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1、高压液相色谱法测定兔缺血再灌注肝脏ATP含量李晓晔柳巍吴红许兵。宋振顺。许自超(第四军医大学化学教研室西安710032)摘要用高压液相色谱法科定了肝脏缺血再灌注后ATP含量的变化。应用预防损伤的菏抽氯丙嚷和鼻博定后。免肝妊织ATP含量明显高于T-田药的对照担，说习兄钙离子桔抗荆有预防缺血再灌注损伤的作用，其作用机理与减少钙离子内流维持和促进细胞能量代谢的正常有关。美键词高压液相色谱缺血再灌注肝脏ATPDeterminationofATPintherabbitsliverwithischemiareperfusedhyHPLCLiXiaoyeLiuWeiWuHongXuBingSongZhens
2、hunXuZichao(13epaxtmeritofChemistry，FourthMiitwryMediealUniversityan710032)AbstractThechangealtexafionofATPafterliverischemiareperftmedwfl$InvestigatedusingHPLc，MrerChlorpromazinumandisopfinwereusedthecontentofATPintherabbitsliverbsignificantlyhighelthanthecontrastgroupwithoutdrugsCalciumantagonists
3、capreventinjuryfromiscbemiareper_fusedThefunctionmechanismcouldbeconcernedinreducingcalciumionfromouter-eelIintoinner-cell，maintainingandprcxnotingthebalanceofthecellenergymetabolismKeywordsHPLc，lschemiareperfused，LiverATP肝脏缺血后，由于能量代谢系统受损，组织生成ATP的能力下降，组胡ATP含量较正常时明显艟步。再灌注后在相当长时问内能量代谢不能完全恢复正常。因而，测定组织中
4、ATP含量，可作为观察缺血再灌注脏器损伤程度的一项指标，对了解难注期损伤的机理，判断预后有重要意义，为临床应用预防损伤的药物提供重要依据口J。测定组织ATP含量有荧光素酶法，组化法及高压液相色谱法。国内有应用荧光寨酵法的报道【3J】，但未见用丧相色谱法的报道。我们将Kamiike的方法作了改进。l实验11仪器：ryem1icamLC3高压液相色谱仪，ryeunieamLC3UV检测器，PyeunicamLC3高压输涟泵，PhilipsPM8281记录仪。12试剂：标准ATP粉剂(美国Stgrna公司产)、过氯酸(GR)，K20岛，NFhOH、磷酸二氢鼓、甲醇(皆为AR)。13色谱条件：色谱柱为
5、填充ODS柱(4250mm)，记录仪衰减范围为19rayUv检测器衰减范畴为008，波长254nm。流动相为005Mrs-tH2PO，流速为160mLmin，高压输液泵压力为80Bar。14溶液配制：141标准ATP溶液的配制：称取100mgATP标准样品，溶解于双重蒸馏水中，配制500mL溶液。浓度为20000“gmL，作为外标母涟备用。142005molLN心H2P04溶液配制：称取N心H2P04上海师范文学化学囊。第四军医大学西索医院普通外科285759溶于双重蒸馏水中，使总量至1000mL，用NHOH调节pH至60，过滤后超声波赶气泡，备用。15组织ATP的萃取：甩液氨预玲的取样钳，钳
6、取缺血再灌注兔肝组织约0509，立即称重，并置棱氯中过夜。用液氮预冷的研钵将组织块研碎，加入20倍体积的04molLHCl04制取匀浆，于4C，4000rrain离心5min，取上清液，用25tool1Kzo丑调pH至76，再于4，4000rpm离心5min，取上清液待测。15组织提取液中ATP浓度的计算方法：由下式计算ATP浓度。、样品浓度=荠蒙篷菩袭x外标浓度2结果与讨论21ATP浓度和面积的线性关系：配翩浓度100O啡mL、5000r幢mLZ500旭mLt000Ve以100“ArP浓度的溶液(由外标母液稀释)，将每份样品用微量注射器_吸取10001进撵。重复进样三次进行色谱分析，结果见图
