismmetabolismmetabolism 申请人姓名： 彭淑红 指 导 教 师： 徐宁迎教授 专 业 名 称：动物遗传育种与繁殖 研 究 方 向： 分子遗传学 所 在 学 院： 动物科学学院 论文提交日期：二一一年一月 龙胆草与高良姜龙胆草与高良姜对能量代谢相
3、关基因表达影响的研究对能量代谢相关基因表达影响的研究 论文作者签名论文作者签名: : : :彭 淑 红 指导教师签名指导教师签名: : : :徐 宁 迎 论文评阅人 1： (姓名职称单位,下同) 评阅人 2： (隐名评阅学位论文省略) 评阅人 3： 评阅人 4： 评阅人 5： 答辩委员会主席： 张才乔 教授浙江大学动科院动医系 委员 1： 徐宁迎 教授浙江大学动科院动科系 委员 2： 胡松华 教授浙江大学动科院动医系 委员 3： 杜爱芳 教授浙江大学动科院动医系 委员 4： 傅衍 教授浙江大学动科院动科系 委员 5： 答辩日期：二零一一年三月十二日 StudyStudyStudyStudy o
4、fofofof gentianagentianagentianagentiana scabrascabrascabrascabra andandandand alpiniaalpiniaalpiniaalpinia galangalgalangalgalangalgalangal effecteffecteffecteffect onononon genesgenesgenesgenes expressionexpressionexpressionexpression relatedrelatedrelatedrelated withwithwithwith energyenergyenerg
5、yenergy metabolismmetabolismmetabolismmetabolism AuthorAuthorAuthorAuthor s s s s signature:signature:signature:signature:Peng Shuhong SupervisorSupervisorSupervisorSupervisor s s s s signature:signature:signature:signature:Xu Ningying External Reviewers: (姓名职称单位,下同) (隐名评阅学位论文省略) Examining Committee
6、 Chairperson: (姓名职称单位) Examining Committee Members: Date of oral defence： 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学浙江大学或其他教育机构的 学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：签字日期：年月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解浙江大学浙江大学有权
7、保留并向国家有关部门或机 构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学浙江大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名：导师签名： 签字日期：年月日签字日期：年月日 本学位论文受国家重点基础研究发展本学位论文受国家重点基础研究发展 计划（计划（973973 计划）资助计划）资助 ThisThisThisThis workworkworkwork waswaswaswas supportedsupportedsupportedsupport
8、ed bybybyby grantgrantgrantgrant fromfromfromfrom thethethethe MajorMajorMajorMajorStateStateStateState BasicBasicBasicBasic ResearchResearchResearchResearch DevelopmentDevelopmentDevelopmentDevelopment ProgramProgramProgramProgram ofofofof ChinaChinaChinaChina (973(973(973(973 Program)Program)Progr
9、am)Program) ( ( ( ( 2006CB504702)2006CB504702)2006CB504702)2006CB504702) 目目录录 缩略词表. I 摘要.III Abstract.VI 第一部分 文献综述.1 1.1 中药四性的研究进展.1 1.1.1 中药四性的理论形成1 1.1.2 中药四性的物质基础研究1 1.1.3 中药四性与能量代谢关系的研究3 1.1.4 小结4 1.2 能量代谢的一般调节机制5 1.3 线粒体转录因子研究进展.6 1.3.1 TFAM 的分子生物学特点6 1.3.2 TFAM 的生物学功能7 1.3.3 TFAM 的调节10 1.4 核呼吸
