液相色谱维护概要

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1、异常色谱行为与衬管的关系 1拖尾峰： n可能原因：是柱和进样衬管吸附样品组分或污染 镀金进样口密封垫；注射器针头撞击进样衬管内 填充物破碎；柱末端切口不整齐（会使样品产生 吸附）；衬管断裂。 n排除方法：换新的去活衬管；拆下色谱柱，清除 污染物，用性能可靠的毛细管熔融石英切割工具 将柱切成齐口，然后重新安装色谱柱；调节进样 口总流量在40ml/min以上。 2.前伸峰（leading peaks） n可能原因：样品分解。 n排除方法：用新的去活衬管。 3.出峰后基线上升 n可能原因：样品分解。 n排除方法：用新的去活衬管。 4.大峰后基线变化 n可能原因：色谱柱末端和衬管不在同一轴 线上。 n

2、排除方法：检查末端和进样口衬管安装， 必要时调整它，使柱入口端和衬管在同轴 上。 5.未分离峰 n可能原因：色谱柱或进样衬管污染或柱效 变坏。 n排除方法：用新的去活衬管。 液相色谱系统的故障有多 少与溶剂和样品的过滤有 关 1过滤膜的类型 n聚四氟乙烯膜（一般用于有机相）几乎可以和 所以的溶剂、酸和碱相容。 n 尼龙66膜（一般用于有机相）可以和大多数 溶剂、有机物和水相容，建议不要用于强酸、 二氯甲烷和DMF。 n纤维素硝酸酯(一般用于水相)主要用于过滤器, 可以和多数水性和非水性溶剂相溶,但不是所有 的水性和非水性溶剂. n再生纤维素膜一般用于HPLC生物样品和有机 溶剂的制备和过滤,是

3、通用型HPLC过滤器,具有 广泛的溶剂相溶性,与蛋白质键合作用低,非常 低的可萃取性. n2、在样品溶液中有颗粒存在会造成故障时 要用膜进行过滤. 3.流动相 n溶剂的污染,特别是水相缓冲溶液的污染是 HPLC中常见的问题,水相介质是微生物生长 的良好环境,而微生物可以堵塞HPLC系统, 并造成背景噪音. 4.溶剂入口过滤头 n未经过滤的溶剂或溶剂瓶中生长的微生物 都会降低溶剂入口过滤头的寿命,并影响泵 性能.一般3个月清洗或更换. 5.测试溶剂入口过滤头是否堵塞 n将溶剂入口管从过滤头和瓶盖组件处拨下, 如果管线中充满溶剂,当过滤头性能良好时, 溶剂会自由地从管中滴出如果堵塞，就 没有溶剂或

4、只有很少量的溶剂从管中滴出 n6、不要使用超声清洗溶剂入口过滤头，否 则玻璃颗粒可能是破碎造成堵塞 气相色谱毛细管柱安装 熔融硅毛细管柱组成： n琥珀褐色（或淡黄色）聚酰亚胺（CO（ CH2）34CON=CH（CH2）5NHn）涂渍在 管外壁保护管防止其破裂；熔融硅空心管；均匀 涂布在管内壁的固定相（常用的有聚硅氧烷 Si(CH3) 3 OSi(CH3) 3O n Si(CH3) 3、聚乙二 醇、HO（CH2 CH2O）nH、固体吸附剂多孔层 开管PLOT（Al2O3、分子筛、苯乙烯基苯、二乙 烯基苯-乙二醇二甲基丙烯酸酯）。 柱安装工具： n柱切割工具如钻石、陶瓷片、宝石铅笔刀 ；适当的不保

5、留化合物；柱测试物；电子 流量计；电子检漏计（后三种为可选件） 。 安装步骤1： n检查净化管、载气、隔垫、衬管：必要时 更换净化管；在进样口换新隔垫：必要时 换衬管及镀金平板（特别是进了大量脏样 品和分析活性高化合物后）。柱的固定液 室温下容易被氧化损坏，可以使用充载气 保存延长使用寿命和减少噪音，推荐使用 带有指示色的高容量的脱氧管，带有指示 色的脱水管应安装在脱氧管前。 安装步骤2： n套上柱螺母和密封垫、切割柱：在柱两端 安装柱螺母和密封垫，将柱固定在柱箱中 ，铭牌朝外。切去柱两端约5cm，切割方法 ：戴不起毛手套，手指将柱固定，用切割 工具在适当位置划一切口，不能来回切割 ，也不要用