7、1，浓度与峰面积呈很好的线性关系。22精密度试验：取混合标准ATP溶糠1000山，重复进样5次进行色谱分析平均ATP峰面积为8559118mm2，相对标准偏差137，见表1。重现性和精密度比较好。衰1方法的密度!：!望!兰蜂蕾帆(Tr#)8543皓66舯14盯87帖啦8559118137AlP裱厦(pg止)图I浓度与峰面积的线性关系23回收试验：配制浓度为5000“gmL的外标ATP标准溶液，分三管进行实验，第一管加1OOmL外标ATP溶液和100mL蒸馏水，第二管加100mL待测样品溶液和100mL外标ATP镕藏，第三管加八l，OOraL待测样品溶液和100mL蒸馏水，各管吸取1000“l进
8、样进行色谱分析，结果见表2。衰2回收试验i2324缺血再灌注兔肝组织ATP含量测定：对15倒缺血1h再麓注24h的兔肝组织ATP含量进行了测定，结果表明，应用预防损伤的药物氯丙嚎和异博定后，兔肝组织ATP含量明显高于不用药的对照组说明钙离子拮抗荆有预防缺血再灌注损伤的作用，其作用机理与磕少钙离子内流维持和促进细胞能量代谢的正常有关。回收率=趔龃蚣幕裂露豁幽鼬盘100=96381外标ATP2鬼肝组簟【AfPIJJ_一时问(分)围2免肝粗鳃ATP色谱犀图2为免肝组织ATP的色谱图，计算其浓度为2064484725“gg组织，平均为5166910235#gig组织。与Warnick等报道的结果基本一
9、致【”。参考文献lJFon妇EurSurgRes1985；17912cTWarckCanJBiochem1981；59：1163WK曲伍bFWatm惜beTHashimotdt眦aIJBiodlem1982；9i(4)：11349-13564李立孙炳荣，生物也学与生橱物理进晨1980；6；6062酶催化动力学光度法快速测定蔬菜中的农药残留毒性黄文风蔡琪林而立黄敏卢子明(福建省测试技术研究所，福州350003)摘要皋文攫道了一种蔬堇中农药残留毒性的快速夏4it的牲驯方法，齄剥在白抒研制的小型专用便携式农薛茂留毒性快速测定仪上进井：证馨通过比较特定的酶催化显色反应的动力学曲线，直接显示有机磷和氯基
10、甲醴穑类农药对乙酰胆碱酶的押制丰设此求得农药寰留毒性水平，皋方法对裴敌畏的鞋出幢曲22x10-3pg，m乙。关词酶押制丰；农药残毒有机磷氯基甲畦酯RapidDeterminationoftheToxicityorPesticideResiduesinVegetablesbyEnzymeCatalyticDynamicSpectrophotomertyHtmngWeMengCdQiLinErliHuangMinLuZiming(FujlanInstituteofTe蚰g1khIo舒，F皿hol】350003)AbstractInthispaperarapidandsensitiveforthed
11、eterminationofthetoxicityofpesticideresiduesinthevegetableswBreportedThisdeterminationwcarriedoutwithaportablepesticidedetectormadebymErlm，Whichcoulddirectlydisplaytheinhibitionrateoforganoph“phatvsandctrbahlate$pesticidetoacetylcholinesterase(AChE)，thenthelevelofthetoxicity。fpestlcideresiducsevahatedThishadadeteetlonlimit0f22101pgmLfortheirmectieideDDVP脚-岫enzymeinhihitlonrate，thetoxlcitFofpesticider商dues，organopfiosphates，earbamates近年来由于食用含农药残毒的蔬菜，引起农药中毒的事件时有发生，各国都在加强对农药施用的管理及加强对农药残留的监测。为了防止困滥用农药引起的有机磷及氨基甲酸酯类农药的急性中毒，人们希望能有一种操作简便、快速、灵敏度高的农残测定法。使用酶抑制法拉测农药残留量，从50年代开始陆续有29j|i