10、因子的研究进展.12 1.4.1NRF 分子生物学特点12 1.4.2 NRF 的功能.13 1.4.3 NRF 的调控.17 1.5 辅激活因子 PGC-1的研究进展.18 1.5.1 PGC-1的结构.18 1.5.2 PGC-1与糖代谢.19 1.5.3 PGC-1与脂代谢.19 1.5.4 PGC-1与线粒体生物生成.20 1.5.5 PGC-1与适应性产热.21 1.6 DNA 甲基化可能是调节着能量代谢的潜在机制. 22 1.7 DNA 甲基转移酶 3a 的研究进展. 24 1.7.1 DNMT3a 蛋白结构特点. 24 1.7.2 生物学功能25 1.7.3 对 DNMT3a 的
11、调节 28 1.8 本研究的目的和意义29 第二部分 基本材料和方法.30 2.1 材料.30 2.1.1 动物.30 2.1.2 中药材30 2.1.3 仪器设备30 2.1.4 主要试剂31 2.1.5 引物.31 2.2 方法.33 2.2.1 药物制备.33 2.2.2 采样.33 2.2.3 大鼠体温测定33 2.2.4 糖原含量测定.33 2.2.5 血清游离脂肪酸（NEFA）含量测定.34 2.2.6 Na+，K+-ATP 酶、Ca2+-ATP 酶活性测定.34 2.2.7 琥珀酸脱氢酶（SDH）活性测定.34 2.2.8 肝脏线粒体制备35 2.2.9 线粒体活性检测.35 2
12、.2.10 线粒体蛋白定量35 2.2.11 线粒体氧化呼吸活性测定35 2.2.12 高效液相法测定 ATP、ADP、AMP36 2.2.13 RNA 提取、纯度鉴定及反转录.36 2.2.14 基因克隆 PCR 产物片段. 37 2.2.14 基因扩增效率的测定.38 2.2.15 SYBR Green 实时定量 PCR 检测基因的表达. 38 第三部分 试验研究.40 3.1 寒药龙胆草对正常大鼠能量代谢的影响40 3.1.1 材料与方法.40 3.1.2 结果与分析.41 3.1.3 讨论44 3.2 热药高良姜对正常大鼠能量代谢的影响.47 3.2.1 材料与方法.47 3.2.2
13、结果与分析.47 3.2.3 讨论.50 3.3 寒药龙胆草对热证模型大鼠能量代谢及调节基因表达的影响51 3.3.1 材料与方法.51 3.3.2 结果与分析.52 3.3.3 讨论.66 3.4 热药高良姜对寒证模型大鼠能量代谢及调节基因表达的影响72 3.4.1 材料与方法.72 3.4.2 结果与分析.74 3.4.3 讨论.87 3.5 总讨论90 3.6 结论、创新点及研究展望96 3.6.1 结论.96 3.6.2 创新点.97 3.6.3 研究展望.98 参考文献.99 作者简历.110 致 谢.111 附录.112 II 缩略词表 I 缩略词表缩略词表 （Abbreviati
14、ons） 引文缩写英文全称中文全称 5-LOX5-Lipoxygenase5-脂氧合酶 AIDActivation Induced Deaminase激活诱导的脱氨酶 Atp5bATP Synthase Subunit GeneATP 合成酶亚基基因 CaMKCalmodulin-Dependent Kinase钙调素依赖的激酶 COXCytochrome C Oxidase细胞色素 c 氧化酶 CPTCarnitine Palmitoyltransferase肉毒碱棕榈酰基转移酶 CREcAMP-Responsive Promoter ElementcAMP 应答启动子元件 CREB Cyc
15、lic AMP-Responsive Element Binding Protein cAMP 应答元件结合蛋白 dbcAMPDibutyryl-Cyclic AMP双丁酰环化腺苷酸 DMRDifferentially Methylated Regions分化甲基化区域 DNMTsDNA MethyltransferasesDNA 甲基转移酶 ECEnergy Charge能荷 ERREstrogen-Related Receptor雌激素相关受体 GADD45 Growth Arrest and DNA-Damage-Inducible Protein 45 生长阻滞和 DNA 损伤诱 生蛋
16、白 45 gAFGlucocorticoid Accessory Factor糖皮质激素附属因子 GFPGreen Fluorescent Protein绿色荧光蛋白 Glut-4Glucose Transporter-4葡萄糖转运体 4 GRGlucocorticoid Receptor糖皮质激素受体 GRUGlucocorticoid Response Unit糖皮质激素反应单位 HDACHistone Deacetylase组蛋白去乙酰酶 HSPHeavy Strand Promoter重链启动子 浙江大学博士学位论文 II LSPLight Strand Promoter轻链启动子 MBD4Methyl-CpG-Binding Domain Protein 4甲基 CpG 结合域蛋白 4 MEF2Myocyte Enhancer Factor-2肌细胞增强因子-2 NDNADH Dehydrogenase Subunit NADH 脱氢酶亚基 NDUFB6 NADH Dehydrogenase Ubiquinon