6、切割工具完全切断。两手相向 掰去柱切割部分，用放大镜检查切口，应 边缘平整、无毛刺等。否则重新切割。 安装步骤3： n进样口、检测器处柱的安装：柱安装在柱 箱中，边缘不要与柱箱接触；展开柱使之 成圆滑的弧形，避免在紧固时使柱断裂； 依据进样口类型和检测器要求确定柱露出 长度；用手旋紧柱螺母，再用扳手旋紧， 但不要超过1/4圈；装好后不要再旋动柱； 密封垫在加热后会结合更紧密。 安装步骤4： n开载气：调整柱头压获得合适的载气流量，下表 是推荐值，实际使用的可根据载气线速度确定。 n将柱出口端浸入正已烷，可见气泡，否则，检查 载气，流量阀，检漏，装柱前挥去残留溶剂。载 气种类选择：对毛细柱首选的

7、载气为高纯氦和氢 气，不推荐使用氮气。对极小口径的如0.1mm内 径的毛细柱使用氢气。载气纯度至少99.995%并 且氧含量低于1ppm。但应注意氢气混合在空气中 浓度在4%-10%时容易发生爆炸。 柱长 m 柱内径mm 0.10.180.20.250.320.450.53 1035-455-10 12 10-15 15 8-125-10 1-2 20 75- 100 10-20 25 20-30 30 15- 25 10- 20 3-52-4 40 20-40 50 40-60 60 30- 45 20- 30 6-104-8 75 8-145-10 105 7-15 安装步骤5： n检测器

8、端柱安装：按步骤2和3进行安装， 用流量计测定柱载气流量。 安装步骤6： n检漏：GC系统在加热前要检漏，电子检漏 计是最可靠的和最合适的，不要使用皂沫 。可以适当使用异丙醇与水（5+5）的混合 液。 安装步骤7： n确定载气流量和正确的柱安装：有EPC电 子流量控制的可以直接设定载气速度或流 量，但应输入正确的柱内径，可以通过附 在柱盒内的柱效能测定结果表获得：适当 的载气流量在步骤4获得，也可通过不保留 化合物进行测定计算获得。 下表是不同检测器的一些不保留 化合物。 检测器化合物 FID甲烷，丁烷 TCD甲烷，丁烷，氩气，空气 ECD二氯甲烷，SF6，CF2CL2 NPD乙腈 PID乙炔

9、，乙烯 MS甲烷，丁烷，氩气，空气 注：以上化合物在PLOT柱上大多数都有保留 ；不要进液体，使用非常低的顶空气进样； 柱温低于100乙腈在多数柱上都有保留，必 须设定柱温在100以上。 测定步骤： n设定柱温35-40，在分流模式下快速进样 1-2ul上述推荐的不保留化合物；在使用大 体积进样或冷柱头进样模式时，应将其稀 释以免使检测器饱和。观察到的应是尖锐 的对称峰；不分流进样时会又拖尾现象， 若没有峰，则检查载气，流量控制系统， 检测器，记录仪，进样针等。峰拖尾严重 ，则可能是进样口漏，柱安装不好，分流 比太小。 安装步骤8：柱老化： n通载气15min后升温至低于柱最高使用温度10-

10、20，但必须高于操作温度，绝对不能超过柱 最高使用温度。到达设定温度后观察基线，在 5-30min基线上升，30-90min后下降，在老化 温度下1-3小时后基线平直，若2-3小时后基线 仍不稳定则停止老化。产生原因可能由载气管 路，进样区泄露或系统受污染引起。检查各部 分再进行老化。产生原因可能由载气管路，进 样区泄露或系统受污染引起。检查各部分再进 行老化。极性固定相和液膜较薄的老化时间要 比非极性和厚液膜的长，而PLOT柱老化有其 特殊性，可参考购买说明书。对ECD，MSD等 检测器老化时不能连接检测器进行，但在老化 后必须切去10-20cm后才能连接检测器。 安装步骤9：载气线速度精确

11、设定： n对毛细柱，载气线速度直接影响保留时间和柱 效。没有EPC控制的GC：温度的改变载气线 速度也改变，在设定线速度时首先应确定分析 时所需温度（常使用柱起始温度），在步骤7 中选定相应物质进样1-2ul并按下式进行计算得 到线速度，调整柱头压直至得到所需的线速度 。u（平均线速度）=L（柱长）/tr(保留时间)。 推荐的平均线速度：氦气（30-40cm/sec）,氢 气（50-80 cm/sec）。有EPC的控制GC：可 以通过计算机工作站或GC键盘直接设定并能 维持恒定。需要做的是进行柱尺寸的校正，柱 内径可从柱信息表上获得，而长度需要进一步 校正。 安装步骤10：柱流测试： n对老化

12、后的柱进行空运行（不进样）获得 色谱图，起始温度40-50，以10- 20/min的升温速率升至老化温度并维持 10-15min。在谱图上应该不出现任何峰。 有峰出现表明受到污染，最常见的进样口 部分。 安装步骤11：运行测试样： n进样测试样品进一步了解系统性能，对不 同检测器有相应的测试样品。测试样品一 般在不同柱上都有响应并且常常是混合物 。对新柱而言色谱图不好则表明安装，操 作或仪器出了问题。在样品分析前必须解 决。 柱使用时应注意的几点: 为最大限度延长柱寿命,在分析完柱温应在100以下 待命;用隔垫封好柱两端保存在柱盒中,下次使用时切去 一小段防止进入柱中的隔垫碎些影响测定;化学物

13、质的 相容性,对键合的或交链的固定相能防水和有机溶剂, 无 机酸(HCL、H2SO4、H3PO4、HNO3等）和碱（KOH、 NaOH）会极大损害柱，一旦发生可截去1m;柱的冲洗, 非键合相的柱不能用溶剂冲洗,如DX-1,DX-2,DX-4,SE- 30,SE-52,SE-54,Carbowax,ov-351, Cyclodex-B, Cyclosil-B, HP-20, HP-101, HP-17,HP-Chiral ;限制温 度,柱给出的有最低和最高使用温度，最高使用温度有 两种，恒温使用的温度低，可长时间使用，在程序升温 使用的温度下一般不要超过10min. 怎样正确选择分流/不分流 进

14、样 n当感兴趣的组分在500ppm左右或更高时， 最好选择分流进样；而不分流进样则是GC 进行痕量分析的有效进样方式。 n要得到长期一致的结果，需要正确选择隔 垫、衬管和密封垫圈，并且要知道何时更 换。 n隔垫的寿命取决于进样的频率、针的质量 和隔垫的成分，隔垫漏气的征兆包括保留 时间增长或漂移、响应值减弱、柱头压力 减少并伴随着检测器信号噪音加大。 n隔垫被污染的征兆是和样品、溶剂、进样 隔垫或色谱柱无关的外来峰出现。 n在衬管上的活化点会吸附样品，会造成拖 尾并会大大降低灵敏度和再现性，在使用 不分流进样或在分析稍有极性的化合物时 一定要用脱活的衬管。但即使使用经过脱 活的衬管在开始时也可

15、能出现活性，此时 就要清洗衬管或更换。 n密封垫圈一般都在高温和惰性气流里进行 了老化处理，使用时其收缩作用达到密封 。 隔垫类型 n1、 流失和温度优化隔垫：可减少粒化，低流 失和高温分析时性能最佳，用于进样口温度高 达400，分析重烃混合物，通常在50100次 进样之后更换。 n2、 绿色隔垫：减少粒化，用于进样口温度低 于350，分析半挥发混合物，通常在 500100次进样之后更换 n3、 通用红色隔垫：低流失和长寿命的经济实 用型，用于进样口温度低于350，分析半挥 发混合物，通常在100次进样之后或出现漏气 时更换。 n4、 Merlin Microseal隔垫：超长寿命隔垫无 颗粒，用于中等色谱温度下的高通量、常规分 析，通常在2000次进样之后或出现漏气时更换 。 密封垫类型 n1、 镀金密封垫：比不锈钢密封垫惰性更强，适 合大多数不分流进样器的流量，用于不分流进样 ，或总流量低于200ml/min的分流进样，在分析物 信号降低或出现明显拖尾时更换。 n镀金密封垫，十字孔：比不锈钢密封垫惰性更强 ，适合大多数不分流进样器的流量，用于分流进 样，总流量大于200ml/min的分流进样，在分析物 信号降低或出现明显拖尾时更换。 衬管类型 n1、 分流：玻璃毛和锥形底部，提高了进样精度， 用于分流进样，特别是使用电子压力控制（EPC） 的进